甘草提取物的抑菌活性研究

常婧 周婭靜 石海燕 胡志勇

(山西太原中北大學(xué)化工與環(huán)境學(xué)院化學(xué)工程系 山西太原 030051)

甘草(Glycyrrhiza uraiensis Fisch)又名甜草,屬根豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)、脹果甘(Glycyrrhiza inflata Bat)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra)的干燥根及根莖。其藥用部位,味甘性平,既能益氣補(bǔ)中,又能緩急止痛、緩和藥性,是最常用的草藥[1-3]。目前為止,對(duì)甘草提取物的抑菌活性還沒(méi)有作詳細(xì)的研究報(bào)道。本文對(duì)甘草提取物不同極性成分進(jìn)行了抑菌活性研究,對(duì)該藥材中抑菌成分的分離分析提供參考。

1 器材

甘草(山西中醫(yī)學(xué)院)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌/營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、牛肉膏、蛋白胨、慶大霉素(海科敏生物科技有限公司)。

RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、DHP-80型電熱恒溫培養(yǎng)箱、XFS-280CB自動(dòng)不銹鋼手提式壓力蒸汽滅菌器、BH-Y040型潔凈工作臺(tái)、A600092型電子分析天平。

2 方法

2.1 制備甘草提取物

稱取甘草藥材500g,粉碎,在75℃時(shí),用95%乙醇回流提取3次,每次1小時(shí)。經(jīng)減壓濃縮至無(wú)醇,并回收溶劑,得總提取物70g。用蒸餾水加熱溶解總提取物,置于分液漏斗中,依次加入等體積的有機(jī)溶劑氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到各種提取物,干燥成粉末,備用。

2.2 抑菌活性分析[4]

2.2.1 藥敏紙片的制備

通過(guò)打孔機(jī)將定性濾紙打成直徑為6 mm的圓形紙片,然后通過(guò)壓力蒸汽滅菌器將溫度控制在121℃,高壓滅菌20min,室溫干燥。分別取0.5,1.0,2.0mg三個(gè)不同重量的供試樣品,選擇合適溶劑溶解,用制備的濾紙片充分吸收樣品,室溫晾干,備用。

2.2.2 制備培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基制備:稱取36 g營(yíng)養(yǎng)瓊脂,將其置于1000ml燒杯中,并加入蒸餾水加熱攪拌至完全溶解。經(jīng)壓力蒸汽滅菌器在121℃、20min高壓滅菌,然后倒入高壓滅菌的培養(yǎng)皿,液體厚度控制在3～5mm,等待冷卻凝固。

液體培養(yǎng)基制備:用天平準(zhǔn)確稱取0.3g的牛肉膏,1g的蛋白胨,0.5g的氯化鈉置于500ml燒杯中,加入100ml蒸餾水后,加熱并不斷攪拌,用1%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH在7.2～7.4,然后放入壓力蒸汽滅菌器中經(jīng)121℃、20min高壓滅菌,分裝于試管中,備用。

2.2.3 制備菌懸液

表1 甘草提取物抑菌圈活性

用接種環(huán)取不同菌種,接種于液體培養(yǎng)基中,放入培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)24h,用滅菌生理鹽水分別稀釋至1×10-5CFU/ml濃度,備用。

2.2.4 測(cè)定藥物抑菌作用

采用K-B紙片擴(kuò)散法[5],移取0.1mL稀釋好的菌懸液,于培養(yǎng)基中央位置,用涂布器盡可能的涂抹均勻。用無(wú)菌鑷子夾取已制備好的含藥濾紙片均勻貼在培養(yǎng)基表面,陽(yáng)性對(duì)照選用含藥量為10μg的慶大霉素細(xì)菌藥敏試紙。在37℃下,培養(yǎng)24h后,觀察并測(cè)量抑菌圈直徑,結(jié)果以mm表示。每種不同含藥量的提取物樣品對(duì)三種菌平行做三次,試驗(yàn)結(jié)果取平均值。

3 結(jié)果與分析

甘草提取物不同極性成分,以細(xì)菌大腸桿菌和金色葡萄球菌霉菌作為指示菌進(jìn)行的抑菌實(shí)驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表1。

由上表可知,除了氯仿部分的提取物對(duì)金黃色葡萄球菌沒(méi)有明顯的抑制效果,其余各部分提取物均對(duì)金黃色葡萄球菌均有較為明顯的抑制作用,其中正丁醇部分的提取物的抑菌活性最強(qiáng),乙酸乙酯提取物的抑菌活性次之,水提取物和95%乙醇提取物也表現(xiàn)出一定的抑菌活性。同時(shí),低含藥量的各部分提取物幾乎沒(méi)有抑菌活性,增加紙片的含藥量,可以增強(qiáng)其抗菌作用。

4 討論

本研究表明:甘草提取物不同極性組分對(duì)大腸桿菌和金色葡萄球菌霉菌兩種供試菌都表現(xiàn)出一定的抑菌作用,且對(duì)金色葡萄球菌的抑菌活性效果要比對(duì)大腸桿菌的抑菌活性好。研究結(jié)果有望指導(dǎo)甘草中抑菌活性成分的分離分析,從而提高拓展甘草的藥用價(jià)值,更好的開(kāi)發(fā)利用甘草資源。

[1]楊路路,陳建軍,楊天順等.我國(guó)西北地區(qū)藥用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)野生資源的地理分布與調(diào)查[J].中國(guó)野生植物資料,2013,32(5):27-31.

[2]王兵,王亞新,趙紅燕等.甘草的主要成分及其藥理作用的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào),2013,34(3):215-217.

[3]陳云華,黃明進(jìn),王文全等.不同來(lái)源甘草藥材成分含量及其保肝降酶作用比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(18):283-286.

[4]劉曉軍,劉鈾,陳紹紅等.構(gòu)樹(shù)葉提取物抑菌活性的初步觀察[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(19):113-116.

[5]時(shí)維靜,路振香,李立順.白頭翁不同提取物及復(fù)方體外抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2006,13(3):166-168.