藏藥賽北紫堇總生物堿鎮(zhèn)痛藥效學(xué)研究

李海麗 ，潘國(guó)慶 ，酉志亮，姜 偉，南康鵬

1青海民族大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，青海 西寧810007;2 青海省植物化學(xué)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧810007

紫堇屬(Corydalis DC. )全球約320 種，主要產(chǎn)于亞洲。我國(guó)約200 余種，全國(guó)均有分布，以西南部種類分布最多，其中青藏高原約120 余種。賽北紫堇［Corydalis impatiens(Pall.)Fisch］為罌粟科紫堇屬植物［1，2］。賽北紫堇是藏藥應(yīng)用中很重要的藥材，用于治療各種出血、肝炎、膽囊炎、流感等疾病，也有將其用于治療跌打損傷或其它外傷、發(fā)燒、腸胃炎等［3，4］。

但是迄今為止，賽北紫堇藥理活性的研究尚處于空白階段，本試驗(yàn)對(duì)賽北紫堇總生物堿的鎮(zhèn)痛藥理活性進(jìn)行了初步的研究，為藏藥賽北紫堇的臨床用藥提供了理論基礎(chǔ)。

1 材料、動(dòng)物與儀器

1.1 藥品與試劑

藏藥賽北紫堇總生物堿提取物，每克生藥約含0.04399 g 生物堿(藏藥賽北紫堇于2011 年8 月21日采于青海省貴德縣，并經(jīng)由青海省藥檢所藏藥室駱桂法研究員鑒定，總生物堿提取物是由粗粉經(jīng)2%鹽酸滲漉提取，提取液濃縮至小體積后加堿堿化至pH =12，收集沉淀干燥即得，待用時(shí)用生理鹽水稀釋);阿司匹林泡騰片(阿斯利康制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)1101102);生理鹽水;冰醋酸為分析純。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

KM 小白鼠，雌雄兼用，體重(20 ±2)g，購(gòu)于青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，青醫(yī)動(dòng)字第2012004 號(hào)，飼養(yǎng)于青海民族大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)室，環(huán)境溫度22～26 ℃，相對(duì)濕度55%～65%。動(dòng)物飲用純凈水，飼料購(gòu)于青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(普通全價(jià)顆粒飼料Ⅱ號(hào))，適應(yīng)環(huán)境一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。

1.3 試驗(yàn)儀器

RB-200 智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司);XB-5200B 超聲波清洗(寧波新芝生物科技股份有限公司);FA1604 電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);金馬牌JPT-5 架盤天平(上海岑達(dá)天平秤有限公司);灌胃器;量筒等。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.2 對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛的影響［5，6］

取健康雌性小鼠，體重18～22 g，實(shí)驗(yàn)前對(duì)小鼠進(jìn)行篩選，智能熱板儀溫度設(shè)定在(55.0 ±0.5)℃，預(yù)熱10 min。將小鼠置于熱板儀上，以放置熱板儀至出現(xiàn)小鼠舔后足所需時(shí)間(s)為該鼠的正常痛閾值，重復(fù)2 次，每次間隔30 min，以2 次痛閾值平均值作為該小鼠給藥前的正常痛閾值。凡在5 s 內(nèi)或在30 s 后才出現(xiàn)舔后足及跳躍者均棄之不用。選出合格小鼠50 只，隨機(jī)分成5 組，每組10 只，空白對(duì)照(生理鹽水)組，陽(yáng)性對(duì)照(阿司匹林)組，藏藥賽北紫堇總生物堿高、中、低組(計(jì)量依據(jù)前期藏藥賽北紫堇總生物堿對(duì)小鼠LD50 測(cè)定的試驗(yàn)，根據(jù)藥典以其LD50 8.55 mg/mL 生物堿的0.2 倍、0.15倍、0.1 倍為高中低劑量)。按表1 給藥，灌胃給藥1次/天，連續(xù)灌胃7 d，末次給藥后15、30、45、60 min測(cè)定痛閾值，若給藥后小鼠的痛閾值超過(guò)60 s，立即取出，以免燙傷，其痛閾值以60 s 計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 賽北紫堇總生物堿對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響(x+s)Table 1 Effect of Saibei Corydalis on pain threshold of mice in hot-plate test (±s)

表1 賽北紫堇總生物堿對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響(x+s)Table 1 Effect of Saibei Corydalis on pain threshold of mice in hot-plate test (±s)

注:與空白對(duì)照組比較* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01。Note:Compare with control * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01.

組別Group劑量Dose(mg/kg)給藥前痛閾值The pain threshold before administration(s)給藥后不同時(shí)間的痛閾值The pain threshold after administration(s)15 min 30 min 45 min 60 min空白對(duì)照組Control — 12.20 ±0.65 13.92 ±4.22 12.89 ±3.47 12.44 ±4.56 13.41 ±2.97阿司匹林組Aspirin 40 13.00 ±4.16 21.91 ±19.63＊＊ 18.53 ±10.78＊＊ 0.81 ±5.37＊＊ 15.60 ±5.15紫堇高劑量組Saibei Corydalis-H 34.2 13.25 ±2.57 18.36 ±3.83* 20.53 ±1.45＊＊ 34.11 ±4.00＊＊＊ 16.36 ±3.04*紫堇中劑量組Saibei Corydalis-M 25.65 14.79 ±3.27 16.13 ±4.80 15.92 ±4.28 17.95 ±3.64* 15.64 ±2.62紫堇低劑量組Saibei Corydalis-L 17.1 12.96 ±3.17 13.41 ±6.16 14.47 ±5.42 16.91 ±4.19 14.63 ±4.62

結(jié)果顯示賽北紫堇總生物堿高、中、低劑量組均能顯著提高小鼠對(duì)熱反應(yīng)的痛閾值，在給藥45min后各組出現(xiàn)最大痛閾值，并且高劑量組與空白對(duì)照組比較在各時(shí)間段均出現(xiàn)顯著性差異，顯示藏藥賽北紫堇總生物堿對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛具有鎮(zhèn)痛作用。

2.3 對(duì)醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響［7，8］

取健康小鼠50 只，體重18～22 g，隨機(jī)分為5組，每組10 只，空白對(duì)照(生理鹽水)組，陽(yáng)性對(duì)照(阿司匹林)組，藏藥賽北紫堇總生物堿高、中、低組(計(jì)量依據(jù)前期藏藥賽北紫堇總生物堿對(duì)小鼠LD50測(cè)定的試驗(yàn)，根據(jù)藥典以其LD50 8.55 mg/mL 生物堿的0.2 倍、0.15 倍、0.1 倍為高中低劑量)。灌胃給藥1 次/天，連續(xù)灌胃7 d，每組小鼠連續(xù)灌胃給藥1 周后，再腹腔注0.6%的醋酸溶液0.2 mL，注射醋酸15 min 后，觀察記錄小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)并計(jì)算各組平均值和抑制百分率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 賽北紫堇總生物堿對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(±s)Table 2 Effect of Saibei Corydalis on writhing body response of mice induced by acetic acid (±s)

表2 賽北紫堇總生物堿對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(±s)Table 2 Effect of Saibei Corydalis on writhing body response of mice induced by acetic acid (±s)

注:與空白對(duì)照組比較* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01。Note:Compare with control * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01.

組別Group劑量Dose(mg/kg)扭體次數(shù)Number ofwrithing抑制率Inhibition (%)Control－45.7 ±10.2 0阿司匹林組Aspirin 250 26.8 ±13.4＊＊ 41.4紫堇高劑量組Saibei Corydalis-H 34.2 25.1 ±3.5＊＊ 45.1紫堇中劑量組Saibei Corydalis-M 25.65 27.9 ±9.6＊＊ 38.9紫堇低劑量組Saibei Corydalis-L 17.1 30.2 ±10.1*空白對(duì)照組33.9

結(jié)果顯示阿司匹林組和賽北紫堇總生物堿各組的扭體次數(shù)均明顯減少，均與空白對(duì)照組比較有顯著性差異，顯示賽北紫堇總生物堿對(duì)醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)產(chǎn)生的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

3 討論

紫堇屬植物絕大多數(shù)具清熱解毒，除濕止痛功效，用于發(fā)燒感冒、風(fēng)濕痹痛，外治瘡瘍癰腫等癥。藏藥賽北紫堇中醫(yī)藥用部位為全草，清熱解毒，用于腫痛，疥癖瘡毒，毒蛇咬傷刀傷等，藏醫(yī)藥用部位為全草，譯名桑格絲哇，可活血散瘀利氣止痛，治胃炎，胃潰瘍跌打損傷，坐骨神經(jīng)痛，另有藏醫(yī)用止血記載［1］。

植物化學(xué)研究表明，本屬植物含多種生物堿，是防治心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病及抗病毒、抗癌的有效成分［4］，但鎮(zhèn)痛藥效學(xué)仍處于空白階段，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用小鼠熱板法和醋酸扭體法觀察藏藥賽北紫堇總生物堿的鎮(zhèn)痛作用。在熱板實(shí)驗(yàn)中，藏藥賽北紫堇生物堿延長(zhǎng)了小鼠的痛閾值，說(shuō)明藥賽北紫堇生物堿對(duì)由熱引起的疼痛有一定緩解作用;扭體實(shí)驗(yàn)是化學(xué)刺激物注射到小鼠腹腔引起深部的、大面積而較持久的疼痛刺激，是篩選鎮(zhèn)痛藥最常用的模型之一，藏藥賽北紫堇生物堿對(duì)冰醋酸引起小鼠的扭體反應(yīng)具有較好的緩解作用。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察到藏藥賽北紫堇高劑量組在30、45 min 時(shí)可明顯延長(zhǎng)小鼠痛閾值，并且藏藥賽北紫堇各組均能減少小鼠扭體次數(shù)，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用［9-11］。

青海產(chǎn)藏藥賽北紫堇植物，海拔在2500～5700 m 間，被藏醫(yī)視為珍貴藥材［12］，并且青海省該植物資源豐富，且易于采收加工，若從藥理方面進(jìn)行嚴(yán)格篩選，有可能制成安全、有效、廉價(jià)的新成藥用于中醫(yī)、藏醫(yī)臨床。

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