紫外分光光度法測(cè)定竹節(jié)參中微量元素硒的含量

鄧旭坤，李 游，蔡 儉，尹文仲，李林靜，米 雪，陳旅翼，朱超珍

(1 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074；2 湖北民族學(xué)院 附屬醫(yī)院，恩施 445000)

硒是人類生命必需的微量元素，具有抗癌、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用[1].研究表明：克山病、大骨節(jié)病、關(guān)節(jié)炎和皮膚癌等幾十種疾病的發(fā)生均與硒有關(guān)[1-3]，故硒對(duì)人體腱康影響很大.此外，植物的含硒量與土壤有關(guān)，土壤含硒量高者，植物含硒量亦高[4].這使富硒藥材的開(kāi)發(fā)利用也日益受到關(guān)注.

恩施州硒資源富甲天下,是我國(guó)迄今發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)高硒區(qū)，擁有世界上唯一獨(dú)立的硒礦床，其土壤中含硒量很高，被譽(yù)為“世界硒都”[5].竹節(jié)參又名竹節(jié)三七，竹節(jié)人參，為五加科植物竹節(jié)參PanaxjaponicusCA.Mey干燥根根莖，主要分布于長(zhǎng)江以南的湖北(恩施)等地區(qū)[6].受恩施獨(dú)特的地理環(huán)境影響，恩施產(chǎn)地的竹節(jié)參藥材硒的含量較其他產(chǎn)地的竹節(jié)參要高，更具有較強(qiáng)的富硒功能，故本研究可為道地藥材的竹節(jié)參獨(dú)特的藥用價(jià)值的研發(fā)提供參考.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(ΜV-1800pc型，上海美譜達(dá)儀器有限公司)，超純水機(jī)(ASWO-0005-Μ 艾科浦，重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DGH-80型，武漢瑞華儀器設(shè)備有限責(zé)任公司).

竹節(jié)參藥材分別購(gòu)買于湖北恩施建始縣、咸豐縣、云南騰沖、云南大理、貴州、陜西，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定.硒標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)購(gòu)于國(guó)家計(jì)量科學(xué)研究院(GBW(E)080215)，使用時(shí)配成1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液.5％EDTA-2Na溶液、1％鄰苯二胺溶液、8.5％鹽酸溶液、10％氫氧化鈉溶液、甲苯、濃硝酸、高氯酸均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為超純水.

1.2 藥材的處理

[7～9]，將藥材用蒸餾水洗凈，打成粉末，放在60℃電熱鼓風(fēng)干燥箱里烘干，準(zhǔn)確稱取2.00 g樣品于100 mL錐形瓶中，加入濃硫酸10.00 mL，濃硝酸-高氯酸(2︰1)20.00 mL，過(guò)夜消化12 h.水浴加熱至有棕色的NO2產(chǎn)生，待白煙基本除盡，再加入10.00 mL濃度為8.5％鹽酸溶液，繼續(xù)水浴加熱至產(chǎn)生白煙，達(dá)到消化終點(diǎn).用蒸餾水定容于100 mL容量瓶中備用.

1.3 樣品的測(cè)定方法

將本試驗(yàn)中藥材按照“1.2”項(xiàng)下方法處理，準(zhǔn)確量取藥材的消化液0.50 mL倒入25 mL容量瓶中，加蒸餾水定容，加入5％EDTA-2Na溶液2.00 mL，用HCL和NaOH溶液調(diào)節(jié)溶液pH= 2.0，加入1％鄰苯二胺溶液2.00 mL，避光，放置2 h.用10.00 mL甲苯萃取，大力振蕩5 min，于分液漏斗中靜置10 min，分離甲苯層，以隨行試劑作空白，于335 nm紫外吸收處檢測(cè).

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇

精密吸取1 μg/mL的硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液5.00 mL依“2.2”項(xiàng)，測(cè)定紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上200～500 nm不同的波長(zhǎng)下吸光度，結(jié)果表明335 nm處為最大吸收波長(zhǎng)，故選擇335 nm為測(cè)定波長(zhǎng).

2.2 絡(luò)合酸度的影響

分別取1.0 μg/mL硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液5.00 mL于6個(gè)25 mL錐形瓶中，加蒸餾水定容，加入5％ EDTA-2Na溶液2.00 mL，用HCL和NaOH溶液調(diào)節(jié)pH分別為1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0，各加入1％鄰苯二胺2.00 mL，室溫避光放置2 h，加入10.0 mL甲苯，大力振蕩5 min，移入分液漏斗中靜置10 min，測(cè)得不同pH下的吸光度如圖1所示.圖1中顯示，當(dāng)絡(luò)合反應(yīng)酸度pH>3.0時(shí)，萃取液吸光度急劇下降；PH在1.0～3.0，吸光度基本不變，表明該反應(yīng)對(duì)體系的酸度有很好的選擇性；pH在2.0處有最大吸光度值，故選擇pH為2.0.

pH

2.3 絡(luò)合劑用量的影響

改變鄰苯二胺用量以考察絡(luò)合劑用量對(duì)萃取液吸光度的影響.取6份5.00 mL的硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1.0 μg/mL)于6個(gè)25 mL容量瓶中，其他試驗(yàn)步驟同“2.2”，分別加入1％鄰苯二胺0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2.由圖2可見(jiàn)，鄰苯二胺用量大于2.0 mL時(shí)，萃取液吸光度值基本不變.故本試驗(yàn)選擇鄰苯二胺用量為2.0 mL.

V(鄰苯二胺)/mL

2.4 絡(luò)合時(shí)間的影響

絡(luò)合時(shí)間影響絡(luò)合劑與試劑間的作用時(shí)間，為研究不同絡(luò)合時(shí)間對(duì)萃取液吸光度的影響，取6份5.00 mL的硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1.0 μg/mL)，按“1.3”項(xiàng)下試驗(yàn)步驟，測(cè)定吸光度.絡(luò)合時(shí)間在90～150 min范圍內(nèi)最穩(wěn)定(圖3)，選擇絡(luò)合時(shí)間為120 min.

t/min

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別取1 μg/mL硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于6個(gè)25 mL錐形瓶中，按照“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度值，由吸光度值與硒含量繪制硒工作曲線，得回歸方程為：y=0.0215x-0.0002，r= 0.9997.結(jié)果表明，微量元素硒在0～5 μg間吸光度線性關(guān)系良好.

2.6 不同產(chǎn)地藥材的硒的含量測(cè)定

準(zhǔn)確量取不同產(chǎn)地藥材的消化液0.10 mL倒入25 mL容量瓶中，按照“2.2”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度值，并計(jì)算微量元素硒的含量，結(jié)果見(jiàn)表1.由表1可知，湖北恩施竹節(jié)參中的硒含量最高，其中建始縣和咸豐縣硒含量分別為1.68 mg/g和1.52 mg/g.

表1 不同來(lái)源藥材中的硒的含量

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取0.50 g竹節(jié)參(恩施)藥材粉末6份，分別精確加入10.00 mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL).按照“2.1”項(xiàng)下方法消化，“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度值.計(jì)算平均加樣回收率為101.43 ％，RSD為3.74 ％.

3 結(jié)語(yǔ)

本文所測(cè)來(lái)自湖北恩施、云南、貴州、陜西地區(qū)的6份竹節(jié)參藥材中，來(lái)自恩施地區(qū)的竹節(jié)參藥材硒的含量最高，其中建始縣的硒的含量最高為1.68 mg/g，咸豐縣為1.52 mg/g，貴州產(chǎn)竹節(jié)參硒含量最低為0.03 mg/g，其余地區(qū)藥材硒的含量也與恩施產(chǎn)竹節(jié)參有較大差異.故來(lái)自“世界硒都”恩施地區(qū)的道地藥材竹節(jié)參更有其獨(dú)特的藥用價(jià)值.

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