中山地區(qū)健康成人外周血CD4+T淋巴細胞參考區(qū)間的建立

高賽珍 歐 慧 魯婧婧 李兆琦 朱遠鋒 羅小銘 劉洪波

廣東省中山市疾病預(yù)防控制中心，廣東中山 528403

CD4+T淋巴細胞是免疫反應(yīng)的中心細胞，并為HIV感染的主要靶細胞。人體感染了HIV后，可導(dǎo)致CD4+T淋巴細胞數(shù)量的不斷減少，從而繼發(fā)免疫缺陷。CD4+T淋巴細胞計數(shù)可以評價HIV感染者免疫狀況、預(yù)測判斷疾病進程、評價抗病毒治療效果和估測預(yù)后，為HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀況最明確的指標。目前，我國尚未建立Partec PAS流式細胞儀計數(shù)CD4+T淋巴細胞的生物參考區(qū)間，中山地區(qū)亦未建立本地區(qū)人群的CD4+T淋巴細胞計數(shù)生物參考區(qū)間。本研究使用Partec PAS流式細胞儀測定了140例中山地區(qū)健康成人外周血的CD4+T淋巴細胞數(shù)，以確定本地區(qū)健康成人外周血CD4+T淋巴細胞的生物參考區(qū)間。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本研究采用配額抽樣的方法，選取140名15～59歲的本地區(qū)健康個體，分為5組：15～19歲年齡組，男9名，女8名；20～29歲年齡組，男17名，女18名；30～39歲年齡組，男20名，女20名；40～49歲年齡組，男15名，女15名；50～59歲年齡組，男9名，女9名。納入對象需經(jīng)常規(guī)體檢無異常，實驗室檢測HBV表面抗原以及HCV、HIV和梅毒抗體均陰性，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和血細胞常規(guī)計數(shù)均正常。

1.2 檢測儀器及試劑

德國Partec公司的PAS型流式細胞儀和配套的CD4+T細胞快速計數(shù)試劑、校準標準微球、樣品管及鞘液，質(zhì)控品為BECKMAN IMMUNO-TROLTM Cells。

1.3 標本的采集和檢測

采集靜脈血2～3mL，置于含K3-EDTA抗凝劑真空采血管；用標準微球?qū)x器進行校準，然后在樣品管中加入20μL抗凝全血，再加入 20μL PE 標記的 CD4 分子抗體，混勻并于室溫避光放置10～15min使之充分反應(yīng)，最后加入800μL 免洗緩沖液并輕輕混勻上機；質(zhì)控品與樣品同樣處理和測定。處理后的樣品檢測在6h內(nèi)完成。

1.4 統(tǒng)計學處理

用 SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。各組數(shù)據(jù)皆呈正態(tài)分布且具方差齊性，因此各年齡組間的CD4+T淋巴細胞計數(shù)結(jié)果均值比較采用方差分析，而相同年齡組男性和女性之間的CD4+T細胞均值比較采用兩獨立樣本t檢驗，以x±1.96s確定參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 離群值的剔除

根據(jù)CLSI C28-A3 文件[1]，各組數(shù)據(jù)按大小順序排列后，將疑似離群值與其相鄰值的差值（D）和數(shù)據(jù)全距（R）相除，若D/R＞1/3則考慮為離群值。根據(jù)該文件規(guī)則，男性20～29歲年齡組一數(shù)據(jù)為離群值而被剔除。

2.2 中山地區(qū)健康成人的CD4+T淋巴細胞計數(shù)結(jié)果

表1 中山地區(qū)不同年齡和性別的健康成人CD4+T淋巴細胞計數(shù)結(jié)果比較（個/μL）

2.3 中山地區(qū)健康成人的外周血CD4+ T淋巴細胞數(shù)參考區(qū)間

由于所分各組的CD4+T淋巴細胞數(shù)均值差異均無統(tǒng)計學意義，因此合并本研究獲得的全部個體的CD4+T淋巴細胞計數(shù)結(jié)果。合并數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，故以（±s1.96）確定其95%的分布范圍，結(jié)果為（804.7±387.3）個/μL。

3 討論

淋巴細胞亞群能反映機體的免疫狀況、判斷藥物療效，并且還可以預(yù)示疾病進展的快慢，因而在感染性疾病、腫瘤和自身免疫性疾病的研究中越來越受到重視。美國疾病預(yù)防控制中心測定成人外周血CD4+T淋巴細胞數(shù)的參考范圍為（844±247）個/μL，并規(guī)定CD4+T淋巴細胞絕對數(shù)≤500個/μL作為AIDS診斷依據(jù)之一，以此作為HIV感染后需要開始進行抗病毒治療的實驗室指標[2]。然而，外周血中淋巴細胞含量受生活環(huán)境、社會經(jīng)濟、種族特點的影響，不同地域及不同種族的正常參考值不盡相同，不同儀器和試劑獲得的結(jié)果也存在一定的偏差。因此，《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）》要求各地應(yīng)建立本地區(qū)的包括CD4+T淋巴細胞絕對計數(shù)的正常參考范圍[3]。

本研究結(jié)果顯示，中山地區(qū)健康成人外周血CD4+T淋巴細胞的參考范圍為（804.7±387.3）個/μL。其變異范圍與陳鐵龍等[4-5]的研究結(jié)果類似，但明顯大于美國和國內(nèi)大都數(shù)實驗室建立的CD4+T淋巴細胞參考范圍[6-10]。這可能與使用的儀器、試劑等的不同有關(guān)。另外，本研究結(jié)果表明，不同性別和年齡的健康成人外周血CD4+T淋巴細胞之間沒有差異，這與已有的大部分研究結(jié)果相一致[6-9]。

本研究建立的中山地區(qū)健康成人外周血的CD4+T淋巴細胞計數(shù)參考范圍，可以為本地區(qū)艾滋病患者的臨床分期診斷、抗病毒治療效果提供參考依據(jù)。由于兒童外周血CD4+T細胞的參考范圍與成人不同[3]，我們下一步工作將建立本地區(qū)不同年齡段兒童的外周血CD4+T細胞計數(shù)的參考范圍。

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