豬血紅蛋白ACE抑制肽的分離和理化性質(zhì)研究

鄧惠玲，劉 嘉，陳光鏡，闞建全，*

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶400715；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（重慶），重慶400715）

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（The angiotensin I-converting enzyme，ACE）是一種二肽基肽酶，在血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中起關(guān)鍵作用。ACE一方面通過水解作用，使不具有催化活性的血管緊張素Ⅰ成為具有促進(jìn)血管收縮作用的血管緊張素II；另一方面通過降解作用，使具有舒張血管緊張作用的舒緩肌肽失活[1]。ACE酶活性過高會導(dǎo)致高血壓病的產(chǎn)生，因此需要服用ACE抑制劑。一些合成的ACE抑制劑，如卡托普利、賴諾普利、卡托普利等被用來治療高血壓和心血管疾病，降壓效果顯著。但是研究發(fā)現(xiàn)，長期使用這些合成抑制劑會導(dǎo)致近44%的病人出現(xiàn)諸如咳嗽、皮疹、味覺失調(diào)等副作用[2]。Ferreira[3]首次在美洲矛頭蝮的毒液中發(fā)現(xiàn)ACE抑制肽，此后，食源性ACE抑制肽受到眾多學(xué)者的關(guān)注，被認(rèn)為是最有希望取代合成ACE抑制劑的天然活性物質(zhì)[4]。近年來，從各種食物蛋白質(zhì)中分離純化出許多ACE抑制肽，如Anne等[5]從牛奶中分離純化出了a-1a f105-110，β-lg f9-14，f15-20，as1-cn f142-147，f157-164，f194-199，β-cn f108-113，f177-183和193-1989多肽。Hiroyuki等[6]從鰹魚肉中分離純化出Leu-Lys-Pro-Asn-Met五肽。Daodong等[7]從脫脂牛奶中分離純化出Val-Pro-Pro三肽。Zhao等[8]從海參中分離純化出Glu-Asp-Pro-Gly-Ala五肽。Wang等[9]從牡蠣中分離純化出Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Gln-Arg-Phe九肽。Hee等[10]從阿拉斯加州鱈魚皮中分離純化出Gly-Pro-Leu三肽。ACE抑制肽的降血壓活性與其純度密切相關(guān)，目前肽類的分離純化方式主要包括大孔樹脂[11]、凝膠色譜[12]、離子交換色譜[13]、疏水相互作用色譜[14]、高效液相色譜[15]等。本研究以豬血血紅蛋白的胃蛋白酶水解液為原料，使用大孔吸附樹脂DA201-C和葡聚糖凝膠Sephadex LH-20對其進(jìn)行初步分離，并對初步分離后具有較高ACE抑制活性的組分進(jìn)行理化性質(zhì)研究，旨在為豬血紅蛋白ACE抑制肽的工業(yè)開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

豬血血紅蛋白粉 實驗室自制；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）（純度2～6U/mg）、馬尿酰-組胺酰-亮氨酸（HHL） Sigma公司；Pepsin胃蛋白酶（酶活20萬U/g） Sigma公司；胰蛋白酶（酶活1萬U/g）、胰凝乳蛋白酶（酶活1萬U/g） 南寧東恒華道生物科技有限公司；Sephadex LH-20 美國GE公司；DA201-C大孔樹脂（孔徑0.315～1.25） 滄州寶恩化工有限公司。

ALPAAI-4LSC型真空冷凍干燥機(jī) 德國Chris公司；1-15PK型冷凍離心機(jī) SIGMA公司；LC-20AD型高效液相色譜儀 日本島津公司；DBS-100型電腦全自動部分收集器 上海滬西分析儀器廠；HL-2型恒流泵 上海滬西分析儀器廠；UV-2450PC型紫外可見分光光度計 SHIMADZU。

1.2 實驗方法

1.2.1 豬血紅蛋白酶解液的制備[16]取25g豬血紅蛋白粉，加入蒸餾水（502mL），配制成4.98%（m/v）底物，以HCl（1mol/L）調(diào)節(jié)底物pH至1.98，再按照胃蛋白酶∶豬血血紅蛋白粉為3∶100（w/w）的比例加入胃蛋白酶進(jìn)行水解，37.6℃酶解，以HCl維持反應(yīng)體系的pH恒定。水解4h后，100℃水浴10min滅酶，流水冷卻至37℃，以10000r/min，5℃離心10min，收集上清液，真空冷凍干燥后備用。

1.2.2 豬血紅蛋白ACE抑制肽的純化實驗

1.2.2.1 大孔樹脂DA201-C的分離實驗[17]在室溫下，將大孔樹脂浸泡于95%乙醇中24h，使其充分溶脹；然后用無水乙醇淋洗至220nm處無吸收峰；再用蒸餾水洗至無乙醇味。接著浸泡于5倍體積的5%NaOH中8h，用蒸餾水洗至pH為7；最后浸泡于5倍體積的5%HCl中8h，用蒸餾水洗至pH為7，備用。在層析柱中裝滿預(yù)處理好的大孔吸附樹脂DA201-C（2.6cm×50cm），濕法上柱；將濃度為45mg/mL的豬血紅蛋白多肽溶液30mL以0.5mL/min的流速流經(jīng)層析柱，用紫外檢測器檢測流出液在280nm處的吸光度（A280nm），以A280nm≥0.05時停止上樣。將500mL的75%（v/v）的乙醇以1.0mL/min的流速流經(jīng)層析柱，以A280nm≥0.05時停止上樣。收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥，備用。并進(jìn)行ACE抑制活性的測定和脫鹽率[18]測定。

式中，A1為脫鹽前樣品中的灰分；A2為脫鹽后樣品中的灰分。

1.2.2.2 葡聚糖凝膠Sephadex LH-20的分離實驗[19]在室溫下將葡聚糖凝膠LH-20浸泡于55%乙醇中24h后，使其充分溶脹；然后用去離子水洗至無乙醇味，溶脹24h。0.2mol/L的HCl中浸泡12h，用去離子水洗至中性，備用。

在層析柱中裝滿預(yù)處理好的葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（1.6cm×100cm），濕法上柱；取0.5g 1.2.2.1中的洗脫組分作為純化樣品溶于10mL超純水中配成50mg/mL的上樣濃度；以去離子水為洗脫劑，流速為0.2mL/min在280nm處檢測吸光度，收集不同組分真空冷凍干燥，備用。

1.2.3 ACE抑制活性的測定[20]在試管中依次加入1000μL硼酸鹽緩沖溶液（pH 8.3，0.2mol/L）、200μL酶解液以及10μL ACE，把以上混合液放入37℃恒溫水浴中保溫5min，再加入50μL5mmol/LHHL（pH8.3，0.3mol/L NaCl）于37℃中恒溫30min，加入100μL 1mol/L HCl終止反應(yīng)，至室溫，取5μL反應(yīng)產(chǎn)物過0.45μm水相膜處理后進(jìn)樣，通過反相高效液相色譜洗脫圖譜定量馬尿酸的生成量，從而計算ACE抑制肽的抑制率，ACE抑制率計算公式如下：

式中，A1為不存在ACE抑制肽時的峰面積；A2為存在ACE抑制肽時的峰面積。

色譜條件：高壓液相色譜系統(tǒng)：SHIMADZU LC-20AD；檢測器：SPD-M20A；色譜柱：SHIMADZU VPODS 4.6mm×150mm；洗脫液為乙腈：超純水（24：76，v/v）；洗脫液流速：0.4mL/min；檢測波長：228nm，進(jìn)樣量：5μL。

半數(shù)抑制濃度（IC50）：指當(dāng)抑制率為50%時，所需抑制劑的質(zhì)量濃度（mg/mL）計算方法為：檢測多個質(zhì)量濃度梯度下ACE抑制肽的抑制率，通過SPSS軟件的概率系統(tǒng)（Probit）分析獲得IC50值。

1.2.4 豬血紅蛋白ACE抑制肽的理化性質(zhì)實驗

1.2.4.1 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的溶解性實驗[21]取0.5g經(jīng)Sephadex LH-20分離得到的組分α-Ⅱ，加入30mL去離子水中，以1mol/L HCl和1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH2.0～10.0，室溫下50r/min攪拌1h；9000r/min離心20min，取上清液測定其中的蛋白質(zhì)含量[22]，公式如下：

式中，M1為樣品的質(zhì)量；M2為上清液中的肽含量。

1.2.4.2 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的模擬消化道環(huán)境穩(wěn)定性實驗[23]取0.1g經(jīng)Sephadex LH-20分離得到的組分α-Ⅱ用去離子水配成1mg/mL的溶液（樣品溶于0.1mol/L的KCl-HCl緩沖液，pH2.0）中，以1mol/L HCl調(diào)節(jié)pH到2.0，加入胃蛋白酶∶ACE抑制肽（α-Ⅱ）為1∶100（w/w）的比例加入胃蛋白酶于37℃下水解4h。反應(yīng)結(jié)束后將其置于100℃水浴10min滅酶；并以1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，取50mL水解液在5000r/min下離心15min，測定上清液的ACE抑制活性。在剩余的50mL水解液中再加入胰蛋白酶∶胰凝乳蛋白酶∶ACE抑制肽（α-Ⅱ）為1∶1∶100（w/w/w）的比例加入胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶于37℃下水解4h。反應(yīng)結(jié)束后將其置于100℃水浴10min滅酶。再取適量水解液于5000r/min離心15min，測定上清液的ACE抑制活性。

1.2.4.3 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的熱穩(wěn)定性實驗[24]取0.1g經(jīng)Sephadex LH-20分離得到的組分α-Ⅱ用去離子水配成1mg/mL的溶液，以1mol/L HCl和1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH7.0，分別置于溫度為25、35、45、55、65、75、85、95℃下水浴2h，再測定其ACE抑制活性。

1.2.4.4 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的pH實驗[25]取0.1g經(jīng)Sephadex LH-20分離得到的組分α-Ⅱ用去離子水配成1mg/mL的溶液，調(diào)節(jié)HAc-NaAc緩沖溶液的pH為2、3、4、5、6、7、8、9、10，室溫放置2h，再測定其ACE抑制活性。

1.2.4.5 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的鹽穩(wěn)定性實驗[26]取0.1g經(jīng)Sephadex LH-20分離得到的組分α-Ⅱ分別溶于0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mol/L的NaCl溶液中，濃度為1mg/mL，室溫放置2h，再測定其ACE抑制活性。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理方法 實驗數(shù)據(jù)均是經(jīng)過3次平行實驗得到的平均值，并計算其誤差，SPSS18.0分析數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，Simaplot10軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬血紅蛋白ACE抑制肽的分離實驗結(jié)果

圖1 Sephadex LH-20分離豬血紅蛋白ACE抑制肽的HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of ACE inhibitory peptides from porcine hemoglobin separated after Sephadex LH-20

表1 不同分離方法得到的分離組分的ACE活性抑制比較Table 1 Comparison of inhibition of ACE activity of fractions prepared by different separation methods

從表1和圖1可知，與酶解原液相比，分離后的組分IC50差異極顯著（p＜0.01）。經(jīng)過大孔樹脂DA201-C分離的組分ACE抑制活性明顯提高，其IC50為0.87，脫鹽率為94.52%；再經(jīng)過葡聚糖凝膠Sephadex LH-20的分離，洗脫出3個組分，各個組分的ACE抑制活性與經(jīng)過大孔樹脂DA201-C分離的組分相比也均有提高；其中組分α-Ⅱ的抑制活性最強(qiáng)，IC50為0.21。根據(jù)凝膠過濾色譜的分離原理，分子量大的組分先出峰，分離量小的分子后出峰，由此可知，其分子量大小順序為：α-Ⅰ＜α-Ⅱ＜α-Ⅲ。

2.2 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的溶解性實驗結(jié)果

圖2 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的溶解性Fig.2 Solubility of ACE inhibitory peptides from porcine hemoglobin（α-Ⅱ）

從圖2可知，豬血紅蛋白ACE抑制肽α-Ⅱ的溶解性在pH7附近最低，溶解度僅為50.37%。而升高或降低pH，其溶解度均有所提高。這可能是由于血紅蛋白ACE抑制肽α-Ⅱ是由不同氨基酸組成的短肽，該短肽的等電點位于pH7附近。因此，在這個范圍內(nèi)，分子間沒有作用力，容易聚集，導(dǎo)致溶解度降低；加入酸或堿以后，氨基酸與酸或堿結(jié)合，分子間電荷互相排斥，不易聚集，繼而溶解度變大。

2.3 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的模擬消化道環(huán)境穩(wěn)定性實驗結(jié)果

表2 消化酶對豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）活性的影響Table 2 Effect of digestive enzyme on the activity of ACE inhibitory peptide（α-Ⅱ）from porcine hemoglobin

從表2可知，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）經(jīng)消化酶水解后ACE活性變化不大。跟空白組比較，胃蛋白酶水解后組分的IC50變化不明顯，差異不顯著（p＞0.05），這說明胃蛋白酶對豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性影響非常小；經(jīng)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶水解后的組分的IC50增加了4%，這可能是因為胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶水解了少部分多肽，打斷了某些具有活性的肽段，從而降低了豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性。

2.4 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的熱穩(wěn)定性實驗結(jié)果

由圖3可知，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）在不同溫度下水浴2h后，其ACE抑制活性差異顯著（p＜0.05）有一定的變化。隨著溫度的升高，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的IC50也逐漸增大。當(dāng)溫度在25～55℃時，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性無顯著變化（IC50：0.20～0.25）；繼續(xù)升高溫度，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的IC50也迅速增大，當(dāng)溫度達(dá)到95℃時，其IC50增大到1.93mg/mL。由此可知，高溫對豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性影響較大。

圖3 溫度對豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）活性的影響Fig.3 Effect of temperature on the activity of ACE inhibitory peptide（α-Ⅱ）from porcine hemoglobin

2.5 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的pH實驗結(jié)果

圖4 pH對豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的ACE抑制活性的影響Fig.4 Effect of pH value on the activity of ACE inhibitory peptide（α-Ⅱ）from porcine hemoglobin

從圖4可知，當(dāng)pH在2～7之間時，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性變化幅度很小，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的IC50維持在0.21mg/mL附近。當(dāng)pH大于7時，其IC50值迅速增大；當(dāng)pH為10時，其IC50增大為0.37mg/mL。由此可知，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）在中性和偏酸性的條件下比較穩(wěn)定。

2.6 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的鹽穩(wěn)定性實驗結(jié)果

在胃蛋白酶水解豬血紅蛋白的過程中，需要不斷地加入HCl和NaOH維持體系的pH恒定不變。酶解液在經(jīng)過DA201-C大孔樹脂脫鹽后，其ACE抑制活性有了明顯提高。從圖5可知，當(dāng)NaCl濃度為0.2～0.6mol/L時，豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的IC50均在0.20～0.21mg/mL的范圍內(nèi)小幅波動；當(dāng)NaCl濃度超過0.6mol/L時，其IC50迅速增大；當(dāng)NaCl濃度為1.2mol/L時，IC50為0.33mg/mL。由此可知，在濃度低于0.6mol/L的NaCl溶液中豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性變化小，但當(dāng)其濃度較高于0.6mol/L時，就會顯著降低豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的活性。由此可以進(jìn)一步證明使用DA201-C大孔樹脂對其脫鹽作用是很明顯的。

圖5 NaCl濃度對豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）的ACE抑制活性的影響Fig.5 Effect of NaCl concentration on the activity of ACE inhibitory peptide（α-Ⅱ）from porcine hemoglobin

3 結(jié)論

3.1 豬血紅蛋白的胃蛋白酶水解液經(jīng)大孔樹脂DA201-C和葡聚糖凝膠Sephadex LH-20的初步分離后，其ACE抑制活性具有明顯提高，與酶解原液相比，其IC50最大下降了86%。

3.2 豬血紅蛋白ACE抑制肽（α-Ⅱ）在pH7時溶解度最小，為50.37%；經(jīng)消化酶水解后ACE抑制活性變化不大；在溫度為25～55℃時，ACE抑制活性波動不明顯；在中性和偏酸性的條件下比較穩(wěn)定，在NaCl濃度小于0.6mol/L時，ACE抑制活性較穩(wěn)定。

[1]MURRAY B A，F(xiàn)ITZGERALD R J.Angiotensin converting enzyme inhibitory peptides derived from food proteins：Biochemistry，bioactivity and production[J].Current Pharmaceutical Design，2007，13（8）：773-791.

[2]CHEUNGIW，NAKAYAMAS，MONICANK，etal.Angiotensin-I converting enzyme inhibitory activity of hydrolysates from oat（Avena sativa） proteins by in silico and in vitro analyses[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2009，57（19）：9234-9242.

[3]FERREIRA S H.A bradykinin-potentiating factor（BPF）present in the venom of Bothrops jararaca[J].British Journal of Pharmacology and Chemotherapy，1965，24（1）：163-169.

[4]JIMSHEENA V K，GOWDA R L.Angiotensin I-converting enzyme（ACE） inhibitory peptides derived from arachin by simulated gastric digestion[J].Food Chemistry，2011，125（2）：561-569.

[5]PIHLANTOLEPPALA A，ROKKA T，KORHONEN H.Angiotensin I converting enzyme inhibitory peptides derived from bovine milk proteins[J].International Dairy Journal，1998，8（4）：325-331.

[6]FUJITA H，YOSHIKAWA M.LKPNM：a prodrug-type ACE-inhibitory peptide derived from fish protein[J].Immunopharmacology，1999，44（1/2）：123-127.

[7]PanDao-dong， LuoYong-kang， TANOKURA M.Antihypertensive peptides from skimmed milk hydrolysate digested by cell-free extract of Lactobacillus helveticus JCM1004[J].Food Chemistry，2005，91（1）：123-129.

[8]Zhao Yuan-hui，LiBa-fang，Liu Zun-ying，etal.Antihypertensive effect and purification of an ACE inhibitory peptide from sea cucumbergelatin hydrolysate[J].Process Biochemistry，2007，42（12）：1586-1591.

[9]Wang Jia-pei，Hu Jia-nen，Cui Jin-zhe，et al.Purification and identification of a ACE inhibitory peptide from oyster proteins hydrolysate and the antihypertensive effectof hydrolysate in spontaneously hypertensive rats[J].Food Chemistry，2008，111（2）：302-308.

[10]BYUN H G，KIM S K.Purification and characterization of angiotensin I converting enzyme（ACE）inhibitory peptides from Alaska pollack（Theragra chalcogramma） skin[J].Process Biochemistry，2011，36（12）：1155-1162.

[11]Han Hua，Yi Yang-hua，Li Ling，et al.A new triterpene glycoside from sea cucumber Holothuria leucospilota[J].Chinese Chemical Letters，2007，18（2）：161-164.

[12]KIM M R，KAWAMURA Y，LEE C H.Isolation and identification of bitter peptides of tryptic hydrolysate of soybean 11S glycinin by reverse-phase high-performance liquid chromatography[J].Journal of Food Science，2003，68（8）：2416-2422.

[13]Wu Jiang-ping，Ding Xiao-lin.Characterization of inhibition and stability of soy-protein-derived angiotensinⅠ-converting enzyme inhibitory peptides[J].Food Research International，2002，35（4）：367-375.

[14]TAKUO N，LECH O.Purification of glycomacropeptide from nondialyzable fraction of sweet whey by hydrophobic interaction chromatography on phenyl-agarose[J].Biotechnology Letters，2000，22（5）：413-416.

[15]ALEMAN A，GIMENEZ B，PEREZ-SANTIN E，et al.Contribution of Leu and Hyp residues to antioxidant and ACE-inhibitory activities of peptide sequences isolated from squid gelatin hydrolysate[J].Food Chemistry，2011，125（2）：334-341.

[16]Zhao Qiu-yu，SANNIER F，PIOT J M.Kinetics of appearance of four hemorphins from bovine hemoglobin peptic hydrolysates by HPLC coupled with photodiode array detection[J].Biochimica et Biophysica Acta（BBA） -Protein Structure and Molecular Enzymology，1996，1295（1）：73-80.

[17]Wan J B，Zhang Q W，Ye W C，et al.Quantification and separation of protopanaxatriol and protopanaxadiol type saponins from Panax notoginseng with macroporous resins[J].Separation and Purification Technology，2008，60（2）：198-205.

[18]劉佳.大豆蛋白ACE抑制肽的研究[D].無錫：江南大學(xué)，2008.

[19]RIIHINEN K R，GODECKE T，PAULI G F，et al.Purification ofberry flavonolglycosidesby long-bed gelpermeation chromatography[J].Journal of chromatography A，2012，1244（29）：20-27.

[20]Wu J，ALUKO R，MUIR A.Imp roved Method for Direct High-performance Liquid Chromatography Assay of AngiotensinconvertingEnzyme-catalyzed Reaction[J].Journal of Chromatograpy A，2002，950：125-131.

[21]盛彩虹，劉曄，劉大川，等.紫蘇分離蛋白功能性研究[J].食品科學(xué)，2011，32（17）：137-139.

[22]陳季旺，孫勤，夏文水.魚降壓肽的大孔樹脂分離及其活性穩(wěn)定性[J].食品科學(xué)，2009，30（18）：25-28.

[23]LIESELOT V，GUY S，TOSHIRO M，et al.C（ACE）inhibitory peptide from the gastrointestinal hydrolysate of the cotton leafworm，Spodoptera littoralis[J].Process Biochemistry，2008，43（8）：900-904.

[24]廖丹葵.雞蛋蛋黃蛋白質(zhì)制備降血壓肽的研究[D].南寧：廣西大學(xué)，2006.

[25]楊鋒，馬千里，黃永春.醋蛋中ACE抑制肽的分離及穩(wěn)定性研究[J].食品科學(xué)，2009，30（24）：78-79.

[26]Jiang Jiang，Chen Jie，Xiong You-ling.Structural and emulsifying properties of soy protein isolate subjected to acid and alkaline pH-shifting processes[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2009，57（16）：7576-7583.

[27]潘道東，林璐.DA201-C大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附ACE抑制肽的研究[J].食品科學(xué)，2009，30（5）：20-23.