中藥復(fù)方外用于大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型療效及不同關(guān)節(jié)腫脹度測(cè)量方法效果的比較*

楊 輝 謝志軍 溫成平

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053）

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是尿酸鹽在關(guān)節(jié)滑膜或軟骨沉積，導(dǎo)致滑膜及關(guān)節(jié)周?chē)M織的炎癥反應(yīng)。本研究通過(guò)觀(guān)察大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的模型，以足趾容積測(cè)量法、關(guān)節(jié)直徑測(cè)量法、關(guān)節(jié)周長(zhǎng)測(cè)量法3種不同方式對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的腫脹度進(jìn)行測(cè)量，系統(tǒng)比較了3種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，為相關(guān)的療效評(píng)價(jià)做參考?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠，體質(zhì)量160～200 g，由上海SIPPR／BK實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)操作在浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心完成。按隨機(jī)區(qū)組法設(shè)計(jì)將大鼠均分為6組：模型組、雷公藤低劑量組、雷公藤高劑量組、青風(fēng)藤低劑量組、青風(fēng)藤高劑量組、扶他林對(duì)照組。每組10只，普通飼料喂養(yǎng) 1周后開(kāi)始局部造模用藥。

1.2 模型制備 實(shí)驗(yàn)性尿酸鹽性踝關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型制作參照Coderre及陳氏法改良進(jìn)行［1-2］。稱(chēng)取10 g水合氯醛，用蒸餾水溶解、稀釋至100 mL，得到10%水合氯醛溶液對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉。稱(chēng)取0.2 g尿酸鈉（Sigma 公司生產(chǎn)，批號(hào) 12OK5305，規(guī)格：每瓶 5 g），充分研細(xì)，加入4 mL 0.9%氯化鈉注射液，配成5%尿酸鈉混懸液，無(wú)菌操作，用4號(hào)注射針頭，將5%尿酸鈉溶液0.2 mL注入各組大鼠右后足內(nèi)踝的脛跗關(guān)節(jié)腔內(nèi)，每只動(dòng)物僅注射1次。針頭探及關(guān)節(jié)囊有落空感為度，注射完成后觀(guān)察脛跗關(guān)節(jié)腔腫脹情況。

1.3 處理方法 造模成功5 h后開(kāi)始用藥，分別于24、30 h換藥治療。模型組：只造模不治療。雷公藤高劑量組：予雷公藤方藥（組成：制川烏、雷公藤、細(xì)辛、山慈菇、、冰片、石膏）生藥濃度18.51 g/kg，外用。雷公藤低劑量組：予雷公藤方藥（組成：制川烏、雷公藤、細(xì)辛、山慈菇、冰片、石膏）生藥濃度6.17 g/kg，外用。青風(fēng)藤高劑量組：予青風(fēng)藤方藥（組成：制川烏、細(xì)辛、山慈菇、青風(fēng)藤、冰片、石膏）生藥濃度20.05 g/kg，外用。青風(fēng)藤低劑量組：予青風(fēng)藤方藥（組成：制川烏、細(xì)辛、山慈菇、青風(fēng)藤、冰片、石膏）生藥濃度6.682 g/kg，外用。扶他林對(duì)照組：予扶他林乳膠劑（外用雙氯芬酸二乙胺乳膠劑，20 g/支，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)）6.682 g/kg，外用。

1.4 檢測(cè)指標(biāo) 分別用足趾容積測(cè)量?jī)x、游標(biāo)卡尺和皮尺（所用皮尺的寬度是6 mm，最小刻度是0.5 mm）測(cè)量各組大鼠左右后足踝關(guān)節(jié)下0.5 mm處的足趾容積、直徑和周長(zhǎng)值。造模前測(cè)量左右足踝作為0 h測(cè)量值，造模后5、24、30、48 h分別測(cè)量大鼠足踝的周長(zhǎng)值和直徑以及足趾容積。觀(guān)察右后足（造模側(cè)）關(guān)節(jié)炎各時(shí)間點(diǎn)腫脹度，腫脹度計(jì)算公式：腫脹率 （%）=（Vt-Vn）/Vn×100%，Vn、Vt分別代表致炎前后足趾容積值（周長(zhǎng)法及直徑法與所測(cè)周長(zhǎng)、直徑計(jì)算公式同上）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（）表示。顯著性檢驗(yàn)先采用重復(fù)測(cè)量的方差分析，采用非配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。多組間均數(shù)比較用單因素方差分析，組內(nèi)前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組足趾腫脹度比較 見(jiàn)表1。雷公藤高劑量組及扶他林對(duì)照組與模型組同時(shí)段比較，踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腫脹度明顯小于模型組（P＜0.05或0.01）。

表1 各組足趾腫脹率（%，）

表1 各組足趾腫脹率（%，）

與模型組同時(shí)段比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2 各組關(guān)節(jié)直徑增加比 見(jiàn)表2。雷公藤高劑量組及扶他林對(duì)照組踝關(guān)節(jié)直徑增加比明顯小于模型組（P<0.05）。

表2 各組關(guān)節(jié)直徑增加比（%，）

表2 各組關(guān)節(jié)直徑增加比（%，）

2.3 各組關(guān)節(jié)周長(zhǎng)增加比 見(jiàn)表3。各組造模后踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)增加比明顯高于造模前（P<0.05），提示造模成功。用藥后，雷公藤高劑量組及扶他林對(duì)照組踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)增加比明顯小于模型組（P<0.05）。

表3 各組關(guān)節(jié)周長(zhǎng)增加比（%，）

表3 各組關(guān)節(jié)周長(zhǎng)增加比（%，）

3 討 論

大鼠痛風(fēng)急性期造模后局部腫脹，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)持續(xù)對(duì)大鼠的局部腫脹度進(jìn)行測(cè)量，急性期的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎在造模后24 h最為明顯，在48 h后開(kāi)始逐步消退，為了便于觀(guān)察局部用藥腫脹度的消退，筆者對(duì)大鼠局部進(jìn)行持續(xù)敷貼給藥，預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)采用多種方法進(jìn)行觀(guān)察，例如自制小夾板、使用橡皮套，但是均不便于局部給藥的劑量控制且容易脫落。最終選用防水性膠布粘好且大小均一的醫(yī)用干棉球固定于大鼠造模側(cè)，再用去針頭的5 mL注射器給干棉球處注入適量的煎煮液，以棉球沒(méi)有浸出藥液為度達(dá)到觀(guān)察目的。

上述結(jié)果說(shuō)明，外用藥治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的療效觀(guān)察僅采用一種方法的測(cè)量是不夠的，應(yīng)多種方法聯(lián)合，且實(shí)施全程監(jiān)測(cè)，但是考慮到測(cè)量步驟煩瑣，所以應(yīng)該尋求最佳的測(cè)量組合以提高實(shí)驗(yàn)效率。足趾容積測(cè)量法因?yàn)槠洳僮骱?jiǎn)便且能準(zhǔn)確讀取測(cè)量值，在關(guān)節(jié)腫脹度的測(cè)量中應(yīng)予以?xún)?yōu)先考慮。周長(zhǎng)法能測(cè)量出關(guān)節(jié)腫脹處的周長(zhǎng)，但是當(dāng)測(cè)量對(duì)象過(guò)多時(shí)，不能保證每次測(cè)量都在同一位置，所以疊加起來(lái)誤差較大。直徑法也同樣面臨上述問(wèn)題。因直徑法只反映局部腫脹度，測(cè)量值較小、誤差大，為減小誤差常需多點(diǎn)測(cè)量，不夠簡(jiǎn)便。

綜上所述，關(guān)節(jié)腫脹度檢測(cè)方法很多，如容積法、直徑法、周長(zhǎng)法、質(zhì)量測(cè)定等。造模的注射部位選取需準(zhǔn)確，保證關(guān)節(jié)的腫脹主要局限在大鼠的同一部位，同時(shí)對(duì)腫脹度的評(píng)測(cè)需要多種方法的聯(lián)用，綜合分析。其中足趾容積測(cè)量法和周長(zhǎng)測(cè)量法是最優(yōu)聯(lián)用組合，容積法測(cè)定過(guò)程中需保證大鼠每次浸入水中同一位置，這個(gè)是容積法測(cè)量的關(guān)鍵所在。傳統(tǒng)中西藥內(nèi)服對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有良好的消炎止痛作用，但其不良反應(yīng)大，其中胃腸道反應(yīng)發(fā)生率高達(dá)80%［3］。有關(guān)中藥外用評(píng)估關(guān)節(jié)腫脹的報(bào)道很少，本觀(guān)察通過(guò)多種方法聯(lián)用來(lái)評(píng)價(jià)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腫脹度，進(jìn)一步驗(yàn)證了在中藥外用評(píng)價(jià)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠腫脹度過(guò)程中，容積法能很好測(cè)量整個(gè)關(guān)節(jié)腫脹度，而周長(zhǎng)和直徑法能更好評(píng)價(jià)局部腫脹。因此，多種方法聯(lián)用為中藥外用評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)腫脹有一定的參考意義。

［1］Coderre TJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rats：an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant［J］.Pain，1987，28：379-393.

［2］陳文照，關(guān)士良，顧瑞生，等.防己黃芪烏苡湯對(duì)急性痛風(fēng)外周神經(jīng)遞質(zhì)的影響［J］.中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1997，12（4）：25-26.

［3］劉湘源.表格式臨床醫(yī)學(xué)系列叢書(shū)：風(fēng)濕病分冊(cè)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2001：202，206-207.