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    某豬場仔豬大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

    2013-12-03 10:55:24魯志平楊曉玲李云祝吳顯祥
    四川畜牧獸醫(yī) 2013年6期
    關(guān)鍵詞:麥康凱白痢血清型

    魯志平,龐 璞,楊曉玲,孫 霖,李云祝,吳顯祥

    (四川省大竹縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,四川 大竹 635100)

    豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌(Escherichia coli,簡寫E.coli)某些血清型引起的一種豬腸道傳染性疾病,臨床上分為仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病。隨著規(guī)模化、集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,仔豬細(xì)菌性腹瀉的發(fā)病率越來越高,危害也越來越嚴(yán)重。為了掌握四川大竹縣仔豬大腸桿菌病的流行情況,筆者在轄區(qū)內(nèi)某一養(yǎng)豬合作社的豬場采集了疑似仔豬黃、白痢的病料,并進(jìn)行了病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)等相關(guān)研究,為該豬場制定防控措施提供有益參考?,F(xiàn)將有關(guān)結(jié)果報(bào)道如下:

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 病料 選取大竹縣某養(yǎng)豬合作社規(guī)模豬場疑似黃、白痢感染的腹瀉仔豬,采用滅菌棉拭子從發(fā)病、瀕死或死亡仔豬的直腸取樣,共采集疑似病料20份,由大竹縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心診斷室保存。

    1.1.2 培養(yǎng)基及試劑 普通瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯按文獻(xiàn)制備;麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、糖發(fā)酵管、枸櫞酸鹽、MR試劑、VP試劑、靛基質(zhì)等試劑,購自杭州微生物試劑有限公司。

    1.1.3 血清 E.coli O抗原單價(jià)血清,購自中國獸藥監(jiān)察所。

    1.1.4 藥敏片 成套藥敏紙片,含30種抗生素,購自杭州微生物試劑有限公司。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 病原菌的分離培養(yǎng) 將采集的病料分別劃線接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)18~24h;然后挑取典型的單個(gè)菌落分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行純菌增殖,觀察菌落形態(tài),再涂片,作革蘭氏染色、鏡檢。

    1.2.2 生化試驗(yàn) 將純化菌株按腸桿菌科細(xì)菌生化鑒定要求分別接種于微量生化管內(nèi),37℃培養(yǎng)48~72h,觀察并記錄結(jié)果。

    1.2.3 分離菌的血清型鑒定 將經(jīng)形態(tài)特征及生化特性鑒定為E.coli的菌株接種于麥康凱培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24h;挑取純培養(yǎng)物中的光滑菌落,接種于營養(yǎng)瓊脂斜面,37℃培養(yǎng)24h;用2mL 0.5%的石炭酸生理鹽水洗下瓊脂斜面培養(yǎng)物,置小圓底試管中,制成菌懸液;121℃下高壓滅菌2 h,破壞其莢膜抗原,制成高壓抗原。用E.coli O抗原單價(jià)血清進(jìn)行微量凝集試驗(yàn),作血清型鑒定。同時(shí)以高壓抗原和0.5%石炭酸生理鹽水混合物作對照,觀察有無自凝現(xiàn)象。

    1.2.4 藥敏試驗(yàn) 將分離鑒定后的E.coli純培養(yǎng)物均勻地涂布于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上,無菌條件下用滅菌鑷子將藥敏紙片平貼于培養(yǎng)基表面,要求紙片間距離≥24mm、紙片與培養(yǎng)皿邊緣距離≥15mm,且每種藥物需在不同位置貼2片,37℃倒置培養(yǎng),分別于16h和24h觀察并記錄結(jié)果,用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑,并計(jì)算其平均值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 細(xì)菌分離及形態(tài)觀察 經(jīng)過37℃培養(yǎng)24 h后,分離菌純培養(yǎng)物在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長為圓形、邊緣整齊、表面光滑、半透明的小凸起菌落;在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長為圓形、中等大小紅色菌落,直徑為1~2mm;在SS瓊脂培養(yǎng)基上生長為中等大小、均勻紅色、半透明、圓形、稍凸起的光滑菌落;在肉湯培養(yǎng)基中呈渾濁狀態(tài),管底有灰白色沉淀,液面管壁有菌環(huán),伴有糞臭味。

    分離菌經(jīng)涂片,革蘭氏染色、鏡檢,可觀察到中等大小、無芽胞、單個(gè)或多個(gè)排列、形態(tài)較為一致、兩端鈍圓的革蘭氏陰性球桿菌,疑似E.coli。

    2.2 生化鑒定 根據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》,該菌的16項(xiàng)生化鑒定結(jié)果均與E.coli相符,同時(shí)結(jié)合病癥、菌落培養(yǎng)特性及菌體特性,確定該分離菌為E.coli。詳見表1。

    2.3 血清型鑒定 結(jié)果見表2。備檢的E.coli通過定型,分屬于 4 種血清型,優(yōu)勢血清型為 O20、O101、O141,基本代表了目前該養(yǎng)豬合作社豬場仔豬黃、白痢E.coli的主要流行血清型。

    2.4 藥物敏感性試驗(yàn) 分離E.coli菌株對復(fù)達(dá)欣(頭孢他啶)、多粘霉素B高度敏感,對氨芐西林、哌拉西林、頭孢呋辛、阿米卡星、新霉素等藥物中度敏感,對其余17種藥物表現(xiàn)為耐藥或高度耐藥。詳見表3。

    3 小結(jié)與討論

    3.1 隨著集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,由致病性E.coli引起的仔豬腹瀉嚴(yán)重威脅著仔豬的健康,死亡率相對較高,耐過仔豬大多成為“僵豬”,飼料報(bào)酬低;并且該病易與其他豬病混合感染,造成仔豬死亡率更高。因此,開展針對性的監(jiān)測是目前集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)中有效防控該病的重要手段。

    表1 分離菌的生化鑒定結(jié)果

    表2 E.coli O抗原血清型鑒定結(jié)果

    表3 E.coli對30種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)

    3.2 通過對采集的疑似仔豬黃、白痢拭子病料進(jìn)行病原分離、形態(tài)和培養(yǎng)特性觀察及生化鑒定,證實(shí)該分離菌為典型的E.coli。說明該場仔豬在出生后所發(fā)生的腹瀉主要是由致病性E.coli引起的。

    3.3 從本次備檢樣品中分離出的致病性E.coli,有4種血清型,其中血清型O20、O101、O141所占比例較大,表明O20、O101、O141為優(yōu)勢血清型,代表了目前該養(yǎng)豬合作社豬場中仔豬黃、白痢E.coli的主要流行血清型。從全國各地區(qū)報(bào)道的血清型來看,各省市流行的豬源致病性E.coli O型血清型有較大差別,存在地區(qū)性、多樣性,甚至同一地區(qū)的不同豬場,所流行的主要血清型也可能有所不同。此前,四川省其他市、區(qū)、縣的規(guī)?;i場中有關(guān)致病性E.coli O抗原血清型的鑒定及分布還鮮見報(bào)道。因此,定期對豬場的E.coli進(jìn)行分離鑒定,明確當(dāng)前流行的血清型,有利于開展針對性的免疫預(yù)防和臨床診治。

    3.4 由于在養(yǎng)豬生產(chǎn)中濫用抗生素,造成目前E.coli的耐藥譜和耐藥水平不斷提高,而且抗生素在畜體內(nèi)殘留對人類的健康也會(huì)產(chǎn)生不良影響。通過對分離E.coli進(jìn)行耐藥性試驗(yàn),表明該場的E.coli耐藥情況已較為嚴(yán)重,而且呈多重耐藥。30種抗生素類藥物中,只對復(fù)達(dá)欣、多粘霉素B高度敏感,而對氨芐西林、哌拉西林、頭孢呋辛、阿米卡星、新霉素等藥物中度敏感,對其余17種藥物表現(xiàn)為耐藥或高度耐藥。所以在治療過程中,應(yīng)通過采用有效的藥物和適當(dāng)劑量來制定合理的治療方案,做到“有的放矢”。

    3.5 通過本試驗(yàn)研究,掌握了大竹縣該養(yǎng)豬合作社仔豬腹瀉的發(fā)病情況,并篩選出了有效的治療藥物,為制定科學(xué)的飼養(yǎng)管理模式,強(qiáng)化公共環(huán)境衛(wèi)生安全等起到了積極的推動(dòng)作用,也達(dá)到了提高豬場產(chǎn)仔成活率和仔豬育成率的目的。

    參與文獻(xiàn):

    [1] 劉夢元,吳 斌,劉建杰,等.規(guī)?;i場大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測及血清流行病學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2004,24(1):16-18.

    [2] 趙曉靜,高 婕,宋勤葉,等.保定地區(qū)仔豬大腸桿菌病的調(diào)查與對策分析[J].中國動(dòng)物檢疫,2012,29(3):45-46.

    [3] 高月林,解志峰,等.黑龍江省東部地區(qū)腹瀉仔豬大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問,2011,(11):113.

    [4] 陳天壽,等.微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1995:257-260.

    [5] 傅彩霞,鄭瑞峰,郭 峰,等.北京部分地區(qū)仔豬大腸桿菌病血清型調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2012,(3):79-80.

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