P63 蛋白在宣威與非宣威地區(qū)非小細(xì)胞肺癌表達(dá)的對比研究

劉 君 李高峰 陳 楠 彭 俊 陳新隆 王 平 毛 新 彭 浩 張 勇 向旭東 寧顯谷

近些年來我國的肺癌發(fā)生率逐年增加，全國腫瘤登記中心發(fā)布的《2012 中國腫瘤登記年報》顯示，肺癌居全國惡性腫瘤發(fā)生率第1 位，病死率第1 位。而云南是癌癥高發(fā)區(qū)之一，云南省的肺癌發(fā)生率是全國發(fā)生率的兩倍。云南宣威地區(qū)有地區(qū)特異性，其女性肺癌病死率居全國第1 位［1］。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，研究宣威與非宣威地區(qū)非小細(xì)胞肺癌P63 蛋白的表達(dá)，探討其與生物學(xué)行為的關(guān)系，并將宣威組與非宣威組P63 蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行比較，以探究P63 的表達(dá)在宣威地區(qū)有無特異性，探究宣威肺癌高發(fā)與P63 的表達(dá)是否有關(guān)。

材料與方法

1.臨床資料:(1)實驗組:收集2012 年10 月～2013 年6月云南省第一人民醫(yī)院(昆明理工大學(xué)附屬昆華醫(yī)院)胸外科手術(shù)切除的30 例宣威地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者的癌組織和正常肺組織(正常組織規(guī)定為:距癌組織邊緣＞5cm)。在30 例患者中，男性16 例，女性14 例，年齡38 ～70 歲，平均年齡55.6 歲;鱗癌13 例，腺癌17 例;Ⅰ期9 例，Ⅱ期15 例，Ⅲ期6例;高分化9 例，中分化14 例，低分化7 例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的患者16 例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的患者14 例。(2)對照組:同期30 例非宣威地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者的癌組織和正常肺組織(正常組織規(guī)定為:距癌組織邊緣＞5cm)。在30 例患者中，男性14 例，女性16 例，年齡36 ～72 歲，平均年齡56.2歲;鱗癌14 例，腺癌16 例;Ⅰ期10 例，Ⅱ期16 例，Ⅲ期4 例;高分化10 例，中分化12 例，低分化8 例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的患者13 例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的患者17 例。每例均有詳細(xì)的病歷資料及手術(shù)記錄，術(shù)前檢查所有患者均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，全部肺癌病例術(shù)前均未接受放療或化療。

2.方法:所有標(biāo)本常規(guī)取材，甲醛固定，石蠟包埋，3μm 厚連續(xù)切片;即用型P63 蛋白鼠抗人單克隆抗體，免疫組化法。細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核出現(xiàn)棕色顆粒為陽性細(xì)胞，隨機選擇4 個高倍視野，計數(shù)100 個細(xì)胞;其中P63 染色呈深棕色、大顆粒的陽性細(xì)胞＞50%者為(+++)，淺棕色、小顆粒的陽性細(xì)胞10%～50%為(++)，陽性細(xì)胞＜10%為(+)。

3.統(tǒng)計學(xué)方法:數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0 軟件處理，行χ2檢驗，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.P63 蛋白在癌和正常組織中的表達(dá)情況:P63蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率為81. 67%(49/60)與正常肺組織5.00%(3/60)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，表1)。

2.P63 蛋白在宣威、非宣威肺組織中的表達(dá):P63蛋白在鱗癌組織中的表達(dá)，明顯高于腺癌組織(P =0.028)及正常組織(P =0.000)中的表達(dá)。宣威地區(qū)，P63 蛋白在鱗癌組織中的陽性表達(dá)率高于腺癌組織，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =0.259);非宣威地區(qū)，P63 蛋白在鱗癌組織中的陽性表達(dá)率同樣高于腺癌組織，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =0.058);而非宣威鱗癌組織中的陽性表達(dá)率高于宣威鱗癌組織，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =0.648);宣威腺癌組織與非宣威腺癌組織中的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =1.000，表2)。P63 蛋白在鱗癌中的表達(dá)明顯高于腺癌或許與P63 蛋白受表皮生長因子的下游通路——磷酰肌醇激酶3 調(diào)節(jié)有關(guān)［2］。

表2 P63 蛋白在宣威、非宣威肺組織中的表達(dá)

3.P63 蛋白表達(dá)與臨床分期的關(guān)系:P63 蛋白在癌組織中陽性表達(dá)率隨TNM 分期增加呈上升趨勢，在分期晚的病人中陽性表達(dá)率較高，這與宋宇［3］的研究結(jié)果一致。Ⅰ期與Ⅱ期患者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.073)，Ⅱ期與Ⅲ期患者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.402)，Ⅰ期與Ⅲ期患者比較，Ⅲ期患者P63 蛋白表達(dá)陽性率明顯高于Ⅰ期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.019)。P63 蛋白表達(dá)在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中宣威組與非宣威組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05，表3)。

表3 P63 蛋白表達(dá)與臨床分期的關(guān)系

4.P63 蛋白表達(dá)與組織分化程度的關(guān)系:P63 蛋白在癌組織中陽性表達(dá)率與組織分化程度呈負(fù)相關(guān)，在分化低的患者中表達(dá)率較高。低分化癌組織中P63 蛋白的陽性表達(dá)率高于中分化癌組織，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =0.445);中分化癌組織中P63 蛋白的陽性表達(dá)率顯著高于高分化癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.031);低分化癌組織中P63 蛋白的陽性表達(dá)率顯著高于高分化癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005);高、中、低分化癌組織宣威組與非宣威組相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05，表4)。

表4 P63 蛋白表達(dá)與組織分化程度的關(guān)系

5.P63 蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:P63 蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，P63 蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為89.66%，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為41. 94%(P =0.000，P ＜0.05)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。P63 蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率，宣威組與非宣威組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =1.000)。P63 蛋白在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率，宣威組與非宣威組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =0.473)。陳洪雷等［4］的研究同樣發(fā)現(xiàn)P63 蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(表5)。

6.P63 蛋白表達(dá)與性別的關(guān)系:P63 蛋白的表達(dá)與性別無關(guān)(P=1.000)。P63 蛋白的表達(dá)宣威男性與非宣威男性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =1.000)。P63 蛋白的表達(dá)宣威女性與非宣威女性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P =1.000)。這與宋宇［3］的研究結(jié)果一致(表6)。

表6 P63 蛋白表達(dá)與性別的關(guān)系

討 論

1997 年，Schmale 等［5］經(jīng)探索發(fā)現(xiàn)了鼠KET。這是一種與P53 高度同源的蛋白。而人的P63 蛋白基因和P63 蛋白在1998 年被一些研究所發(fā)現(xiàn)［6］。目前的研究提示，P63 蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有顯著的相關(guān)性［7］。P63 蛋白作為P53 家族的新成員，是一種核轉(zhuǎn)錄因子，它與P53 蛋白具有高度同源性，可以通過激活P53 的靶基因，參與P53 蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。那么P63 是不是和P53 一樣，是一種抑癌基因呢?曾經(jīng)是有爭論的［9］。后來的研究發(fā)現(xiàn)，P63 生物學(xué)功能的表現(xiàn)，是與它所表達(dá)的兩種亞型蛋白的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)的，如P63 表達(dá)TAp63 亞型，因其能激活或抑制P53 的靶基因，從而發(fā)揮腫瘤抑制因子的功能［10］;如P63 表達(dá)ΔNp63 亞型，因其缺乏TA 區(qū)而不能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄，而不能發(fā)揮腫瘤抑制因子的功能，但其卻有DNA 結(jié)合域，可競爭DNA 結(jié)合位點，從而發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)的功能，因此具有潛在癌基因的功能［10，11］。宣威地區(qū)肺癌發(fā)病率顯著高于非宣威地區(qū)，本實驗通過比較P63 蛋白在宣威地區(qū)與非宣威地區(qū)非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，探究P63 蛋白的表達(dá)在宣威地區(qū)有無特異性，以探究宣威肺癌高發(fā)的原因。本研究得出P63蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率為81. 67%(49/60)與正常肺組織(3/60)相比差異有顯著意義，P ＜0.05，提示P63 在非小細(xì)胞肺癌中作為癌基因而不是抑癌基因起作用，與Choi 等［12］研究結(jié)果類似。P63 的陽性表達(dá)率明顯高于正常組織，充分說明了P63 與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展具有密切的相關(guān)性。

實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鱗狀細(xì)胞癌與腺癌相比較，P63蛋白在鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05，這提示P63 蛋白與鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)系密切。陳洪雷等［4］應(yīng)用免疫組化法研究發(fā)現(xiàn)P63 蛋白在人非小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率為80.0%，P63 蛋白表達(dá)與肺癌的組織學(xué)類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在肺鱗癌中陽性表達(dá)率顯著高于腺癌，與本實驗結(jié)果一致。Di Como 等［13］發(fā)現(xiàn)P63 主要表達(dá)于基底細(xì)胞和鱗癌，轉(zhuǎn)化細(xì)胞癌，而不是在腺癌包括乳腺和前列腺等，本文研究結(jié)果與之一致。同時在TNM 分期中，TNM 分期越晚，P63 蛋白表達(dá)越強。P63 蛋白的表達(dá)與組織分化程度負(fù)相關(guān)，說明P63 蛋白的高表達(dá)常提示非小細(xì)胞肺癌惡性程度高。P63 蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況正相關(guān)，則說明P63 蛋白高表達(dá)常提示易于淋巴轉(zhuǎn)移。所以P63 蛋白的高表達(dá)提示預(yù)后差，其可用于判斷非小細(xì)胞肺癌的惡性程度以及預(yù)后［3］。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P63 蛋白在非小細(xì)胞肺癌中在相同病理類型、分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及性別的陽性表達(dá)率，宣威組與非宣威組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明雖然P63 蛋白在非小細(xì)胞肺癌中作為癌基因而不是抑癌基因起作用，但是P63 蛋白的表達(dá)在宣威并無地區(qū)特異性，說明P63 蛋白的表達(dá)并不是宣威肺癌高發(fā)的原因。

P63 蛋白在非小細(xì)胞肺癌中呈高表達(dá)，提示P63蛋白與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展有密切的相關(guān)性。P63 蛋白的表達(dá)可能與非小細(xì)胞肺癌的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與性別無關(guān)。P63 蛋白在鱗癌中的表達(dá)顯著高于腺癌，有助于鑒別診斷鱗癌與腺癌。非小細(xì)胞肺癌中P63 蛋白在相同病理類型、分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及性別的陽性表達(dá)率，宣威組與非宣威組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這表明P63 蛋白的表達(dá)在宣威并無地區(qū)特異性，并不是宣威肺癌高發(fā)的原因。

1 呂任齊，趙體德.云南省-縣市肺癌死亡率趨勢分析［J］. 中國腫瘤，2002，11(12):701

2 Morgunkova A. The p53 gene family:control of cell proliferation and developmental programs［J］. Biochemistry，2005，70(9):321 -323

3 宋宇. Survivin、p53、p63、p73、p21 在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義［D］.蘇州:蘇州大學(xué)，2007

4 陳洪雷，陳福春，王敏，等. 人非小細(xì)胞肺癌組織p63 和p73 的表達(dá)及意義［J］. 腫瘤防治雜志，2003，10(10):1015 -1018

5 Schmale H，Bamberger C. A novel protein with strong homology to the tumor suppressor p53［J］. Oncogene，1997，15(11):1363 -1367

6 Fishman SJ，Mulliken JB. Hemangiomas and vascular malformations of infancy and childhood［J］. Pediatr Clin North AM，1993，40(6):1177 -1200

7 van Bokhoven H，Brunner HG. Splitting P63［J］. Am J Hun Genet，2002，71(1):1 -13

8 張超，代紅艷，卿晉，等. P63 基因的研究進(jìn)展［J］. 皮膚病與性病，2012，34(3):142 -144

9 Sallone C，Caggese C，Lanare C，et al. Molecular clock and gene function［J］. Journal of Molecular Evolution，2003，57(1):277 -285

10 Mangiulli M，Valletti A，CAratozzolo MF，et al. Identification and functional characterization of two new transcriptional variants of the p63 gene［J］. Nucleic Acids Res，2009，37(18):6092 -6104

11 Weber A，Langhanki L，Schutz A，et al. Expression profiles of p53，p63 and p73 in benign salivary gland tumors［J］. Virchows Arch，2002，441(5):428 -436

12 Choi HR，Batsakis JG，Zhan F，et al. Differential expression of p53 gene family members p63 and p73 in head and neck squamous tumorigenesis［J］. Hum Pathol，2002，33(2):158 -164

13 Di Como CJ，Urist MJ，Babayan I，et al. P63 expression profiles in human normal and tumor tissues［J］. Clin Cancer Res，2002，8(2):494 -501