不同處理方法對(duì)受體牛同期發(fā)情效果的比較研究

薛仰全，倪興軍，余四九

同期發(fā)情是胚胎移植的關(guān)鍵技術(shù)，母牛的發(fā)情周期由多種激素相互調(diào)節(jié)控制，利用外源激素同期發(fā)情可以大大提高母牛繁殖力，縮短產(chǎn)犢間隔，節(jié)約人力、物力、時(shí)間，方便集約化生產(chǎn)管理，促進(jìn)人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用以及提高胚胎移植效率，在生產(chǎn)上有著重要的實(shí)用價(jià)值。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)比PRID＋PGF2α法和PGF2α＋PGF2α法誘導(dǎo)母牛同期發(fā)情效果，為酒泉本地胚胎移植選擇高效的同期發(fā)情方法。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

選擇酒泉當(dāng)?shù)赝岭s牛、西雜牛和黑白花奶牛為同期發(fā)情受體牛。要求具備：直檢無(wú)繁殖機(jī)能障礙、生殖器官疾病和傳染病，個(gè)體大，體型結(jié)構(gòu)良好，骨盆較寬大，膘情中等水平；年齡在3～6歲之間，無(wú)流產(chǎn)史。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)

甘肅祁牧乳業(yè)有限責(zé)任公司、酒泉市雄鵬乳業(yè)有限責(zé)任公司、酒泉市旺達(dá)養(yǎng)殖專業(yè)合作社和酒泉市肅州區(qū)清水鎮(zhèn)東三村養(yǎng)殖小區(qū)。

1.3 試驗(yàn)時(shí)間

2011年3月至2011年7月。

1.4 試驗(yàn)藥品

PGF2α（氯前列烯醇：0.2mg／2mL／瓶、批號(hào)000513）：上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所；PRID（Y型牛孕酮緩釋陰道栓，1.9g／枚）：上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所。

1.5 同期發(fā)情處理方法

方法Ⅰ：PRID＋PGF2α法：不考慮受體牛的發(fā)情周期，在周期的任意一天給受體牛放入PRID，此時(shí)定為0d。在放入PRID的第9d，肌肉注射PGF2α0.4mg。在第11d取出PRID，然后觀察發(fā)情。

方法Ⅱ：PGF2α＋PGF2α法：不考慮受體牛的發(fā)情周期，在周期的任意一天每頭受體牛肌注PGF2α0.6mg／次，并把該天記做第0d，第11d再肌注PGF2α0.4mg。

1.6 發(fā)情判斷標(biāo)準(zhǔn)

從觀察受體牛發(fā)情之日起，以穩(wěn)定站立接受爬跨，發(fā)情旺盛期從陰門(mén)流出大量透明黏液，作為發(fā)情判斷標(biāo)準(zhǔn)，并確定為發(fā)情時(shí)間。同期發(fā)情率為取出PRID或二次注射PGF2α后12～48h內(nèi)發(fā)情的百分率，黃體合格為A、B級(jí)。以發(fā)情當(dāng)日為第0d計(jì)算，第7d人工授精或移植胚胎，70d直檢確定受胎率。

1.7 飼養(yǎng)管理方式

按飼養(yǎng)企業(yè)的正常飼養(yǎng)方案飼養(yǎng)管理。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS Statistics17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)意義分析。

2 結(jié)果

2.1 不同處理方法同期發(fā)情率的比較

在本試驗(yàn)結(jié)果表明，如表1所示。三個(gè)試驗(yàn)區(qū)域平均同期發(fā)情率：PGF2α＋PGF2α法為74.29%，PRID＋PGF2α法為76.92%，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＝0.792＞0.05），但PRID＋PGF2α法處理的受體牛平均同期發(fā)情率高于PGF2α＋PGF2α法受體牛的平均同期發(fā)情率。

2.2 不同同期發(fā)情方法胚移妊娠率的比較

在試驗(yàn)同期發(fā)情率比較研究的基礎(chǔ)上，將甘肅祁牧乳業(yè)有限責(zé)任公司從加拿大愛(ài)德現(xiàn)代牛業(yè)（中國(guó)）有限公司購(gòu)買(mǎi)的40枚荷斯坦奶牛胚胎移植。結(jié)果如下：

由表2可知，PRID＋PGF2α處理的受體牛移植妊娠率為66.67%，用 PGF2α＋PGF2α法處理的受體牛移植妊娠率為63.14%，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＝0.816＞0.05）。但PRID＋PGF2α法處理的受體牛移植妊娠率略高于用PGF2α＋PGF2α法處理的受體牛移植妊娠率。

表1 不同同期發(fā)情處理方法發(fā)情率比較表

表2 不同同期發(fā)情方法對(duì)受體牛移植妊娠率的影響

3 討論

3.1 不同處理方法對(duì)同期發(fā)情效果的影響

同期發(fā)情技術(shù)是通過(guò)溶黃體或撤除外源性激素使外周血液中孕酮或孕激素含量迅速下降，以達(dá)到同期發(fā)情的目的（Roche J，1981）。牛同期發(fā)情處理主要采用3種制劑：抑制卵泡發(fā)育的制劑，如孕激素；溶解黃體的制劑，如前列腺素；促進(jìn)卵泡發(fā)育的制劑，如促性腺激素［1］。

在整個(gè)母牛的發(fā)情周期中，黃體期約占70%。而黃體分泌的孕酮能對(duì)卵泡的發(fā)育成熟產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用，只有當(dāng)黃體消退后，孕酮含量下降，卵泡才能發(fā)育至成熟，母牛才能進(jìn)入發(fā)情。因此，控制黃體的消長(zhǎng)，就是控制母牛發(fā)情的關(guān)鍵［2］。目前，可通過(guò)制造人為的黃體期和消除黃體來(lái)控制黃體的消長(zhǎng)。制造人為的黃體期就是用孕激素處理，使黃體自然消退。消除黃體最有效、便捷的方法是肌肉注射PGF2α及其類(lèi)似物，促進(jìn)黃體溶解使孕酮水平下降，卵泡發(fā)育趨向一致，從而導(dǎo)致同期發(fā)情［3］。

本試驗(yàn)三個(gè)區(qū)域平均同期發(fā)情率PGF2α＋PGF2α法為74.29%，PRID＋PGF2α法為76.92%，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＝0.792＞0.05），說(shuō)明這2種方法均可以得到較高的同期發(fā)情率。PRID＋PGF2α法處理的受體牛同期發(fā)情率高于PGF2α＋PGF2α法受體牛的同期發(fā)情率，與 Hansel W（1979）和SmithR.D（1984）的結(jié)果一致［4］，這可能是由于孕酮長(zhǎng)時(shí)間處理的結(jié)果。

3.2 不同同期發(fā)情方法對(duì)移植妊娠率的影響

放置PRID栓使母牛的生殖系統(tǒng)環(huán)境中始終維持較高濃度的孕酮水平，撤栓后孕酮水平急劇下降，在4d之內(nèi)卵巢就會(huì)有卵泡發(fā)育成熟排卵，氯前列烯醇的使用選擇在第9d卵巢黃體即將完全退化、卵泡開(kāi)始發(fā)育的結(jié)合時(shí)間注射，高水平孕酮的存在，不僅使氯前列烯醇徹底溶解黃體，還使其本身的副作用有所降低，兩者具有很好的協(xié)同作用。前列腺素處理法只有當(dāng)母牛在周期第5～18d（有功能黃體時(shí)期）才能產(chǎn)生發(fā)情反應(yīng)。對(duì)于周期第5d以前的黃體，前列腺素并無(wú)溶解作用。第一次處理后，經(jīng)10～12d后，再對(duì)牛進(jìn)行第二次處理，這時(shí)所有的母牛均處于周期第5～18d之內(nèi)，連續(xù)二次處理母牛同期發(fā)情率就顯著提高［5］。

不同發(fā)情方法對(duì)受體牛胚胎移植妊娠率有一定影響。目前在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較普遍，并且也比較認(rèn)可的同期發(fā)情方法主要有兩種。一種是不考慮受體牛的發(fā)情周期，在周期的任意一天給受體牛放入CIRD，此時(shí)定為0d，在放入CIRD的第9d，肌肉注射氯前列烯醇0.5mg。在第11d取出，然后觀察發(fā)情；另一種是在受體牛發(fā)情周期中的任何一天肌肉注射氯前列烯醇0.5mg，此時(shí)定為0d，48h后不用觀察受體牛發(fā)情，在第9～11d時(shí)同樣肌肉注射氯前列烯醇0.5mg，48h以后觀察發(fā)情［2］。相對(duì)于后者來(lái)說(shuō)前者的發(fā)情效果要好，并且最終的發(fā)情可用率也較高。據(jù)張立等報(bào)道一次發(fā)情率可以達(dá)到77.5%，可用率為90.7%，這對(duì)于胚胎移植實(shí)踐是有效的同期發(fā)情方法［6］。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示：受體牛用PRID＋PGF2α法同期發(fā)情后的胚胎移植妊娠率高于用PGF2α二次注射法處理的奶牛受體妊娠率，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），與李波、張立等的報(bào)道相似。

3.3 發(fā)情藥物的成本和操作程度比較

在相同的環(huán)境下，從經(jīng)濟(jì)實(shí)用角度看，選擇PGF2α二次注射法比PRID＋PGF 2α法作同期發(fā)情處理好。主要表現(xiàn)在：一是成本低。兩種處理方法相比，PGF2α二次注射法不需支出PRID所需要的費(fèi)用，PRID＋PGF2α法成本（500.00元／1.9g×10枚＋50.00 元／0.2mg×10支 ＝55 元）比 PGF2α＋PGF2α法（50.00元／0.2mg×10支＋50.00元／0.2mg×10支＝10元）成本高約4～5倍。二是操作方便、省工省時(shí)。PGF2α二次注射法不用埋栓、拔栓等，1～4d牛即可發(fā)情，而PRID＋PGF2α法第10～13d牛才發(fā)情。

4 小結(jié)

4.1 同情發(fā)情率的差異

用PRID＋PGF2α法和PGF2α＋PGF2α法分別處理受體牛，同期發(fā)情率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。用PRID＋PGF2α法處理受體牛同期發(fā)情率（76.92%）高于用PGF2α＋PGF2α法處理的同期發(fā)情率（74.29%）。

4.2 妊娠率的差異

用PRID＋PGF2α法處理黑白花受體牛移植妊娠率（66.67%）高于用PGF2α＋PGF2α法處理黑白花受體牛移植妊娠率（63.14%），兩種不同同期發(fā)情方法對(duì)受體牛移植妊娠率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。在奶牛胚胎移植中可優(yōu)選PRID＋PGF2α法處理受體牛。

4.3 經(jīng)濟(jì)效益差異

在相同的環(huán)境下，從經(jīng)濟(jì)實(shí)用角度看，PRID＋PGF2α法成本比PGF2α＋PGF2α法成本高約4～5倍，而PGF2α＋PGF2α法成本低、操作方便、省工省時(shí)。

［1］李俊生，桑潤(rùn)滋，馬亞賓.生殖激素提高母牛繁殖率的研究進(jìn)展［J］.河北畜牧獸醫(yī)，2000，16（5）：14.

［2］高慶華，宮長(zhǎng)海，韓春梅.奶牛誘導(dǎo)發(fā)情試驗(yàn)［J］.中國(guó)草食動(dòng)物，2001，21（3）：32.

［3］高慶華，何良軍，馬賓祥.不同方法對(duì)受體母牛誘導(dǎo)同期發(fā)情效果的比較［J］.中國(guó)草食動(dòng)物，2006，26（1）：16.

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［5］滕 勇.GnRH、PGF2α誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情效果的比較［J］.黃牛雜志，2002，28（5）：1－2.

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