輸血前不規(guī)則抗體篩查與直接抗人球蛋白試驗的意義

[摘要] 目的 探討對輸血患者在輸血前實施直接抗人球蛋白試驗以及不規(guī)則抗體篩選的檢查結果，并總結檢查臨床意義。 方法 輸血前患者2000例，實施不規(guī)則抗體篩選以及直接抗人球蛋白試驗（DAT）兩種輔助檢查，分析結果以及研究性別、既往妊娠史和輸血史對結果的影響。 結果 不規(guī)則抗體篩查檢查陽性率為0.20%，直接抗人球蛋白試驗結果陽性率為1.05%；既往輸血史或者妊娠史是影響不規(guī)則抗體篩查以及直接抗人球蛋白試驗結果的相關因素。 結論 不規(guī)則抗體篩查以及直接抗人球蛋白試驗可以針對檢查結果實施輸血，避免溶血反應，臨床上對患者安全以及治療有很大幫助。

[關鍵詞] 輸血；直接抗人球蛋白試驗；不規(guī)則抗體篩查；微柱凝膠法

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）30-0137-03

現(xiàn)階段的文獻資料顯示引起溶血反應的最主要原因是紅細胞不規(guī)則抗體（irregular antibodies）[1，2]，而不規(guī)則抗體產生原因不一，可能是妊娠免疫產生，也可能是多次以及大量的輸血產生[3]，紅細胞不規(guī)則抗體因縮短了紅細胞存活時間，嚴重的導致威脅生命的免疫溶血性輸血反應，因此目前對輸血患者要事先進行不規(guī)則抗體的檢查以及篩選，以此保證患者臨床輸血安全性[4]。

實施直接抗人球蛋白試驗（DAT）的目的是驗證不完全抗體是否導致了紅細胞過敏[5]，而DAT的工作原理是體內由于不完全抗體（或補體）引起紅細胞致敏因此發(fā)生凝集。檢查結果陽性的患者的配血將會難度增加，國外的實施方法微柱凝膠技術已經(jīng)廣泛使用[6]。

本研究選擇2010年12月～2012年12月間浙江省嵊州市人民醫(yī)院住院部輸血前患者共2000例，檢查方法具體為微柱凝膠法，具體實施不規(guī)則抗體篩選以及DAT兩種輔助檢查，檢查結束后對結果顯示陽性的標本進一步實施抗體特異性鑒定檢查。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年12月～2012年12月間浙江省嵊州市人民醫(yī)院住院部輸血前患者共2000例，其中男1102例，女898例，年齡1～87歲，中位年齡（56.45±6.29）歲；包括643例孕產婦、手術需血712例、住院部治療645例。

1.2 檢查儀器

西班牙戴安娜公司提供卡式專用離心機、孵育箱（37℃）以及微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡；上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供不規(guī)則抗體檢測試劑，包括人工細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，16種抗原，分別為D、C、E、c、e、M、N、s、P1、Lea、Leb、k、Jka、Jkb、Fya、Fyb；上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供鑒定譜細胞1～10號。

1.3 輔助檢查方法

①不規(guī)則抗體篩查方法：檢查操作嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》，患者于檢查當日清晨取靜脈血5 mL（促凝管抽?。?，在常溫下靜置30 min直至標本完全凝固，置于離心機實施離心操作120 s，對分離出的血清剔除纖維蛋白。根據(jù)抗人球蛋白微柱凝膠篩檢卡的使用說明將不同對象做好標記，取3個不同的微柱凝膠管，分別加入50 μL 0.8% Ⅰ型、50 μL 0.8% Ⅱ型、50 μL 0.8% Ⅲ型不規(guī)則抗體篩查細胞試劑，同時分別加入50 μL檢驗血清與三個凝膠管；完畢后將檢測卡置于孵育箱，在37℃環(huán)境下孵育15 min；此后置于卡式離心機進行離心操作，離心操作分為兩階段，第一階段離心轉速900 r/min，離心120 s，第二階段離心轉速1500 r/min，離心180 s；結果分為陰性與陽性，陰性結果判別標準為檢測細胞不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，游離篩檢紅細胞沉降至凝膠柱底部，陽性結果判別標準為與檢測細胞發(fā)生凝集現(xiàn)象，處于凝膠柱上端或中部懸浮狀態(tài)；對于結果顯示陽性標本進一步檢測，實施譜細胞鑒定不完全抗體特異性。②直接抗人球蛋白試驗方法：檢查前取試驗患者紅細胞懸液（0.5%～0.8%）50 μL；取微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡，卡抗IG+C3d，加入所采集懸液，立即置入卡式離心機進行離心操作，離心時間維持5 min；記錄試驗結果，對顯示陽性的標本進一步實施分型操作，具體實施抗IgG、抗C3d、抗IgG+C3d分型操作。

1.4 統(tǒng)計學方法

對結果使用統(tǒng)計學軟件SPSS 13.0進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 檢查結果

本研究患者共2000例，不規(guī)則抗體篩查檢查結果顯示有4例陽性結果，陽性率為0.20%，直接抗人球蛋白試驗結果顯示陽性結果21例，陽性率為1.05%。不規(guī)則抗體篩查檢查結果中，抗-s、抗-c、抗-C、抗-Jka均為1例患者；直接抗人球蛋白試驗結果中，IgG+C3d分型抗體患者有11例，占52.38%；IgG分型抗體患者6例，占28.57%；此外C3d分型抗體患者有4例，占19.05%。

2.2 性別及既往輸血妊娠史影響

由表1所示，男性以及女性患者在不規(guī)則抗體結果以及直接抗人球蛋白試驗結果中差異不大，性別不是主要因素；有無既往輸血史或者妊娠史是影響不規(guī)則抗體篩查以及直接抗人球蛋白試驗結果的相關因素。

3 討論

輸血安全直接關系到患者后續(xù)治療甚至患者生命安全，因此針對輸血之前的檢查工作十分重要[7]。針對輸血安全性檢查的文獻較多，資料顯示不規(guī)則抗體在普通人群中的篩查陽性率比較低，文獻提示檢出率在0.2%～2.4%之間[8]，不規(guī)則也就是意外抗體，是血清中除了抗-A、抗-B以外的血型抗體。人類血型抗體有兩種類型，即IgG以及IgM，現(xiàn)階段認知的ABO血型系統(tǒng)分型IgM型包括抗-A以及抗-B，除此以外的類型均為IgG型。不規(guī)則抗體將會引起免疫溶血性輸血反應，這種情況很有可能造成輸血死亡，占輸血死亡總數(shù)的55%以上[9]。

對輸血前患者實施不規(guī)則抗體篩查的主要目的在于：①對于輸血用于治療目的的患者，實施不規(guī)則抗體篩查利于選擇血液，根據(jù)篩查結果選擇無針對特別抗體的響應抗原血液，這樣就可以避免因為選擇血液不當造成溶血性輸血反應，既提升了用血安全性又避免了血液使用浪費；②對孕產婦實施不規(guī)則抗體篩查，根據(jù)檢查結果對新生兒溶血病進行有效的防治，早期診斷早期干預，提升新生兒出生時的健康狀態(tài)以及免疫力；③對進行獻血的人員實施不規(guī)則抗體篩查，可對血液進行分類分型，在后續(xù)用血過程中根據(jù)分型避免錯誤用血，大大減少了血液使用浪費。對于篩查性質的工作，量大時間短，因此需要一種快速準確的篩查輔助方法，微柱凝膠法是常用的不規(guī)則抗體篩查方法，其優(yōu)勢在于靈敏度高且快速準確，敏感程度高于聚凝胺法，因此應用更多。在微柱凝膠法中，微柱孔徑控制得很小，實施溫育且離心操作之后，紅細胞每次只能單個通過微柱孔徑，因此紅細胞凝集成塊的現(xiàn)象會導致其懸浮于凝膠上部，表現(xiàn)為陽性結果。相反的，通過微柱孔徑的單個紅細胞可通過凝膠顆粒，沉于凝膠下部，表現(xiàn)為陰性。

直接抗人球蛋白試驗是針對自身免疫性溶血性貧血的常用診斷參照工具[10]，是患者自身免疫性溶血性貧血的常用輔助檢查診斷指標之一。直接抗人球蛋白結果顯示陽性的可能性較多，血液病、癌癥、自身免疫性疾病、藥物誘導等都是潛在的因素，而上述患者血清中往往含有自身抗體，因此導致紅細胞致敏或者說處于被吸附狀態(tài)，特別的對于此類患者，需要使用血液的時候，會在交叉配血檢驗里出現(xiàn)很大難度，尤其在部分患者血漿里存在同種不規(guī)則抗體，將會使得交叉配血工作十分困難[11，12]。因此對輸血前實施直接抗人球蛋白試驗的意義在于檢查被檢紅細胞上是否存在有不完全抗體，直接法相比于間接法對于自身免疫性溶血性貧血更有參考價值[13]?；颊咴诳梢圆惠斞那闆r下盡量不輸血，輸血是唯一選擇時應選擇凝集反應最小的血液成分輸注，輸注過程中要控制輸注速度緩慢，護理人員要隨時觀察，謹防不良現(xiàn)象出現(xiàn)。

本研究患者共2000例，不規(guī)則抗體篩查檢查陽性率為0.20%，直接抗人球蛋白試驗陽性率為1.05%。針對性別以及既往輸血史、妊娠史對于檢查結果的影響做了調查研究，根據(jù)研究結果判斷，既往輸血史或者妊娠史是影響不規(guī)則抗體篩查以及直接抗人球蛋白試驗結果的相關因素，出現(xiàn)這種情況的可能原因是患者既往反復輸血，自身免疫受到較大刺激。

隨著醫(yī)學水平的提升，是否實施交叉配血應該根據(jù)實際情況進行，在確定需要輸血的情況下，應該盡量提前2～3 d進行不規(guī)則抗體檢測以及直接抗人球蛋白試驗，根據(jù)結果選擇血液，一旦出現(xiàn)適合血液短缺的現(xiàn)象，可以有時間緩沖、改自體輸血等。而使用微柱凝膠法進行檢測可以有效提升篩查效率，可以列為輸血前的常規(guī)檢查項目。

綜上所述，對需要實施輸血的患者輸血前進行不規(guī)則抗體篩查以及直接抗人球蛋白試驗，可以對患者血清抗體進行明確，不但可以避免出現(xiàn)溶血性輸血反應，提升用血的安全性，還可以大大減少因為錯誤用血造成的浪費，臨床意義重大。

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（收稿日期：2013-05-30）