三葉青凍干粉抗炎作用的實驗研究

[摘要] 目的 探討三葉青凍干粉的抗炎作用。 方法 設三葉青凍干粉三個劑量組，另設陽性對照和溶劑對照組，采用經(jīng)口給藥方式，給藥后觀察三葉青凍干粉對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的抑制作用、對小鼠毛細血管通透性的影響以及對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的抑制作用。 結(jié)果 三葉青凍干粉在7.16 g/kg和3.58 g/kg劑量下能有效抑制二甲苯致小鼠耳腫脹作用；7.16 g/kg對醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管的通透性有抑制作用；在5.0 g/kg和2.5 g/kg劑量下能顯著抑制由角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹。 結(jié)論 三葉青凍干粉有顯著的抗炎活性。

[關鍵詞] 三葉青；凍干粉；抗炎作用

[中圖分類號] R285 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）30-0013-02

三葉青（radix tetrastigmae）為葡萄科植物三葉爬藤（Tetrastigmahemsleyanum Dielset Gilg）的干燥塊根，是浙江地道藥材之一[1]，以塊根或全草入藥[8]，具有清熱解毒、祛風化痰、活血止痛的功能[2]。近來關于三葉青的研究較多，但多集中在抗腫瘤方面[3～5，9]，對于三葉青抗炎方面研究較少，而且多采用的是三葉青提取物，在提取過程中，大多需要加熱等過程，造成成分損失[2]，因而不能很好顯示其真正效果?；诖?，本文在2012年5～10月采用最大限度保留其有效成分的三葉青凍干粉來進行研究，以期較為全面地觀察三葉青的抗炎作用，為以后進一步研究提供基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 受試物與試劑 三葉青凍干粉白色粉未，由杭州天惠醫(yī)藥科技有限公司提供；二甲苯（批號：20120204），成都市科龍化工試劑廠；伊文思藍（批號：20070948），瑞士Fluka公司進口分裝；角叉菜膠，Sigma公司進口分裝，25 g/瓶。

1.1.2 實驗動物 ICR小鼠，SPF級，體重18～22 g，雌性50只，合格證號：2008001619934；雄性50只，合格證號：2008 001620192。大鼠，體重170～200 g，雌性50只，合格證號：2008001624785。以上均由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，飼養(yǎng)在屏障環(huán)境中，自由進食飲水，試驗前適應5 d。

1.2 試驗方法

1.2.1 三葉青凍干粉對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的抑制作用 取雌性ICR小鼠50只，隨機分為5組，即水對照組（30 mL/kg）、吲哚美辛對照組（15 mg/kg）、三葉青凍干粉高劑量組（7.16 g/kg，相當于新鮮藥材46.44 g/kg）、三葉青凍干粉中劑量組（3.58 g/kg，相當于新鮮藥材23.22 g/kg）、三葉青凍干粉低劑量組（1.79 g/kg，相當于新鮮藥材11.61 g/kg）。各組動物連續(xù)給相應受試物3 d，末次給藥后30 min，小鼠右耳廓內(nèi)外用二甲苯均勻涂抹，用量0.1 mL，以引起炎癥反應，左耳不加處理作為自身對照。致炎后1 h將小鼠脫頸椎處死，用打孔器（直徑9 mm），將左右耳片分別敲下后稱重，每只動物右、左耳片重量差即反映炎癥腫脹程度。

1.2.2三葉青凍干粉對小鼠毛細血管通透性的影響 取雄性ICR小鼠50只，隨機分為5組，分組情況同上。各組動物連續(xù)給相應受試物3 d，末次給藥后30 min，小鼠尾靜脈注射0.5%依文思藍0.1 mL/kg，并立即注射0.6%醋酸0.2 mL/只，30 min后將小鼠脫頸椎處死，剪開腹腔，用5 mL生理鹽水沖洗腹腔2次，合并沖洗液，以 3 000 rpm離心10 min，取上清液于721型分光光度計590 nm處比色，測定其OD值。

1.2.3 三葉青凍干粉對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的抑制作用 取雌性SD大鼠50只，體重170～200 g，隨機分為5組，即水對照組（30 mL/kg）、強的松組（5.4 mg/kg）、三葉青凍干粉高劑量組（5.0 g/kg，相當于新鮮藥材32.4 g/kg）、三葉青凍干粉中劑量組（2.5 g/kg，相當于新鮮藥材16.2 g/kg）、三葉青凍干粉低劑量組（1.25 g/kg，相當于新鮮藥材8.1 g/kg）。各組大鼠連續(xù)給相應受試物5 d，于注射前先測定大鼠右后足跖的厚度，末次給藥后1 h，給各組大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL以致炎，分別測量致炎后1、2、4、6、24 h右后足跖的厚度（mm），以大鼠致炎后足跖厚度與致炎前足跖厚度差表示炎性腫脹程度。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 本實驗數(shù)據(jù)用（x±s）表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析，當總體方差有統(tǒng)計學意義（P<0.05）時，再進行組間比較，所有數(shù)據(jù)均由SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行處理，P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1三葉青凍干粉對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的抑制作用

三葉青凍干粉在中高劑量對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，與溶劑對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中高劑量的情況下，其抑制作用與陽性對照較為接近，見表1 。

2.2 三葉青凍干粉對小鼠毛細血管通透性的影響

三葉青凍干粉對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性在中高劑量下出現(xiàn)較好的效果，與溶劑對照相比，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中，高劑量的抑制效果與陽性藥物吲哚美辛相當，見表1。

表1 三葉青凍干粉對二甲苯致小鼠耳廓腫脹及醋酸致毛細血管通透性的影響（x±s）

注： 與水對照組相比具有統(tǒng)計學意義（*P < 0.05）；與吲哚美辛組相比具有統(tǒng)計學意義（#P < 0.05）

2.3三葉青凍干粉對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的抑制作用

三葉青凍干粉在中高劑量組對由角叉菜膠致炎后1 h、4 h、6 h大鼠足跖腫脹均有明顯的抑制作用，與溶劑對照組比較差異有顯著性（P<0.05）。在其他時點，與對照組差異不顯著，見表2。

3 討論

三葉青是較新的中藥材，歷代本草未見[1]，主要分布于長江以南各地[6]。江月仙等發(fā)現(xiàn)三葉青大鼠經(jīng)口半數(shù)致死劑量（LD50）雌雄兩性別均大于100 g/kgBW，按急性毒性分級標準，屬于無毒級[11]。近來研究發(fā)現(xiàn)，三葉青有抗腫瘤[3-5]、抗病毒[7]等多種功效。炎癥是十分常見而又重要的病理過程，是機體對于刺激的一種防御反應，表現(xiàn)為紅腫熱痛和功能障礙，很多疾病過程都伴隨炎癥發(fā)生，臨床上多采用消炎鎮(zhèn)痛治療。近來也有研究表明，三葉青提取物有抗炎鎮(zhèn)痛效果[2]。

有文獻指出，由于高溫會對有效成分造成破壞或者流失[1]，三葉青在烘焙干燥和分離提取過程中采用低溫真空冷凍干燥技術，能夠較好保存原藥的藥效成分。本研究采用三葉青凍干粉，重點觀察了其抗炎方面的作用。研究發(fā)現(xiàn)，三葉青凍干粉在高劑量組和三葉青凍干粉中劑量組對二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，作用強度與陽性藥物吲哚美辛相當，與以往類似研究結(jié)論相同[2]。在上述同樣劑量下，三葉青凍干粉能夠抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的升高。同時，我們發(fā)現(xiàn)，三葉青在高劑量組和中劑量組能明顯抑制由角叉菜膠致炎后1 h、4 h、6 h大鼠足跖腫脹程度，但對致炎后2 h和24 h，作用不明顯。炎癥的發(fā)生發(fā)展是一個過程，致炎和抗炎是個平衡過程，而致炎2 h，炎癥較為突出，超過了三葉青凍干粉的抗炎作用，當致炎24 h，炎癥在機體免疫調(diào)節(jié)下，已經(jīng)慢慢消退，所以和對照組相比，無顯著性差異。

研究表明，三葉青凍干粉有較好的抗炎活性，其抗炎效果與臨床上抗炎藥吲哚美辛在藥用劑量下相當。其具體抗炎發(fā)生的環(huán)節(jié)和相關機制還需要進一步探討。

[參考文獻]

[1] 王志俊. 人工種植與野生三葉青凍干粉增強免疫功能的比較[J]. 浙江中醫(yī)雜志，2012，47（12）：922-923.

[2] 黃真，毛慶秋，魏佳平. 三葉青提取物抗炎、鎮(zhèn)痛及解熱作用的實驗研究[J]. 中國新藥雜志，2005，14（7）：861-864.

[3] 王小莉，曾娟，周輝. 三葉青提取物對肺癌細胞株A549的影響[J]. 腫瘤藥學，2012. 2（5）：347-350.

[4] 李華美，魏克民. 三葉青乙酸乙酯提取物對小鼠Lewis肺癌的抑制作用[J]. 醫(yī)學研究雜志，2012，41（9）：112-115.

[5] 徐彩菊，白寧寧，孟佳，等. 三葉青提取物體內(nèi)抑瘤作用及其機理研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19（2）：278-280.

[6] 伍昭龍，呂江明. 中藥三葉青的研究現(xiàn)狀[J]. 中國民族民間醫(yī)藥雜志，2006，（1）：15-18.

[7] 楊大堅，劉紅亞，李新中，等. 破石珠化學成分研究[J]. 中國中藥雜志，1998，23（7）：419-421.

[8] 全國中草藥匯編[M]. 上冊. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1975：31.

[9] 丁剛強，鄭軍獻，魏克民，等. 三葉青提取物對肝癌細胞HepG2及原代大鼠肝細胞的體外毒作用研究[J]. 浙江預防醫(yī)學，2005，17（9）：1-2，5.

[10] 呂江明，李春艷，賈薇，等. 三葉青水提物抑制小鼠痛經(jīng)作用[J]. 廣州醫(yī)藥，2011，42（4）：39-42.

[11] 江月仙，郭偉娣. 三葉青的毒理學研究[J]. 中華醫(yī)學研究雜志，2005， 5（8）：63-65.

[12] 魏克民，丁剛強，浦錦寶，等. 中草藥三葉青抗腫瘤作用機制實驗研究和臨床應用[J]. 醫(yī)學研究雜志，2007，36（11）：41-43.

[13] 楊雄志，巫軍. 三葉青提取物抗乙肝病毒活性的研究[J]. 南京中醫(yī)藥大學學報，2009，25（4）：294-296.

[14] 丁剛強，徐彩菊，孟佳，等. 三葉青對小鼠細胞因子及免疫功能的影響研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（9）：1724-1726.

（收稿日期：2013-07-10）