正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方苦蛇黃洗劑提取工藝

★ 許時(shí)貴 丁志軍 羅美蘭 甘慧群 (江西省皮膚病專(zhuān)科醫(yī)院 南昌330001)

復(fù)方苦蛇黃洗劑由苦參、烏梢蛇、黃柏等7 味中藥組成，具有清熱燥濕、解毒、殺蟲(chóng)、祛風(fēng)止癢等功效。主要治療風(fēng)濕熱蟲(chóng)所致皮膚瘙癢癥以及疥瘡、濕疹、丘疹性蕁麻疹、體股癬、夏季皮炎等引起的瘙癢性皮膚病。為了將復(fù)方苦蛇黃洗劑更好地應(yīng)用于臨床，我院研究開(kāi)發(fā)出攜帶及使用方便的復(fù)方苦蛇黃洗劑(批準(zhǔn)文號(hào):贛藥制字H20100009)，并對(duì)其制備工藝進(jìn)行了研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1 100 高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫科技有限公司);CP225D 微量天平(德國(guó)Sartorius 公司);KQ －500E 醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

苦參堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110753 －200512);乙腈為色譜純、甲醇為色譜純;磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的確定

復(fù)方苦蛇黃洗劑處方中有多味藥材，有效成分眾多，其中苦參為君藥，具有清熱燥濕，殺蟲(chóng)，利尿，止癢功效。苦參主要含有生物堿成分，而以苦參堿含量最高，因此選擇苦參堿為含量測(cè)定指標(biāo)。

2.2 苦參堿的含量測(cè)定［1］

2.2.1 測(cè)定方法

照高效液相色譜法《中華人民共和國(guó)藥典》(2010 版)一部附錄附錄ⅥD 測(cè)定。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈－甲醇－磷酸鹽緩沖液(pH6.8)－三乙胺(18∶18∶70∶0.1)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取苦參堿對(duì)照品10mg，置50mL 容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，精密吸取5mL，置10mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL 含苦參堿100μg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。即得。

2.2.4 供試品溶液的制備

精密吸取本品2mL，加水20mL，用氨試液調(diào)PH值為9 －10，用三氯甲烷提取4 次，每次20mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，?5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液5mL，置10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

圖4 高效液相色譜圖

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝

2.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

通過(guò)預(yù)試驗(yàn)對(duì)影響水煎煮的各因素進(jìn)行考察，選擇加水量(A)、提取時(shí)間(B)、為影響水煎煮的主要因素，每個(gè)因素選取3 個(gè)水平。因素水平見(jiàn)表1。

2.3.2 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

按處方比例稱(chēng)取苦參等藥材800g，共9 份，根據(jù)L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，將藥材浸泡0.5 小時(shí)后提取。提取完畢后，將不同條件下的加水煎煮2 次，濾過(guò)，合并濾液，分別濃縮至900mL，備用。以苦參堿為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論:從上表結(jié)果并按直觀分析，影響水煎提取工藝的因素為A ＞B，最佳提取工藝為A3B3，故擬選擇A3B3，即苦參等藥材加水煎煮2 次，第1 次加12倍量水，煎煮2 小時(shí)，第2 次加10 倍量水，煎煮1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液濃縮至900mL。

2.4 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A3B3，重復(fù)安排3批試驗(yàn)。結(jié)果，苦參堿含量分別為2.70mg/mL、2.73mg/mL、2.69mg/mL，與正交試驗(yàn)較好的結(jié)果相近，表明優(yōu)選的工藝合理、可行。

3 討論

本試驗(yàn)曾參考文獻(xiàn)［2－4］采用不同流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈－ 甲醇－ 磷酸鹽緩沖液(pH6.8)－三乙胺(18∶18∶70∶0.1)溶液即能將指標(biāo)成分與雜質(zhì)峰徹底分開(kāi)，且陰性試驗(yàn)無(wú)干擾，故采用此流動(dòng)相進(jìn)行洗脫。

采用正交設(shè)計(jì)，并根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，確定了水提工藝的最佳條件，即稱(chēng)取水提取藥材，加水煎煮兩次，第1 次加12 倍量水，煎煮2 小時(shí)，第2 次加10 倍量水，煎煮1.5 小時(shí)，其中第1 次提取前先將藥材浸泡0.5 小時(shí)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［S］. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:188.

［2］王穎，王秋香.高效液相色譜法測(cè)定婦炎康濃縮丸中苦參堿的含量［J］.中國(guó)藥房，2005，16(24):1 901.

［3］廖銀根，丁志軍，羅美蘭，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選荊防止癢顆粒提取工藝［J］.中國(guó)藥房，2011，22(39):3 673 －3 675.

［4］任潔，劉光斌，鄒干朋，等.HPLC 測(cè)定舒陰洗液中苦參堿的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(18):76，77.