無瓣海?；颐共〔≡姆蛛x及藥劑篩選

徐金柱，秦長生，楊 華，趙丹陽，揭育澤

(廣東省林業(yè)科學研究院，廣東 廣州 510520)

無瓣海?；颐共〔≡姆蛛x及藥劑篩選

徐金柱，秦長生，楊 華，趙丹陽，揭育澤

(廣東省林業(yè)科學研究院，廣東 廣州 510520)

灰霉病是無瓣海桑育苗過程中的重要病害，是影響其育苗成敗的關(guān)鍵因素之一。無瓣海?；颐共“l(fā)病植株經(jīng)室內(nèi)分離鑒定為灰葡萄孢。室內(nèi)采用生長速率法測定了7種殺菌劑對其生長的抑制作用。結(jié)果表明，咯菌腈、苯甲、丙環(huán)唑和醚菌、啶酰菌對無瓣海?；颐共∮休^好的抑制作用，EC50分別為0.10、0.25和0.14 mg/L，苯醚甲環(huán)唑、異菌脲其次(EC50分別為2.28、6.44 mg/L），啶酰菌胺和嘧霉胺抑菌效果較差，低濃度嘧霉對灰霉菌的生長有剌激作用，研究結(jié)果為無瓣海?；颐共〉奶镩g防治提供了依據(jù)。

無瓣海桑；灰葡萄孢；殺菌劑篩選

無瓣海桑是我國首個從國外引進并大面積推廣種植的紅樹植物，生長快，適應(yīng)性強，已成為華南沿海紅樹林恢復造林的主要樹種。引種證明了，無瓣海桑適應(yīng)我國華南沿海氣候條件，在鹽度較低的泥質(zhì)灘涂特別是河流入?？诟浇酁┥L良好，具有良好的生態(tài)防護效益、環(huán)境凈化效益和生態(tài)控制作用，可作為紅樹林人工恢復的先鋒樹種[1-2]。在珠海淇澳島抑制互花米草Spartina alternif l ora蔓延，恢復紅樹林方面發(fā)揮了積極的作用[3]。

灰霉病是由灰葡萄孢 B. cinerea引起的一種世界性重要真菌病害，對葡萄、草莓等多種農(nóng)作物的生長產(chǎn)生嚴重影響，造成花和果實的腐爛。紅樹植物無瓣海桑在育苗過程中，常受灰霉病的危害[4-5]，主要危害幼苗的幼莖和葉片。幼莖感病部位縊縮變細，最后苗木折倒死亡。葉片感病組織初為不規(guī)則塊狀褪綠，1 周左右便開始枯萎、死亡，發(fā)病部位產(chǎn)生褐色霉狀物，后期在發(fā)病部位產(chǎn)生不規(guī)則狀黑色菌核。灰霉病的防治多年來一直依賴于化學防治，抗藥性已成為灰霉病防治的突出問題。本研究分離了無瓣海桑灰霉病的病原菌并進行鑒定，同時選擇了灰霉病防治的幾種藥劑開展了室內(nèi)毒力測定，篩選對無瓣海?；颐共≡哂辛己靡种菩Ч臍⒕鷦?，為田間灰霉病防治提供有效的藥劑和防治手段。

1 材料與方法

1.1 病原采集分離與鑒定[6]

發(fā)病植株采集于廣東省珠海紅樹林保區(qū)無瓣海桑苗圃地。無瓣海桑灰霉發(fā)病組織采集后，獨立保存帶回室驗室，無菌條件下，用無菌水清洗3次，浸入1%次氯酸鈉溶液中30 s，取出后浸入70%的乙醇溶液3～5 min，再轉(zhuǎn)入無菌水中漂洗3次，在病健交接處剪取大約邊長為3 mm的小塊接入PDA 平板內(nèi)，每平板內(nèi)接4～5塊，置于22 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。1～2 d后挑取單菌絲，進行純化。純化后的病原菌，轉(zhuǎn)接于 PDA 斜面培養(yǎng)基，4 ℃冰箱中保存、備用。

純化后的病原菌點接于PDA平板中央，22 ℃下培養(yǎng)5～7 d，取透明膠布在菌落表面輕輕粘上菌絲及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，滴一滴清水于潔凈的載玻片中央，將透明膠布反貼于載玻片上，蓋上蓋玻片在顯微鏡下觀察產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)及孢子大小，進行鑒定。

1.2 7種殺菌劑對無瓣海桑灰霉病的室內(nèi)生長的抑制作用

供試藥劑：50%啶酰菌胺水分分散劑（商品名凱澤，德國巴斯夫），50%咯菌腈可濕性粉劑（商品名卉友，先正達），500 g/L異菌脲懸浮劑（商品名撲海因，拜耳作物科學（中國）有限公司），400 g/L嘧霉胺懸浮劑（陜西上格之路生物科學有限公司），300 g/L醚菌·啶酰菌懸浮劑（商品名翠澤，巴斯夫（中國）有限公司），10%苯甲·丙環(huán)唑乳油（永農(nóng)生物科學有限公司）。根據(jù)有效成份含量，分別配制成質(zhì)量濃度分別為0.05、0.2、0.5、1.5和5 mg/L的PDA平板（D=9 cm），每處理5個重復。

藥劑對灰霉病原菌生長的抑制測定：供試菌株在PDA平板上22±1 ℃暗培養(yǎng)3 d，用內(nèi)徑為4.5 mm的打孔器打取菌塞備用。隨機取一菌塞，反接于加藥的PDA平板上，以不加藥的PDA做對照。22±1 ℃暗培養(yǎng)，每24 h測定1次菌落直徑。根據(jù)菌絲生長抑制機率值和各藥劑濃度對數(shù)之間的線性回歸分析，得出各藥劑對灰葡萄孢的致死中濃度（EC50），結(jié)合藥劑的相對抑制率A=（B－C）/B×100%（A為相對抑制率，B為對照菌落平均直徑，C為處理組菌落的平均直徑），評價供試藥劑對無瓣海?；颐共∫种谱饔谩?/p>

2 結(jié)果與分析

2.1 無瓣海?；颐共〔≡蛛x及鑒定

培養(yǎng) 3～5 d的灰霉菌落形態(tài)特征和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)如圖1。顯微結(jié)構(gòu)表明，分生孢子梗叢生，直立或稍彎曲，無色至淡褐色，頂端粗大，呈 1～2 次分枝，分枝末端膨大，從膨大體或分枝末端小突起上聚生多數(shù)分生孢子，外觀呈葡萄穗狀，分生孢子橢圓形、球形、卵形，無色至淡灰褐色，單孢，表面光滑，大小為12～18×9～13 um，成堆時淡黃色。在培養(yǎng)基上培養(yǎng)后長出白色放射狀菌絲體，菌絲體顏色逐漸加深，后期菌絲體糾集形成近圓形或不規(guī)則形的菌核黑色，表面粗糙。根據(jù)其顯微結(jié)構(gòu)結(jié)合平板培養(yǎng)性狀，鑒定無瓣海?；颐共〉牟≡瓰槠咸鸦颐咕鶥otrytis cinerea。

圖1 無瓣海?；颐共〉呐囵B(yǎng)性狀及顯微結(jié)構(gòu)Fig. 1 Culture characteristics and microstrure of B. cinerea from S. apetala

2.2 幾種殺菌劑對灰霉病原菌的抑制作用

連續(xù)測定了灰霉病原菌接種后5 d的生長量，結(jié)果表明，同一種藥劑生長速率基本一致。取第3 d的生長量作為比較對象，評價供試藥劑對灰霉菌生長速率的影響。經(jīng)Duncan新復極差分析（見表1），同一藥劑不同濃度間差異極顯著，生長速率隨濃度的增加呈下降趨勢，生長抑制率分析表明（見表2），咯菌腈和丙甲·苯環(huán)唑表明最好，濃度為1.5 mg/L時即可完全抑制葡萄灰霉病的生長，在較低濃度也有較好的抑制效果；醚菌·啶酰菌表現(xiàn)次之，在濃度為1.5 mg/L時能極大抑制病原菌的生長，與對照相比，生長速率下降了76.4%，濃度為5 mg/L時可完全抑制病原菌的生長；啶酰菌胺，苯醚甲環(huán)唑和異菌脲的藥效相當，不同濃度組對病原菌生長均有一定影響，但在供試濃度范圍內(nèi)均不能完全抑制病原菌的生長；嘧霉胺表現(xiàn)最不理想，在低濃度時對病原菌的生長還有刺激作用。

表 1 供試藥劑不同濃度下灰葡萄孢的生長量?Table 1 Increments of B. cinerea with different dose of tested fungicides (mm/3d)

表 2 供試藥劑對灰葡萄孢的相對抑菌率Table 2 Relative inhibition rate of tested fungicides to B. cinerea %

根據(jù)藥劑的不同濃度對灰葡萄孢生長的抑制率，回歸獲得了供試幾種藥劑對灰葡萄孢菌毒力回歸方程（見表3），各藥劑均能較好的擬合，抑制中濃度度分析表明了各藥劑對葡萄灰霉菌的毒性，其大小依次為咯菌腈，苯甲·丙環(huán)唑，醚菌·啶酰菌，苯醚甲環(huán)唑，異菌脲，啶酰菌胺和嘧霉胺。因此，咯菌腈，苯甲·丙環(huán)唑作為無瓣海桑灰霉病防治的首選藥劑。

表 3 供試藥劑對灰葡萄孢的毒力回歸方程及致死中濃度（EC50）Table 3 Virulence regression equations and lethal concentration of tested fungicides to B. cinerea

3 討 論

灰霉病作為一種重要的植物病害，已倍受關(guān)注，多年來已研發(fā)了多種藥劑用于田間防治，但隨著用藥時間和用藥次數(shù)的增加，抗藥性顯來越來越突出?；颐共Χ喾N藥劑產(chǎn)生的抗藥性主要是因為灰霉病菌寄主范圍廣，繁殖快，遺傳變異大，適合度高，易于產(chǎn)生抗藥性[7-8]。常用內(nèi)吸性殺菌劑大多為單作用位點，抗性風險較高，不合理用藥造成較大抗藥性選擇壓。研究表明灰霉病已對苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、N-苯基氨基甲酸酯類和苯胺基嘧啶類殺菌劑產(chǎn)生抗性，解決田間抗性治理問題需開展灰霉菌抗藥菌株生物學及抗性機理的研究，為抗藥性治理及抗性風險預(yù)測提供依據(jù)。

研究結(jié)果表明胳菌腈、醚菌·啶酰菌和苯甲·丙環(huán)唑?qū)o瓣海?；颐咕哂休^好的抑菌效果，咯菌腈是1995 年用作葉面噴施殺菌劑防治灰霉病等病害，主要干擾并破壞灰霉病菌的生物氧化和生物合成，抑制與葡萄糖磷?；嘘P(guān)的轉(zhuǎn)運，抑制菌絲生長，最終導致病菌死亡[9]另外2種為單劑的復配劑，通過2種不同作用機制對葡萄灰霉菌進行作用，可取得更好的防效，因此田間防治宜采用不同作用機制的復配物和不同藥劑的交替使用，可有效防控（減緩）抗藥性的產(chǎn)生，有利于灰霉病的綜合治理。嘧霉胺屬苯胺基嘧啶類殺菌劑，當前傳統(tǒng)藥物中防治黃瓜灰霉病、番茄灰霉病、枯萎病具有較高活性，通過抑制病菌浸染酶的產(chǎn)生從而阻止病菌的侵染并殺死病菌。 但在本研究中，嘧霉胺對灰葡萄菌的抑制效果不理想，在低濃度下（＜0.5 mg/L時）能刺激菌株的生長，其機理有待進一步研究。

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Isolating Botrytis cinerea from Sonneratia apetala and screening fungicides for controlling pathogen

XU Jin-zhu, QIN Chang-sheng, YANG Hua, ZHAO Dan-yang, JIE Yu-ze
(Guangdong Academy of Forestry Science, Guangzhou 510520, Guangdong, China)

Gray mold of S. apetala is one of key factors to decide the success or failure in the seedling culture. The seedlings with gray mold were collected from nursery and the pathogen, B. ceinerea was isolated and identif i ed in the lab. The toxicity of seven commercial fungicides were tested to B. ceinerea in the lab. The results show that Fludioxonil, Benzolyl Propiconazole and Kresoxim-methyl Boscalid had good inhibition effects with the EC50 0.10, 0.25 and 0.14 mg/L respectively, followed by Difernoconazole, Iprodiome with the EC50 2.28 and 6.44 mg/L, and Boscalid, Pyrimethanil had less bacteriostatic eff i cacy; Low concentration Pyrimethanil had a stimulating role on gray mold. The fi ndings provide a basis for fi eld-controlling B. cinerea of S. apetala.

Sonneratia apetala; Botrytis cinerea; fungicides screen

S763.1

A

1673-923X(2013)10-0015-04

2013-04-23

“十一五”林業(yè)科技支撐計劃項目“紅樹林主要病蟲害防控技術(shù)研究”（2009BADB2B0202）；廣東省林業(yè)科技創(chuàng)新專項“生態(tài)景觀林帶主要樹種病蟲發(fā)生規(guī)律及防控技術(shù)研究”（2011KJCX027）

徐金柱（1978-），男，安徽來安人，高級工程師，博士，主要從事森林病蟲害方面的研究

[本文編校：文鳳鳴]