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      RP-HPLC 法測定黃芪及玉屏風(fēng)顆粒中4 種異黃酮類成分

      2014-01-13 09:21:28戴衍朋沈秀娟孫立立
      中成藥 2014年8期
      關(guān)鍵詞:芒柄毛蕊屏風(fēng)

      周 倩, 李 瑩 , 戴衍朋, 沈秀娟, 孫立立

      (山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟(jì)南 250014)

      黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. var. mongholicus (Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus (Fisch)Bge.的干燥根[1]。黃芪性溫,味甘,歸肺、脾經(jīng),具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌的功效,為臨床經(jīng)典補(bǔ)益中藥。玉屏風(fēng)顆粒是以黃芪為主藥的經(jīng)典方劑,具有益氣、固表、止汗等功效,在改善免疫力方面具有較顯著的效果[2-3]。黃芪主要成分包括皂苷、黃酮、多糖、氨基酸等[4-8],其中黃酮類成分文獻(xiàn)報(bào)道具有顯著的預(yù)防和治療心血管疾病,抗氧化,抗衰老以及增強(qiáng)機(jī)體免疫等功能[9],為黃芪主要活性成分之一。《中國藥典》2010 年版僅對黃芪黃酮中毛蕊異黃酮苷的量進(jìn)行了規(guī)定[1],對玉屏風(fēng)顆粒中黃酮類成分未作要求。通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),目前研究中對玉屏風(fēng)制劑中黃芪黃酮類成分進(jìn)行定量測定的報(bào)道也較少[10-11]。本實(shí)驗(yàn)通過研究建立了黃芪飲片及其復(fù)方玉屏風(fēng)顆粒中毛蕊異黃酮、芒柄花素、毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷4 種黃酮類成分的定量測定方法。一方面可為黃芪飲片及其制劑的質(zhì)量控制提供更全面的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo),同時(shí)通過對黃芪飲片與玉屏風(fēng)顆粒中各成分的量比較,考察復(fù)方配伍對黃芪中黃酮類成分提取率的影響。

      1 儀器和試藥

      1.1 儀器 Waters600 高效液相色譜儀,996 二極管陣列檢測器,十萬分之一電子天平 (Sartorius R200D,德國);HH-4 型數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市晶玻試驗(yàn)儀器廠);RE-2000 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。

      1.2 試藥與試劑 乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。毛蕊異黃酮苷 (批號120312)、芒柄花苷(批號120415)、毛蕊異黃酮(批號120519)、芒柄花素(批號120530)均購自上海麗臣商貿(mào)有限公司,純度均>98%。

      1.3 供試樣品 黃芪飲片,產(chǎn)地甘肅。經(jīng)本院中藥資源開發(fā)研究室林慧彬研究員鑒定為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. Var.mongholicus (Bge.)Hsiao 或膜莢黃芪Astragalusmembranaceu s (Fisch.)Bge 的干燥根。市售玉屏風(fēng)顆粒,生產(chǎn)廠家為廣東環(huán)球制藥有限公司,批號分別為121216 和130313。

      2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

      2.1 玉屏風(fēng)顆粒制備 照《中國藥典》2010 年版收載玉屏風(fēng)顆?!局品ā宽?xiàng)下方法制備:取防風(fēng)200 g,酌予碎斷,提取揮發(fā)油,蒸餾后水液另器收集;藥渣及其余二味 (黃芪600 g,炒白術(shù)200 g)加水煎煮二次,第一次1.5 h,第二次1 h,合并煎液,濾過,濾液濃縮至適量,加乙醇至含醇量為70%,攪拌,靜置,濾過,濾液濃縮至為清膏,加輔料制成顆粒,干燥,放冷,噴加上防風(fēng)揮發(fā)油,混勻,制成約500 g,即得。

      2.2 色譜條件[12]Phenomenex Luna C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)為流動相梯度洗脫(0→8 min,20%A→30%A;8→16 min,30%A→45%A;16→20 min,45% A →60% A;20 →23 min,60% A →100% A;23 →30 min,100% A);體 積 流 量1.0 mL/min;檢測波長251 nm,柱溫25 ℃。

      2.3 對照品溶液的制備 分別精密稱取各對照品適量,置同一量瓶中,加甲醇制成含毛蕊異黃酮苷0.066 mg/mL、芒柄花苷0.033 mg/mL、毛蕊異黃酮0.035 mg/mL、芒柄花素0.017 mg/mL 的混合溶液。

      2.4 樣品溶液制備 取黃芪粉末(過40 目篩)約1 g,精密稱定,置圓底燒瓶中,精密加入甲醇50 mL,加熱回流提取40 min,放冷,再稱定質(zhì)量,用甲醇補(bǔ)足失減質(zhì)量,搖勻,濾過,濾液減壓回收至干,殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL量瓶中,混勻,過0.45 μm 微孔濾膜,即得黃芪供試品溶液。

      取玉屏風(fēng)顆粒約1 g,精密稱定,同法制成玉屏風(fēng)顆粒供試品溶液。

      2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在上述色譜條件下,分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL 注入液相色譜儀,測定。結(jié)果對照品峰與其他峰均可達(dá)到基線分離,且保留時(shí)間適中。供試品保留時(shí)間和峰形均與對照品一致,說明該分析條件良好。見圖1。

      2.6 線性關(guān)系考察 取對照品溶液,進(jìn)樣量依次為2、4、8、10、12 μL,測定峰面積,以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程,毛蕊異黃酮苷為Y =13 429.66X +47.60,r =0.999 6,線性范圍0.132 ~0.792 μg;芒柄花苷為Y = 20 871.58 X - 133.61,r =0.999 3,線性范圍0.066 ~0.396 μg;毛蕊異黃酮為Y=25 316.25X-12.56,r =0.999 8,線性范圍0.07 ~0.42 μg;芒柄花素為Y = 32 969.97X -37.21,r=0.999 9,線性范圍0.034 ~0.204 μg。

      2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10 μL,連續(xù)進(jìn)樣5 次,測定峰面積值,結(jié)果毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素峰面積的RSD 分別為0.9%、1.1%、1.0%、0.8% (n =5)。表明儀器精密度良好。

      圖1 HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

      2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取黃芪供試品溶液和玉屏風(fēng)顆粒各10 μL,分別于0、2、4、8、12 h 進(jìn)行測定。結(jié)果黃芪中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素峰面積的RSD 分別為2.1%、2.6%、1.6%和1.5%。玉屏風(fēng)顆粒中4 個(gè)成分峰面積的 RSD 依次為 2.0%、2.1%、2.1% 和1.8%。表明兩樣品均在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

      2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批黃芪樣品和玉屏風(fēng)顆粒6 份,分別制備供試品溶液,依法測定,結(jié)果黃芪中毛蕊異黃酮苷RSD 為1.8%,芒柄花苷RSD為2.3%,毛蕊異黃酮RSD 為2.0%,芒柄花素RSD 為1.8%。玉屏風(fēng)顆粒中4 個(gè)成分的RSD 分別為2.2%、2.0%、2.3%和2.3%。表明本法重復(fù)性良好。

      2.10 回收率試驗(yàn) 取已知含有量的黃芪樣品和玉屏風(fēng)顆粒6 份,各0.5 g,精密稱定,分別精密加入各對照品適量,依法提取測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1 和表2。

      表1 黃芪飲片加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab.1 Results of recovery tests for Astragali Radix (n=6)

      表2 玉屏風(fēng)顆?;厥章试囼?yàn)結(jié)果(n=6)Tab.2 Results of recovery tests for Yupingfeng Granules(n=6)

      2.11 樣品測定 精密吸取上述樣品及對照品溶液各10 μL,注入液相色譜儀,照上述色譜條件依法測定,計(jì)算,結(jié)果見表3,市售玉屏風(fēng)顆粒測定結(jié)果見表4。

      表3 黃芪及自制復(fù)方中黃酮類成分測定結(jié)果Tab.3 Determination results of Astragali Radix and homemade compounds

      表4 市售玉屏風(fēng)顆粒中黃酮類成分測定結(jié)果Tab.4 Determination results of Yupingfeng Granules commercially available

      3 小結(jié)與討論

      本研究前期對色譜條件進(jìn)行了考察,通過對乙腈-水和乙腈-0.1%磷酸等流動相系統(tǒng)的比較,不同柱溫下分離效果的考察,以及不同檢測波長比較,確定以乙腈-0.1%磷酸作為流動相梯度洗脫,檢測波長251 nm,柱溫25 ℃。在優(yōu)選的色譜條件下,各色譜峰的保留時(shí)間適中,分離度較好,且基線穩(wěn)定。

      本研究建立的黃芪飲片及其復(fù)方玉屏風(fēng)顆粒中4 個(gè)黃酮類成分的定量測定方法,經(jīng)方法學(xué)考察,表明該方法操作簡便,重復(fù)性好,測定結(jié)果準(zhǔn)確,可用于黃芪及其復(fù)方的測定。

      采用本方法對玉屏風(fēng)顆粒以及制備玉屏風(fēng)顆粒用的同批次黃芪飲片進(jìn)行了成分比較,結(jié)果可見,毛蕊異黃酮和芒柄花素的量在飲片及自制復(fù)方中測得的含有量差異不大,而復(fù)方中毛蕊異黃酮苷和芒柄花苷量約為黃芪飲片該成分含有量的2 倍左右,分析其原因一方面為在玉屏風(fēng)顆粒制備過程中,以水作為提取溶劑進(jìn)行提取,可使極性相對較大的毛蕊異黃酮苷和芒柄花苷煎出率提高,另一方面黃芪與白術(shù)和防風(fēng)混合煎煮提取,可能提高了黃芪中毛蕊異黃酮苷和芒柄花苷兩個(gè)成分的溶出率。

      [1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:2010 年版一部[S]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:283-284.

      [2] 江 忠,田 菊,楊志斌,等. 玉屏風(fēng)顆粒對哮喘患兒T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J]. 中成藥,2000,22 (3):210-211.

      [3] 陳泉芳,覃壽明,鄒小英,等. 玉屏風(fēng)顆粒聯(lián)合百令膠囊對肺癌化療患者免疫力調(diào)節(jié)的療效觀察[J]. 中成藥,2013,35(2):249-251.

      [4] 曹正中,曹 園,易以軍,等. 膜莢黃芪中新異黃酮苷的結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),1999,34(5):392-394.

      [5] 宋純清,鄭志仁,劉 滌,等. 膜莢黃芪中異黃酮化合物[J]. 植物學(xué)報(bào),1997,39(8):764-768.

      [6] 曹津銘. 黃芪新的化學(xué)成分研究[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2002,19(3):201-202.

      [7] 李繼紅. 黃芪化學(xué)成分的研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥,2004,17(2):97-99.

      [8] 劉方明,李志孝,孟延發(fā),等. 紅芪多糖RHG 的分離純化及化學(xué)結(jié)構(gòu)[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),1997,32(8):603-606.

      [9] 吳立軍. 天然藥物化學(xué)[M]. 4 版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:184.

      [10] 劉煥榮,王 虹,秦雪梅,等. HPLC 法測定玉屏風(fēng)不同配伍中4 種黃酮成分[J]. 中草藥,2011,42 (6):1122-1124.

      [11] 黃月純,陳慕媛,劉翠玲,等. 基于玉屏風(fēng)煎劑的玉屏風(fēng)制劑質(zhì)量評價(jià)研究[J]. 中國藥房,2012,21 (35):3319-3321.

      [12] 田圣志,楊玉濤,張振凌,等. HPLC 測定黃芪蜜炙前后毛瑞異黃酮和芒柄花素的含量[J]. 中成藥,2010,3(8):1365-1368.

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