多囊卵巢綜合征患者血清中PEDF 和超敏C 反應(yīng)蛋白的表達(dá)及其相關(guān)性研究

程芙蓉 葉小姣 施江平

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是最常見的婦科內(nèi)分泌異常性疾病之一，也是導(dǎo)致女性不孕的主要因素，多見于青春期和育齡期女性(12 ～45 歲)，全世界發(fā)生率約為5% ～10%［1］。近年來，慢性炎癥反應(yīng)及代謝相關(guān)因子在PCOS 發(fā)病中的作用越來越多地引起研究者的重視。有資料顯示，PCOS 患者體內(nèi)慢性炎癥因子水平有升高的趨勢。

色素上皮衍生因子(PEDF)是一種分泌性糖蛋白，屬于絲氨酸蛋白酶抑制基因超家族，具有抗新生血管生成、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)及抗炎等多種生物學(xué)功能［2］。已有報道發(fā)現(xiàn)PEDF 與代謝綜合征密切相關(guān);血清PEDF 在2 型糖尿病患者合并胰島素抵抗時顯著增高。而超敏C 反應(yīng)蛋白(hs -CRP)作為C 反應(yīng)蛋白的一種，在多種急慢性炎癥性疾病的早期即有升高的表現(xiàn)。目前hs - CRP 已被認(rèn)可作為敏感度指標(biāo)，提示心肌梗死及組織損傷、感染等機(jī)體病理狀態(tài)中的意義。國外已有研究發(fā)現(xiàn)hs -CRP 在PCOS 患者的表達(dá)高于健康婦女。但國內(nèi)對PCOS 患者體內(nèi)PEDF 和hs-CRP 相關(guān)性的報道較少，本試驗主要研究PEDF 和hs-CRP 在PCOS 患者血清中的變化，并對這兩項指標(biāo)之間的相關(guān)性進(jìn)行了探討。

資料與方法

1.基本資料:選擇2012 年6 月～2013 年6 月來筆者醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診的PCOS 患者80 例，其中無肥胖PCOS 患者(BMI≤25kg/m2)40 例，為PCOS1 組;肥胖PCOS 患者(BMI ＞25kg/m2)40 例，為PCOS2 組。另外選取同時間段來筆者醫(yī)院體檢的健康女性60 例，其中30 例正常體質(zhì)量者(BMI≤25kg/m2)，納入對照1 組;30 例肥胖者(BMI ＞25kg/m2)，納入對照2 組。所有入選的PCOS 患者及健康對照者均無其他內(nèi)分泌疾病，無近期感染史，近3 個月內(nèi)無激素類藥物服用史。

2.方法:(1)診斷標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)2003 年歐洲人類生殖和胚胎與美國生殖醫(yī)學(xué)學(xué)會共同推薦的標(biāo)準(zhǔn):①稀發(fā)排卵或無排卵;②臨床有高雄激素特征表現(xiàn)或?qū)嶒炇覚z查提示高雄激素血癥;③B 超示一側(cè)或雙側(cè)卵巢見≥12 個直徑2 ～9mm 的未成熟卵泡。符合以上3 項中任何2 項者，即可診斷為PCOS。(2)標(biāo)本收集和內(nèi)分泌激素測定:所有試驗對象于月經(jīng)周期2～5 天，抽取空腹外周靜脈血6ml。其中3ml 送筆者醫(yī)院檢驗科，以化學(xué)發(fā)光法檢測標(biāo)本血清中促卵泡激素(FSH)、促黃體激素(LH)、雌二醇(E2)、睪酮(T)及空腹胰島素(FINS)水平。另3ml 在室溫條件下靜置非抗凝管中，2000g 離心，取上層血清置于-80℃?zhèn)溆谩?3)血清PEDF 和hs-CRP 的檢測:采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定PCOS 患者及健康對照者血清中PEDF，試劑盒購自上海廣銳生物公司。使用96 孔板，嚴(yán)格按照說明書要求的步驟進(jìn)行操作。以酶聯(lián)免疫檢測儀(芬蘭雷勃)在波長450nm 處讀取標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本各孔OD 值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各標(biāo)本PEDF 的濃度。使用全自動生化分析儀(美國貝克曼)，采用免疫比濁法檢測血清中hs-CRP。

3.統(tǒng)計學(xué)方法:使用SPSS 14.0 軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，以t 檢驗行樣本均數(shù)間的比較，以Pearson 相關(guān)分析統(tǒng)計兩變量間相關(guān)關(guān)系，以P ＜0. 05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.一般情況和內(nèi)分泌激素水平:入選的80 例PCOS 患者和60 例正常對照者，年齡18 ～39 歲，各組平均年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異(表1)。PCOS1 組和PCOS2 組與各自對應(yīng)的對照組在BMI 值上也無統(tǒng)計學(xué)差異。如表1 所示，PCOS1 組和PCOS2 組患者體內(nèi)的FINS、FSH、LH 和T 值均顯著高于對照1 組和對照2 組，而E2水平在各組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。

表1 各組一般情況和內(nèi)分泌激素水平統(tǒng)計(±s)

表1 各組一般情況和內(nèi)分泌激素水平統(tǒng)計(±s)

項目 PCOS1 組 對照1 組 P PCOS2 組 對照2 組P.05 BMI(kg/m2) 23.1 ±1.6 22.9 ±1.3 ＞0.05 26.3 ±1.1 26.5 ±1.5 ＞0.05 FINS(mIU/L) 10.6 ±2.7 6.4 ±3.1 ＜0.05 12.1 ±3.2 7.2 ±3.4 ＜0.05 FSH(mIU/ml) 28.4 ±1.7 17.9 ±1.7 ＜0.05 31.6 ±2.1 20.3 ±1.6 ＜0.05 LH(IU/L) 16.3 ±3.4 9.1 ±2.2 ＜0.05 19.2 ±3.6 10.1 ±3.1 ＜0.05 E2(ng/L) 59.2 ±14.3 65.9 ±17.2 ＞0.05 56.8 ±18.5 69.7 ±20.9 ＞0.05 T(ng/dl) 38.6 ±12.5 9.4 ±2.6 ＜0.05 43.2 ±14.2 10.3 ±4.1 ＜0.05年齡(歲) 25.2 ±3.8 26.1 ±4.0 ＞0.05 25.9 ±3.6 25.4 ±3.9 ＞0

2.各組血清中PEDF 和hs-CRP 水平:PCOS1 組和PCOS2 組血清中PEDF 表達(dá)增加，分別為20.2 ±5.8μg/ml 和25. 9 ±4. 2μg/ml，明顯高于對照1 組(11.3 ±2.4μg/ml)和對照2 組(13.8 ±3.7μg/ml)(P ＜0.05);而PCOS1 組與PCOS2 組之間PEDF 水平無明顯差異(P ＞0.05)。hs -CRP 在PCOS2 組血清中的表達(dá)明顯高于PCOS1 組(P ＜0.05)，分別為43.6 ±6.1mg/L 和26.2 ±3.5mg/L;而兩對照組hs-CRP 的表達(dá)均在正常范圍內(nèi)(＜10mg/L)，詳見表2。

表2 各組血清中PEDF 和hs-CRP 的表達(dá)(±s，μg/ml)

表2 各組血清中PEDF 和hs-CRP 的表達(dá)(±s，μg/ml)

與PCOS 1 組比較，#P ＜0.05

項目 PCOS1 對照1 PCOS2 對照2 PEDF 20.2 ±5.8 11.3 ±2.4 25.9 ±4.2 13.8 ±3.7 hs-CRP 26.2 ±3.5 4.6 ±0.8 43.6 ±6.1#6.2 ±1.9

3.PCOS 患者體內(nèi)PEDF 和hs -CRP 的相關(guān)性:為研究PCOS 患者體內(nèi)PEDF 的升高是否與hs-CRP具有相關(guān)性，筆者分別對PCOS 1 組和PCOS 2 組的PEDF 和hs-CRP 之間做了Pearson 相關(guān)統(tǒng)計分析。筆者發(fā)現(xiàn)，在正常體質(zhì)量的PCOS 患者(PCOS 1 組)和肥胖PCOS 患者(PCOS 2 組)，其PEDF 水平與hs-CRP 水平呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r 分別為0.452和0.478(P ＜0.05)。

討 論

多囊卵巢綜合征常合并有多種代謝綜合征的表現(xiàn)，如肥胖、血脂異常、高胰島素血癥和胰島素抵抗。目前認(rèn)為PCOS 是一個復(fù)雜的多系統(tǒng)綜合征，其發(fā)病由多種因素共同引起，包括內(nèi)分泌及代謝紊亂引起激素水平異常、卵巢調(diào)節(jié)失控以及慢性炎癥致患者體內(nèi)炎癥因子異常增高。hs-CRP 作為一種典型、敏感的炎癥標(biāo)志物，已經(jīng)被證實(shí)可以用于心肌梗死、腦卒中和血管性疾病的早期預(yù)測。有研究發(fā)現(xiàn)，hs-CRP 在PCOS 患者體內(nèi)的水平明顯高于健康婦女，筆者的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)，而且，筆者發(fā)現(xiàn)hs-CRP 在體質(zhì)量異常(即肥胖)的PCOS 患者中增加更為明顯(表2)［3］。

色素上皮衍生因子(PEDF)作為一種分泌型糖蛋白，含有418 個氨基酸殘基，分子質(zhì)量約為46.7kDa，其編碼基因位于人第17 號染色體短臂末端。PEDF最早被認(rèn)為是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，由Tombran -Tink等首次從胎兒視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的體外條件培養(yǎng)液中分離得到。近年來，人們發(fā)現(xiàn)PEDF 也可由脂肪細(xì)胞分泌，并在1 型糖尿病和2 型糖尿病患者體內(nèi)，其表達(dá)與甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平呈正相關(guān)。動物實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，在單純肥胖小鼠體內(nèi)，PEDF 通過抗氧化應(yīng)激促進(jìn)脂肪組織的脂解，從而導(dǎo)致脂肪的異常沉積并降低小鼠對胰島素的敏感度［4］。歐洲和日本的臨床試驗發(fā)現(xiàn)，在研究人群分別為白種人和黃種人的代謝綜合征(MS)患者體內(nèi)，PEDF 顯著增高［5，6］。另外，國內(nèi)及國外均有報道發(fā)現(xiàn)PEDF 在PCOS 患者的表達(dá)高于正常婦女，且與胰島素抵抗呈正相關(guān)［7，8］。因此，有學(xué)者認(rèn)為PEDF 可作為預(yù)測PCOS 患者胰島素抵抗的亞臨床指標(biāo)之一。目前，國內(nèi)對我國PCOS 患者體內(nèi)PEDF 變化的報道十分有限，其與慢性炎癥之間的關(guān)系也未十分清楚。筆者的研究發(fā)現(xiàn)，無論是在正常體質(zhì)量的PCOS 還是BMI 異常的PCOS，PEDF 均有顯著增高。Crowe［4］等認(rèn)為，PEDF 的表達(dá)正相關(guān)于BMI。筆者的結(jié)果表明，雖然PEDF 的表達(dá)在肥胖PCOS 患者有增加的趨勢，但與正常體質(zhì)量的PCOS 患者相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P ＞0.05)。筆者認(rèn)為該結(jié)果的不一致性在于Crowe 等［4］實(shí)驗小組是通過肥胖小鼠這一實(shí)驗?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行的研究，而筆者是直接對PCOS 患者進(jìn)行的臨床試驗，這也是國內(nèi)首次對PCOS 患者體內(nèi)的PEDF 水平變化的報道。

PEDF 與hs-CRP 呈正相關(guān)揭示了PCOS 發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性。PEDF 可促進(jìn)胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展，hs-CRP 在PCOS 患者的持續(xù)升高又提示了慢性炎癥的存在。目前認(rèn)為，慢性炎癥與胰島素抵抗在PCOS 病情的發(fā)生與發(fā)展中相互促進(jìn)，互為因果?？傃灾?，PEDF 有望成為PCOS 病情評估的又一項重要指標(biāo);而對PEDF 和hs -CRP 之間關(guān)系的進(jìn)一步研究，將有助于深化對PCOS 發(fā)病的認(rèn)識。

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