• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    白斑綜合征病毒對(duì)脊尾白蝦的致病性研究

    2013-12-23 05:14:10萬(wàn)夕和王李寶費(fèi)榮梅
    海洋科學(xué) 2013年5期
    關(guān)鍵詞:脊尾甲殼白蝦

    沈 輝 , 萬(wàn)夕和 王李寶 費(fèi)榮梅, 李 淑, 柏 玲, 凌 云 黎 慧 高 波

    (1. 江蘇省海洋水產(chǎn)研究所, 江蘇 南通 226007; 2. 上海海洋大學(xué), 上海 201306; 3. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 江蘇 南京 210095)

    自20世紀(jì)90年代以來(lái), 白斑綜合征病毒給全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。在已報(bào)道的研究中, 該病毒可感染并致死多個(gè)對(duì)蝦種類, 如中國(guó)對(duì)蝦(Penaeus chinensis)[2-4]、南美白對(duì)蝦(Penaeus vannamei)[5]、斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus mondom)[6-8]等一些重要對(duì)蝦經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種。

    脊尾白蝦又稱小白蝦, 是中國(guó)特有的經(jīng)濟(jì)蝦類之一[9]。近年來(lái), 由于味道鮮美, 養(yǎng)殖效益較高, 脊尾白蝦的養(yǎng)殖規(guī)模面積迅速擴(kuò)大。但隨著養(yǎng)殖密度的不斷增大, 其病害問(wèn)題開(kāi)始日益凸顯。目前, 對(duì)脊尾白蝦的研究報(bào)導(dǎo)主要集中在生物學(xué)[10]及繁殖育種學(xué)[11]方面, 而脊尾白蝦疾病的研究工作相對(duì)較少, 吳友呂等[12]通過(guò)電子顯微鏡的觀察發(fā)現(xiàn)浙江發(fā)病的脊尾白蝦體內(nèi)存在一種桿狀病毒, 雷質(zhì)文[13]等在對(duì)WSSV進(jìn)行研究時(shí)認(rèn)為脊尾白蝦是WSSV的宿主之一。2010年、2011年江蘇沿海多數(shù)地方海水養(yǎng)殖中發(fā)生了脊尾白蝦大規(guī)模死亡的現(xiàn)象, 本課題組通過(guò)對(duì)大量發(fā)病樣品進(jìn)行病毒檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn), 發(fā)病樣品中白斑綜合征病毒感染率為100%。另外, 通過(guò)感染試驗(yàn), 進(jìn)一步研究了白斑綜合征病毒對(duì)脊尾白蝦的感染特性和致病性。

    1 材料與方法

    1.1 發(fā)病蝦的分析

    發(fā)病脊尾白蝦取自江蘇南通東凌養(yǎng)殖場(chǎng)、江蘇大豐裕華灘養(yǎng)殖場(chǎng)等。取10只發(fā)病蝦的鰓絲、肝 胰臟、肌肉、腸道等組織器官, 提取DNA或RNA模板后進(jìn)行WSSV、桃拉病毒(TSV)及傳染性皮下及造血組織壞死病毒(IHHNV)的檢測(cè), 采用的引物序列見(jiàn)表1。

    表1 對(duì)蝦病毒檢測(cè)引物及檢測(cè)結(jié)果 Tab. 1 The primers for testing virus in shrimp and the test results

    1.2 WSSV對(duì)脊尾白蝦的感染試驗(yàn)

    1.2.1 實(shí)驗(yàn)條件

    實(shí)驗(yàn)在江蘇省海水增養(yǎng)殖技術(shù)及種苗中心進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)用海水為天然海水, 海水相對(duì)比重為1.021, pH為 7.8~8.3, 海水經(jīng)沙濾及暗沉淀后備用, 實(shí)驗(yàn)用小水泥池容積為2 m3, 24 h充氣, 每天換水1次, 換水量為80%。

    1.2.2 實(shí)驗(yàn)用蝦

    發(fā)病蝦: 2011年8月在江蘇南通東凌養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病池塘采取, 部分病蝦個(gè)體現(xiàn)場(chǎng)取其鰓、肝胰臟、腸道等組織器官固定, 部分樣品放干冰帶回實(shí)驗(yàn)室-70℃感染實(shí)驗(yàn)及鑒定備用。

    健康蝦: 2011年9月在江蘇省海洋水產(chǎn)研究所繁殖育種基地采取, 選擇體表干凈, 活力強(qiáng), 體長(zhǎng)(5±0.5)cm, 體質(zhì)量(2.3±0.3)g, 肢體健全個(gè)體進(jìn)行WSSV、TSV及IHHNV的檢測(cè), 檢測(cè)結(jié)果為陰性樣品作為感染實(shí)驗(yàn)用蝦。

    1.2.3 人工注射感染

    病毒粗提液的制備按謝數(shù)濤[14]等的方法并進(jìn)行部分調(diào)整后對(duì)病蝦體內(nèi)WSSV進(jìn)行粗提。取體表發(fā)紅、顯微觀察甲殼帶有白斑且PCR擴(kuò)增為陽(yáng)性的瀕死病蝦, 在冰浴下剪碎, 按0.1 g組織加入1 mL TN緩沖液(pH 7.4), 于勻漿器中勻漿, 將勻漿液以3 500 r/min離心15 min, 棄沉淀, 將上清液經(jīng)0.45 μm孔徑濾膜過(guò)濾, 過(guò)濾后液體即為病毒粗提液。

    取健康蝦進(jìn)行試驗(yàn)分組, 分別為空白組、注射生理鹽水組、注射病毒液組, 各組設(shè)立平行A組和B組, 注射劑量為0.2 mL。每個(gè)小水泥池養(yǎng)殖100尾脊尾白蝦進(jìn)行觀察實(shí)驗(yàn)。每天監(jiān)測(cè)各組蝦的生理狀態(tài), 并記錄各組死亡個(gè)數(shù), 并收集瀕死蝦固定后, 進(jìn)行超微細(xì)胞病理觀察。另外, 每天取對(duì)照組、注射生理鹽水組及注射病毒液組5只死亡蝦(未死亡或死亡不足5只時(shí)取同樣設(shè)置組補(bǔ)足數(shù)量)進(jìn)行WSSV的病毒檢測(cè), 檢測(cè)方法同上。

    2 結(jié)果

    2.1 脊尾白蝦發(fā)病特征

    江蘇南通東凌海水養(yǎng)殖場(chǎng)以及大豐裕華灘海水養(yǎng)殖場(chǎng)于2011年8月和2011年9月分別發(fā)生了脊尾白蝦大量死亡現(xiàn)象。發(fā)病蝦(圖1)表現(xiàn)為反應(yīng)遲鈍, 沿池塘四周慢慢游動(dòng); 攝食量減少, 甚至不攝食。蝦體發(fā)紅, 胃腸空虛(圖1-1), 甲殼易于剝落, 甲殼部白斑肉眼觀察不明顯, 對(duì)頭胸甲及尾部甲殼顯微觀察可見(jiàn)明顯白斑(圖1-2)。

    圖1 發(fā)病脊尾白蝦 Fig.1 The infected shrimp

    2.2 發(fā)病蝦WSSV、TSV、IHHNV等相關(guān)病原檢測(cè)結(jié)果

    應(yīng)用分子生物學(xué)手段對(duì)3種常見(jiàn)蝦類病毒進(jìn)行了檢測(cè), 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 所有的樣品中, WSSV的檢測(cè)率為100%, 而TSV和IHHNV檢出率都為0, 詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1。在WSSV檢測(cè)過(guò)程中, 雖然有20%的樣品僅第一對(duì)引物檢測(cè)為陰性, 但第二對(duì)引物檢測(cè)表現(xiàn)為陽(yáng)性, 此類樣品的WSSV檢測(cè)結(jié)果仍應(yīng)判為陽(yáng)性。

    2.3 WSSV對(duì)脊尾白蝦的致病性

    感染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中, 注射病毒粗提液組在感染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第2天后就出現(xiàn)攝食量減少, 部分蝦離群在水面上獨(dú)游, 游動(dòng)時(shí)失去平衡, 部分蝦長(zhǎng)臥池底對(duì)外界刺激反應(yīng)減弱。感染實(shí)驗(yàn)第3天, 注射病毒組部分蝦失去攝食行為, 身體發(fā)紅, 游動(dòng)靠邊, 注射生理鹽水組也有個(gè)別死亡。在第4天注射病毒組出現(xiàn)了死亡, 隨后死亡個(gè)數(shù)逐漸增加, 死亡高峰出現(xiàn)在第8天, 14 d后注射病毒組感染實(shí)驗(yàn)總累積死亡率達(dá)到68.5%, 死亡個(gè)體表現(xiàn)為游動(dòng)緩慢, 不攝食, 通體微紅, 頭胸甲部在顯微觀察下有白色斑點(diǎn)。

    應(yīng)用分子生物學(xué)方法對(duì)感染后的發(fā)病個(gè)體以及死亡個(gè)體都進(jìn)行了檢測(cè), 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 所有的發(fā)病及死亡個(gè)體蝦都能檢出WSSV。

    表2 脊尾白蝦人工感染病毒死亡統(tǒng)計(jì)及病毒檢測(cè)結(jié)果 Tab. 2 The mortality of artificial infected Exopalaemon carinicauda Holehuis and virus test results

    2.4 病毒電鏡觀察

    對(duì)健康蝦、發(fā)病蝦及感染蝦的鰓、肝胰臟及腸道組織器官細(xì)胞切片觀察發(fā)現(xiàn), 健康蝦的細(xì)胞核形態(tài)正常, 核膜與核孔結(jié)構(gòu)清晰, 線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及微管等器官形態(tài)正常, 未見(jiàn)明顯的病毒粒子和其他病原(圖2-1)。在發(fā)病蝦與感染實(shí)驗(yàn)病蝦的各組織器官的細(xì)胞核出現(xiàn)腫脹, 染色質(zhì)消失(圖2-2); 線粒體變圓, 內(nèi)嵴消失, 甚至出現(xiàn)空泡化等一系列的細(xì)胞病理變化(圖2-2, 2-3)。另外, 在各組織器官的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中都發(fā)現(xiàn)了大量的桿狀病毒, 病毒粒子大小約為(130~170)nm×(305~405)nm; 核衣殼呈子彈形, 一端較細(xì)而一端較粗, 完整病毒粒子由核心、衣殼和囊膜構(gòu)成, 核心與核衣殼結(jié)合緊密, 囊膜為單位單層膜結(jié)構(gòu)(圖2-2, 2-3, 2-4)。

    3 討論

    3.1 WSSV的致病性

    圖2 WSSV感染下引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化 Fig. 2 Changes of Exopalaemon carinicauda Holehuis cell ultrastructure induced by WSSV infection

    作者通過(guò)對(duì)發(fā)病蝦及其感染蝦的體表癥狀、細(xì)胞病理、病毒分子生物學(xué)檢測(cè)及病毒感染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了WSSV對(duì)脊尾白蝦的感染及致病性研究。首先, 體表癥狀表明, 池塘發(fā)病蝦與感染蝦死亡癥狀基本一致。其次, 在感染實(shí)驗(yàn)中, 將病毒粗提液最后通過(guò)濾膜過(guò)濾, 以避免其他病原因素, 如弧菌[18-19]、寄生 蟲[20]等因素的影響, 結(jié)果顯示, 感染蝦出現(xiàn)了大量的死亡, 14 d累積死亡率達(dá)68.5%, 表明WSSV對(duì)脊尾白蝦具有較強(qiáng)的致病性。再次, 對(duì)實(shí)驗(yàn)蝦病毒分子 生物學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 發(fā)病蝦及感染蝦WSSV為陽(yáng)性, TSV及IHHNV未檢出, 由此可以排除其他兩種病毒的可能性。最后, 對(duì)發(fā)病蝦、健康蝦及感染蝦的細(xì)胞超微觀察后, 發(fā)現(xiàn)WSSV健康蝦的細(xì)胞形態(tài)正常, 在各組織器官的細(xì)胞質(zhì)中未見(jiàn)WSSV粒子, 而發(fā)病蝦與感染蝦都出現(xiàn)了明顯的病理變化, 且細(xì)胞病理變化相似, 在各組織器官的細(xì)胞質(zhì)中還發(fā)現(xiàn)了大量的成熟或裝配的WSSV粒子。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合柯赫氏法則, 作者認(rèn)為, WSSV感染脊尾白蝦并可以導(dǎo)致大規(guī)模的死亡。

    3.2 脊尾白蝦感染W(wǎng)SSV的特征與死亡率

    WSSV感染甲殼類動(dòng)物基本都會(huì)引起甲殼表皮細(xì)胞、鰓上皮細(xì)胞的組織器官壞死, 進(jìn)而在寄主甲殼部分產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)白色斑點(diǎn), 如中國(guó)對(duì)蝦[2]、斑節(jié)對(duì)蝦[6]及克氏原螯蝦(Cambarus proclarkii)[21]發(fā)病時(shí)甲殼帶有的明顯白斑。脊尾白斑感染W(wǎng)SSV死亡時(shí)身體發(fā)紅, 甲殼部白色斑點(diǎn)肉眼不可見(jiàn), 但剝離后在光鏡下可見(jiàn), 這與斑節(jié)對(duì)蝦[7]的死亡特征有些類似, 正因?yàn)闊o(wú)明顯白點(diǎn)和體表發(fā)紅, 則很容易與TSV的感染[16]特征相混淆。WSSV對(duì)大部分蝦類都是強(qiáng)致病性病毒, 據(jù)相關(guān)流行病學(xué)的研究報(bào)道, 該病毒可引起中國(guó)對(duì)蝦、南美白對(duì)蝦及斑節(jié)對(duì)蝦等蝦類80%以上的死亡率, 在實(shí)驗(yàn)條件下會(huì)更高。在作者的感染實(shí)驗(yàn)中脊尾白蝦死亡率為68.5%, 而在野外自然池塘養(yǎng)殖條件下死亡率僅在30%~40%, 死亡率明顯低于其他經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖蝦類。另外, WSSV感染并引起脊尾白蝦的死亡周期與其他蝦類也有所不同。據(jù)WSSV流行病學(xué)研究報(bào)道, WSSV引起蝦類的死亡一般在夏末秋初, 因池塘理化因子如溫度[22]、溶解氧[23]、鹽度[24]的劇變及多種病原因子如弧菌與病毒的共同作用毒力加倍下[25], 死亡率達(dá)到高峰。但作者對(duì)脊尾白蝦流行病學(xué)調(diào)查后發(fā)現(xiàn), 除夏末秋初的死亡高峰期外, 從春季開(kāi)始就有零星死亡, 且進(jìn)入秋末冬初氣溫較低時(shí), 部分養(yǎng)殖池塘仍出現(xiàn)較高的死亡率。分析原因, 作者認(rèn)為, 這與脊尾白蝦的苗種獲取方式有關(guān), 脊尾白蝦為抱卵孵化蝦類, 目前苗種以種蝦留池自繁的方式為主, 因此初步推斷WSSV長(zhǎng)期感染是因?yàn)椴《镜拇怪眰鞑? 其傳播機(jī)制正在研究中。

    [1] Lightner D V, Revdman R M. Shrimp diseases and current diagnostic methods [J]. Aquaculture, 1998, 164: 201-220.

    [2] Lo C F, Kou G H. Virus-associated white spot syndrome of syndrome in Taiwan: a review [J]. Fish Pathol, 1998, 33: 365-371.

    [3] Chou H Y, Huang C Y, Wang C H, et al. Pathology of a baculovirus infection causing white spot syndrome in cultured penaeid shrimp in Taiwan [J]. Disease of Aquatic Organisms, 1995, 23: 165-173.

    [4] 倢黃 , 宋曉玲, 于佳, 等.桿狀病毒性的皮下及造血組織壞死對(duì)蝦暴發(fā)性流行病的病原和病理學(xué)[J]. 海洋水產(chǎn)研究, 1995, 16(1): 1- 10.

    [5] Boonyaratpalin S, Supamattaya K, Kasornchandra J, et al. Non-occluded baculo-like virus, the causative agent of yellow head disease in the black tiger shrimp [J]. Fish Pathol, 1993, 28(3): 103-109.

    [6] Magbanua F O, Natividad K T, Migo V P, et al. White spot syndrome virus (WSSV) in culturedPenaeus mondomin the Philippines[J]. Disease of Aquatic Organisms, 2000, 42: 77-82.

    [7] 翁少萍, 何建國(guó), 鐘慰, 等.斑節(jié)對(duì)蝦白斑綜合癥桿狀病毒致病性及組織細(xì)胞特異性研究[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)論叢, 1996, 增刊: 16-22.

    [8] 張呂平, 胡超群, 任春華.對(duì)蝦白斑桿狀病毒(WSBV)對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦血液病理學(xué)研究[J].熱帶海洋, 2000, 19(3): 1-8.

    [9] 李明云.池養(yǎng)脊尾白蝦的繁殖、生長(zhǎng)及其最大持續(xù)輪捕量的初步探討[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào), 1994,18(2):85-92.

    [10] 王興強(qiáng), 閻斌倫, 甡馬 , 等.脊尾白蝦生物學(xué)及養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展[J].齊魯漁業(yè), 2005, 22(8):21-23.

    [11] 徐加濤, 徐國(guó)成, 于斌, 等.脊尾白蝦繁殖生物學(xué)及人工育苗生產(chǎn)技術(shù)[J].中國(guó)水產(chǎn), 2007, 4:52-55.

    [12] 吳友呂, 陳全震.脊尾白蝦桿狀病毒病研究[J].水產(chǎn)科技情報(bào), 1995, 22(1):8-13.

    [13] 雷質(zhì)文, 倢黃 , 史成銀, 等.白斑綜合癥病毒(WSSV)的宿主調(diào)查[J].海洋與湖沼, 2002, 33(3): 250-258.

    [14] 謝數(shù)濤, 何建國(guó), 閆慶生, 等.對(duì)蝦白斑癥病毒的分離純化及形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2000, 39(4): 90-93.

    [15] Lo C F, Hsu H C, Tsai M F, et al. Specific genomic DNA fragment analysis of different geographical clinical samples of shrimp white spot syndrome virus[J]. DIS Aquat Org, 1999,35: 175-185.

    [16] Nunan L M, Poulos B T, Lightner D V. Reverse transcription polymerase chain (RT-PCR) used for the detection of Taura Syndrome virus(TSV) in experimentally infected shrimp[J]. Dis Aquat Org, 1998, 34: 87-91.

    [17] Nunan L M, Poulos B T, Lightner D V. Use of polymerase chain reaction (PCR) for the detection of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) in penaeid shrimp [J]. Mar Biotechnol, 2000,2: 319-328.

    [18] 陳強(qiáng), 鄢慶枇, 甡馬 .溶藻弧菌致病性研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué), 2006, 30(8):83-89.

    [19] Alapide-Tendencia E V, Dureza L A. Isolation ofVibriospp.frompenaeus monodon(fabricius) with red disease syndrome[J]. Aquaculture, 1997, 154: 107-114.

    [20] 許文軍, 謝建軍, 施慧, 等.池塘養(yǎng)殖脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)感染血卵渦鞭蟲的研究[J]. 海洋與湖沼,2010, 3(41): 396-402.

    [21] 丁正峰, 薛輝, 夏愛(ài)軍, 等.白斑綜合征病毒在養(yǎng)殖克氏原螯蝦中感染流行研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 31(4): 129-133.

    [22] Sung H. Characterisation of monoclonal antibodies to haemocyte subpopulations of tiger shrimp (Penaeus monodon): immunochemical differentiation of three major haemocyte types[J]. Fish & Shellfish Immunology, 1999, 9(3): 167-179.

    [23] 劉發(fā)義, 趙鴻儒. 對(duì)蝦養(yǎng)殖池中若干水質(zhì)問(wèn)題探討[J].海洋科學(xué), 1991, 15(3): 6-8.

    [24] Hauton C, Hawkins L E, Hutchinson S. The effects of salinity on the interaction between a pathogen (Listonella anguillarum) and components of a host (Ostrea edulis) immune system[J]. Comp Biochem Physiol, 2000, 127: 203-212.

    [25] Lee K K, Yang T I, Liu P C, et al. Dual chanllenges of infectious pancreatic necrosis virus and Vibrio carchariae in the grouper,Epinephelussp.[J]. Virus Research, 1999, 66: 131-134.

    猜你喜歡
    脊尾甲殼白蝦
    疫情當(dāng)下,上半年華東地區(qū)小棚、工廠化、土塘白蝦如何應(yīng)對(duì)?
    低估
    江南詩(shī)(2020年3期)2020-06-08 10:20:40
    脊尾白蝦“紅”起來(lái)了畝產(chǎn)可達(dá)五百斤!
    六價(jià)鉻離子在脊尾白蝦和三疣梭子蟹體內(nèi)的富集動(dòng)力學(xué)
    乙?;幚韺?duì)含銀甲殼胺纖維性能的影響
    苯并[a]芘在脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)體內(nèi)富集的動(dòng)力學(xué)研究
    納米級(jí)甲殼胺對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究
    脊尾白蝦仿生態(tài)規(guī)模養(yǎng)殖試驗(yàn)
    长腿黑丝高跟| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日韩欧美免费精品| av在线天堂中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 99国产综合亚洲精品| 18禁美女被吸乳视频| 欧美激情高清一区二区三区| av超薄肉色丝袜交足视频| 操出白浆在线播放| 一进一出抽搐动态| 99久久国产精品久久久| 热99re8久久精品国产| x7x7x7水蜜桃| 99热6这里只有精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 99精品久久久久人妻精品| 女人被狂操c到高潮| 午夜久久久在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产区一区二久久| 国产视频内射| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久草成人影院| 天堂影院成人在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久 成人 亚洲| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美丝袜亚洲另类 | 一级毛片女人18水好多| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 麻豆一二三区av精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 搞女人的毛片| 亚洲精品在线美女| 又紧又爽又黄一区二区| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品影院久久| 美女大奶头视频| 午夜免费观看网址| 久久久国产精品麻豆| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 99久久无色码亚洲精品果冻| 麻豆国产av国片精品| e午夜精品久久久久久久| √禁漫天堂资源中文www| 国产成人av激情在线播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久精品人妻少妇| 色在线成人网| 国产一区在线观看成人免费| 深夜精品福利| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲黑人精品在线| 男女视频在线观看网站免费 | 亚洲精品久久国产高清桃花| 久9热在线精品视频| e午夜精品久久久久久久| 国产精品 欧美亚洲| 看免费av毛片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 午夜亚洲福利在线播放| 欧美成人性av电影在线观看| 十八禁人妻一区二区| 在线观看日韩欧美| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 啦啦啦韩国在线观看视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 一级黄色大片毛片| 成人av一区二区三区在线看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲,欧美精品.| 黑丝袜美女国产一区| 1024视频免费在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 国产成人欧美在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美日本视频| 岛国在线观看网站| 亚洲精品国产区一区二| 欧美又色又爽又黄视频| 午夜福利一区二区在线看| 视频区欧美日本亚洲| 欧美成人性av电影在线观看| 最近在线观看免费完整版| aaaaa片日本免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 很黄的视频免费| 久久伊人香网站| 久久久久久久久中文| 免费无遮挡裸体视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 女性生殖器流出的白浆| 午夜福利视频1000在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产高清视频在线播放一区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 一区二区三区精品91| 久久草成人影院| 热re99久久国产66热| 久久国产精品影院| 99国产极品粉嫩在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产成人精品久久二区二区91| 午夜老司机福利片| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美又色又爽又黄视频| 久久99热这里只有精品18| 视频区欧美日本亚洲| 国产欧美日韩一区二区精品| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜激情av网站| 日韩免费av在线播放| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久久久久大精品| 欧美黑人巨大hd| 国产区一区二久久| 脱女人内裤的视频| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产主播在线观看一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 又大又爽又粗| 老司机福利观看| 成人一区二区视频在线观看| 99国产精品一区二区三区| 日韩免费av在线播放| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久中文字幕一级| 一本久久中文字幕| 校园春色视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 成人欧美大片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 波多野结衣高清作品| 欧美黑人巨大hd| 免费在线观看成人毛片| 精品第一国产精品| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品影院久久| 十八禁网站免费在线| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 精品久久久久久久久久免费视频| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲自拍偷在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 12—13女人毛片做爰片一| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 很黄的视频免费| 99精品在免费线老司机午夜| 久久香蕉精品热| 黄色女人牲交| 亚洲国产精品成人综合色| 国内精品久久久久久久电影| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产亚洲在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 男女视频在线观看网站免费 | 国产成人av激情在线播放| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲黑人精品在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 69av精品久久久久久| 精品欧美一区二区三区在线| 又黄又粗又硬又大视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品亚洲av一区麻豆| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 身体一侧抽搐| 波多野结衣高清作品| 一区二区三区精品91| 久久人妻av系列| 在线观看66精品国产| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 12—13女人毛片做爰片一| 久久中文看片网| 国产精品久久视频播放| e午夜精品久久久久久久| 人人妻人人看人人澡| 亚洲五月天丁香| 久久热在线av| 美女午夜性视频免费| 青草久久国产| 搞女人的毛片| 久久久水蜜桃国产精品网| 最新在线观看一区二区三区| 久久国产精品影院| 国产伦人伦偷精品视频| 看黄色毛片网站| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲欧美激情综合另类| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品日韩av在线免费观看| 99热这里只有精品一区 | 亚洲一区高清亚洲精品| 999久久久国产精品视频| 欧美在线一区亚洲| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费在线观看完整版高清| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲在线自拍视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲国产欧美网| 国产一卡二卡三卡精品| 国产成人啪精品午夜网站| www.自偷自拍.com| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久久久久久午夜电影| 欧美一级a爱片免费观看看 | 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 免费高清视频大片| 久久热在线av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品日产1卡2卡| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美中文综合在线视频| 搡老岳熟女国产| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 麻豆成人av在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久精品成人免费网站| 99热这里只有精品一区 | bbb黄色大片| 又紧又爽又黄一区二区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 91九色精品人成在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 精品久久久久久成人av| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黄色成人免费大全| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久狼人影院| 中出人妻视频一区二区| 91成人精品电影| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| a级毛片a级免费在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产区一区二久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 制服诱惑二区| 欧美精品亚洲一区二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| www.www免费av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 免费高清在线观看日韩| 一级毛片高清免费大全| 久久久久久国产a免费观看| 日韩欧美国产在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产成人欧美在线观看| 午夜福利18| 三级毛片av免费| 欧美日韩黄片免| 欧美黑人巨大hd| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美久久黑人一区二区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 成人三级做爰电影| 午夜福利欧美成人| 老司机午夜福利在线观看视频| 波多野结衣高清无吗| 欧美色视频一区免费| 欧美成人午夜精品| 久久精品成人免费网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲av熟女| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产激情偷乱视频一区二区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 黄片播放在线免费| 亚洲精品色激情综合| 久久伊人香网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲avbb在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| www国产在线视频色| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 亚洲片人在线观看| 99热这里只有精品一区 | 免费无遮挡裸体视频| 男女之事视频高清在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美zozozo另类| 中文字幕精品免费在线观看视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 一级毛片女人18水好多| 99在线人妻在线中文字幕| 观看免费一级毛片| 亚洲男人天堂网一区| 制服人妻中文乱码| 99精品欧美一区二区三区四区| 精品久久久久久久久久久久久 | 最新在线观看一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲 国产 在线| 中文字幕人妻熟女乱码| 日本免费一区二区三区高清不卡| 热99re8久久精品国产| 国产爱豆传媒在线观看 | 中文字幕高清在线视频| 欧美性猛交黑人性爽| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲熟妇熟女久久| 久久 成人 亚洲| 欧美激情极品国产一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| av有码第一页| 波多野结衣巨乳人妻| 久久香蕉国产精品| 亚洲国产欧美网| a级毛片a级免费在线| 中文字幕高清在线视频| 国产精品av久久久久免费| 色综合婷婷激情| 欧美性猛交黑人性爽| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久久久久国产a免费观看| 中文字幕av电影在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 精品国产乱子伦一区二区三区| 天堂动漫精品| 真人做人爱边吃奶动态| 俄罗斯特黄特色一大片| 757午夜福利合集在线观看| 两个人视频免费观看高清| 日韩国内少妇激情av| 18禁美女被吸乳视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 日韩欧美三级三区| 欧美最黄视频在线播放免费| 90打野战视频偷拍视频| 无限看片的www在线观看| 香蕉丝袜av| 亚洲专区字幕在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲精品色激情综合| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文字幕高清在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产一级毛片七仙女欲春2 | 美女午夜性视频免费| 校园春色视频在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲熟妇熟女久久| 9191精品国产免费久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 曰老女人黄片| 丝袜人妻中文字幕| 身体一侧抽搐| 精品无人区乱码1区二区| 最好的美女福利视频网| 成人三级做爰电影| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩av在线大香蕉| 一级a爱视频在线免费观看| 国产成人影院久久av| 中文亚洲av片在线观看爽| tocl精华| 婷婷精品国产亚洲av在线| 女人被狂操c到高潮| av在线播放免费不卡| 亚洲第一电影网av| 久久精品影院6| 国产1区2区3区精品| 黑丝袜美女国产一区| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩av在线大香蕉| 亚洲精品在线美女| 热99re8久久精品国产| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 成人欧美大片| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 美女 人体艺术 gogo| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产精品国产高清国产av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人亚洲精品一区在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美亚洲日本最大视频资源| 99热6这里只有精品| 亚洲国产精品999在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久天堂一区二区三区四区| 中文字幕av电影在线播放| 天天添夜夜摸| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 黄片大片在线免费观看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产单亲对白刺激| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 美国免费a级毛片| 免费搜索国产男女视频| 999精品在线视频| 国内精品久久久久久久电影| avwww免费| 91大片在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 在线视频色国产色| 久久午夜综合久久蜜桃| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 性欧美人与动物交配| 久久99热这里只有精品18| 日韩大尺度精品在线看网址| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲色图av天堂| tocl精华| 波多野结衣av一区二区av| 国产精品 欧美亚洲| 长腿黑丝高跟| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 麻豆av在线久日| 久久久久久人人人人人| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美激情 高清一区二区三区| 麻豆一二三区av精品| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲中文字幕日韩| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 国产av一区二区精品久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩精品青青久久久久久| 国产成人av教育| av中文乱码字幕在线| 热99re8久久精品国产| 白带黄色成豆腐渣| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 免费高清在线观看日韩| 成人永久免费在线观看视频| 一夜夜www| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲黑人精品在线| 亚洲专区国产一区二区| 视频在线观看一区二区三区| 久久国产精品影院| 一边摸一边抽搐一进一小说| 不卡一级毛片| 三级毛片av免费| 国产成人系列免费观看| 午夜成年电影在线免费观看| 久热这里只有精品99| 人人澡人人妻人| 视频区欧美日本亚洲| 真人做人爱边吃奶动态| 丝袜美腿诱惑在线| 又黄又粗又硬又大视频| 成人午夜高清在线视频 | 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产黄片美女视频| 最近最新免费中文字幕在线| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| www日本在线高清视频| 午夜亚洲福利在线播放| 国产免费男女视频| 国产黄色小视频在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 香蕉丝袜av| 亚洲国产精品合色在线| a级毛片在线看网站| 午夜两性在线视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久香蕉激情| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 桃色一区二区三区在线观看| 在线视频色国产色| 99热这里只有精品一区 | √禁漫天堂资源中文www| 精品国产美女av久久久久小说| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人亚洲精品av一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 最新美女视频免费是黄的| АⅤ资源中文在线天堂| 成人精品一区二区免费| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 超碰成人久久| 麻豆av在线久日| 在线观看www视频免费| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 黄色女人牲交| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美日本视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美不卡视频在线免费观看 | 午夜福利视频1000在线观看| 男人舔奶头视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 成人av一区二区三区在线看| 国内精品久久久久久久电影| 国产又爽黄色视频| 91大片在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品 国内视频| 精品不卡国产一区二区三区| 制服诱惑二区| www.自偷自拍.com| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产免费av片在线观看野外av| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美精品啪啪一区二区三区| 丝袜人妻中文字幕| 999久久久国产精品视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 一进一出好大好爽视频| 中文字幕av电影在线播放| 国产成人精品无人区| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲精品色激情综合| 国产亚洲精品av在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久中文看片网| 精品国产国语对白av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 老汉色∧v一级毛片| 99热6这里只有精品| 久久99热这里只有精品18| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 嫩草影院精品99| 精品福利观看| 91国产中文字幕| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产成人啪精品午夜网站| av有码第一页| 曰老女人黄片| 欧美色视频一区免费| 色在线成人网| 人人澡人人妻人| 亚洲av电影在线进入| 少妇 在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 丁香欧美五月| 99久久综合精品五月天人人| 天堂动漫精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 香蕉国产在线看| 男女午夜视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 天天添夜夜摸|