四種呋喃香豆素類(lèi)藥物與溶菌酶的作用機(jī)制及構(gòu)效關(guān)系研究

宋志英，韓 冬，王 娟，仝月菊，高曉亞，文 雯，張愛(ài)平

(山西醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，山西 太原 030001)

溶菌酶(LYSO)是一種作用于微生物細(xì)胞壁的小分子堿性蛋白［1］，能與許多內(nèi)、外源性物質(zhì)結(jié)合，行使其抗菌、消炎和抗病毒等諸多的生物功能［2－4］，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域。LYSO是藥物發(fā)揮藥效的一種重要載體，因而常被用作研究藥物小分子與蛋白相互作用的模型蛋白［5］。

中藥補(bǔ)骨脂具有補(bǔ)腎壯骨、升達(dá)脾胃及納氣止瀉的功效［6］。其主要有效成分有補(bǔ)骨脂素(Psoralen，PSO)、異補(bǔ)骨脂素(Isopsoralen，ISO)、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素(5-Methoxypsoralen，5-MOP)和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素(8-Methoxypsoralen，8-MOP)4種呋喃香豆素類(lèi)藥物(結(jié)構(gòu)式如圖1所示)。

圖1 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)式Fig.1 The structure of four furanocoumarin drugs

呋喃香豆素類(lèi)藥物進(jìn)入人體后首先與蛋白結(jié)合，然后到達(dá)靶組織，從而發(fā)揮其藥理活性。呋喃香豆素類(lèi)藥物與蛋白的結(jié)合力決定其利用率及從循環(huán)系統(tǒng)向靶組織擴(kuò)散的程度，呋喃香豆素類(lèi)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)特性及毒性均會(huì)受到蛋白的顯著影響與控制［7－8］。因此，研究呋喃香豆素類(lèi)藥物與蛋白的相互作用對(duì)了解呋喃香豆素類(lèi)藥物的作用機(jī)理及指導(dǎo)該類(lèi)藥物的臨床合理用藥等具有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值［9－10］。

本文在模擬人體生理?xiàng)l件下，系統(tǒng)研究了4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的相互作用，探討了其對(duì)LYSO的熒光猝滅作用機(jī)制，同時(shí)獲得其與LYSO結(jié)合反應(yīng)的結(jié)合參數(shù)及作用力類(lèi)型;并通過(guò)對(duì)比4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的相互作用，探討其間的構(gòu)效關(guān)系。研究結(jié)果對(duì)于香豆素類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)改造、開(kāi)發(fā)利用及毒性機(jī)理研究等均具有重要意義［11－13］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Cary Eclipse熒光光度計(jì)(Peltier電子恒溫裝置，美國(guó)Varian公司);TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);MOS 450型圓二色譜儀(法國(guó)Biologic公司);AL-104型電子天平(Mettler Toledo儀器(上海)有限公司);pHS-3C數(shù)字酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)。

補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素均購(gòu)自上海順勃生物技術(shù)有限公司(純度均大于98%);儲(chǔ)備液(1.00×10－3mol·L－1)用無(wú)水乙醇(99.7%)配制。其它所用試劑均為分析純。

Tris－HCl緩沖溶液(pH 7.4)用 0.20 mol·L－1的 Tris 和 0.10 mol·L－1鹽酸配制，內(nèi)含 0.1 mol·L－1的 NaCl溶液。

LYSO(美國(guó)，Sigma公司)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取0.069 8 g LYSO標(biāo)準(zhǔn)品，用pH 7.4的三羥基甲基氨基甲烷－鹽酸(Tris－HCl)緩沖溶液配制，其儲(chǔ)備液(1.00×10－4mol·L－1)于4℃下避光保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 紫外光譜的測(cè)定 在10 mL比色管中分別準(zhǔn)確加入4.00 mL 1.00×10－4mol·L－1的溶菌酶溶液、不同體積的呋喃香豆素類(lèi)藥物溶液，用pH 7.4的Tris－HCl緩沖溶液定容至刻度，搖勻，差減相應(yīng)濃度的4種呋喃香豆素類(lèi)藥物的光譜，在TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上記錄250～320 nm的紫外光譜。

1.2.2 熒光光譜的測(cè)定 在10 mL比色管中分別準(zhǔn)確加入20 μL 1.00×10－4mol·L－1的溶菌酶溶液、不同體積的呋喃香豆素類(lèi)藥物的溶液，用pH 7.4的Tris－HCl緩沖溶液定容至刻度，搖勻，差減相應(yīng)濃度的呋喃香豆素類(lèi)藥物的光譜，以280 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，掃描速度為1 200 nm· min－1，狹縫寬度皆為10 nm的Cary Eclipse熒光光度計(jì)繪制熒光光譜。

1.2.3 同步熒光光譜的測(cè)定 在10 mL比色管中分別準(zhǔn)確加入1.00 mL 1.00×10－4mol·L－1的溶菌酶溶液、不同體積的呋喃香豆素類(lèi)藥物的溶液，用pH 7.4的Tris－HCl緩沖溶液定容至刻度，搖勻，差減相應(yīng)濃度的呋喃香豆素類(lèi)藥物的光譜，在Δλ=60 nm下掃描熒光激發(fā)光譜，得到LYSO中色氨酸殘基的同步熒光光譜。

1.2.4 圓二色譜(CD)的測(cè)定 在10 mL比色管中分別準(zhǔn)確加入3.57 mL 1.00×10－4mol·L－1的溶菌酶溶液、不同體積的呋喃香豆素類(lèi)藥物的溶液，用pH 7.4的Tris－HCl緩沖溶液定容至刻度，搖勻，使用0.1 cm石英池，于室溫下測(cè)定190～255 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)LYSO與呋喃香豆素類(lèi)藥物作用前后的圓二色譜圖。α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量根據(jù)208 nm處的摩爾橢圓率(Molar Ellipticity，MRE)值按如下公式進(jìn)行計(jì)算［14－15］:

式(1)中:MRE208為208 nm處觀測(cè)到的MRE值;4 000為208 nm處β-折疊和無(wú)規(guī)卷曲構(gòu)象的MRE值;33 000為208 nm處純?chǔ)?螺旋結(jié)構(gòu)的MRE值。

2 結(jié)果與討論

2.1 呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的紫外吸收光譜

在室溫下，固定LYSO的濃度，逐漸滴加呋喃香豆素類(lèi)藥物溶液，反應(yīng)結(jié)束后，掃描體系的紫外光譜，差減相應(yīng)濃度的補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素溶液的光譜后，得到紫外差光譜，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO相互作用的紫外吸收光譜圖Fig.2 UV－absorption spectra of four furanocoumarin drugs and LYSO cLYSO=2.50 ×10－5mol·L－1;cPSO=cISO=c5-MOP=c8-MOP(a→j):0.00，0.909，1.67，2.31，4.74，2.86，3.33，3.75，4.12，4.44(×10 －5mol·L－1);pH 7.4;room temperature

由圖2知，隨著呋喃香豆素類(lèi)藥物溶液的逐漸滴加，LYSO在280 nm處的吸收均發(fā)生減色效應(yīng)，表明反應(yīng)前后其所處的微環(huán)境發(fā)生改變，初步推測(cè)4種呋喃香豆素類(lèi)藥物均與LYSO發(fā)生了相互作用。

根據(jù) Scatchard 模型和公式［16－17］:

式(2)中A0和A分別表示蛋白和藥物作用前后的紫外吸光強(qiáng)度，［Q］為藥物的濃度，K為結(jié)合常數(shù)。以(A0－A)－1對(duì)［Q］－1作Lineweaver－Burk雙倒數(shù)圖。由該直線的斜率和截距，求得補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO的結(jié)合常數(shù)K分別為8.01×103、8.93×103、8.98×103、9.98×103L·mol－1，相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.999 4、0.993 0、0.998 5和0.999 2?？芍秽愣顾仡?lèi)藥物與LYSO的結(jié)合強(qiáng)弱順序依次為:8-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞5-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞異補(bǔ)骨脂素＞補(bǔ)骨脂素。

2.2 熒光光譜法研究呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的相互作用

2.2.1 呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO的熒光猝滅機(jī)制 固定LYSO溶液的濃度，以呋喃香豆素類(lèi)藥物的溶液對(duì)LYSO進(jìn)行滴定，以280 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描熒光發(fā)射光譜，結(jié)果見(jiàn)圖3。本文所用熒光強(qiáng)度均為考慮稀釋效應(yīng)后的值。

由圖3可知，隨著呋喃香豆素類(lèi)藥物濃度的增加，LYSO的熒光發(fā)射峰強(qiáng)度均有規(guī)律地降低，進(jìn)一步證實(shí)呋喃香豆素類(lèi)藥物均可與LYSO發(fā)生結(jié)合，進(jìn)而猝滅LYSO的熒光。熒光猝滅主要分為動(dòng)態(tài)猝滅和靜態(tài)猝滅兩類(lèi)。動(dòng)態(tài)猝滅是猝滅劑和熒光物質(zhì)的激發(fā)態(tài)分子之間的相互作用過(guò)程，其作用過(guò)程遵循Stern －Volmer方程［18］:

式(3)中F0和F分別為溶菌酶和呋喃香豆素類(lèi)藥物相互作用前后的熒光強(qiáng)度，［Q］為呋喃香豆素類(lèi)藥物的濃度，KSV為Stern－Volmer動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)，Kq為雙分子速率猝滅常數(shù)，無(wú)猝滅劑時(shí)生物大分子的平均壽命 τ0取 10－8s［19］。

分別以F0/F對(duì)呋喃香豆素類(lèi)藥物濃度［Q］作圖，所求得的KSV見(jiàn)表1。

圖3 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO熒光猝滅圖Fig.3 Effect of four furanocoumarin drugs on fluorescence spectra of LYSO

表1 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO作用的相關(guān)參數(shù)Table 1 Correlating parameters of interaction between four furancoumarin drugs and LYSO

表1結(jié)果表明，隨著溫度的升高，體系的動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)逐漸降低，且4種呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO的動(dòng)態(tài)猝滅速率常數(shù)Kq均遠(yuǎn)大于各類(lèi)猝滅劑對(duì)生物大分子的最大猝滅常數(shù)(2.0×1010L·mol－1·s－1)［19］，據(jù)此判定4種呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO的熒光猝滅機(jī)制均為靜態(tài)猝滅。

2.2.2 呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)及結(jié)合常數(shù) 在靜態(tài)猝滅作用中，熒光強(qiáng)度與猝滅劑的關(guān)系由公式(4)表示［20］:

以lg(F0－F)/F對(duì)lg［Q］作雙對(duì)數(shù)圖，由雙對(duì)數(shù)圖中直線的斜率和截距可得4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n和結(jié)合常數(shù)K，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO均存在一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，均與LYSO形成1∶1復(fù)合物。4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的結(jié)合常數(shù)不同，據(jù)此推測(cè)其與LYSO的相互作用強(qiáng)弱不同，其作用力順序?yàn)?8-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞5-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞異補(bǔ)骨脂素＞補(bǔ)骨脂素，這與紫外光譜結(jié)果相一致。

2.2.3 呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的結(jié)合距離 根據(jù)F ster偶極－偶極非輻射能量轉(zhuǎn)移機(jī)制［21－23］，結(jié)合LYSO的熒光光譜和4種呋喃香豆素類(lèi)藥物吸收光譜的重疊圖(如圖4所示)，可求得4種呋喃香豆素類(lèi)藥物的吸收光譜與LYSO的熒光光譜的重疊積分值分別為4.16×10－14、8.36×10－14、1.99×10－13、4.33×10－13L·mol－1·cm3;非輻射轉(zhuǎn)移效率E分別為0.117、0.136、0.172和0.083;臨界能量轉(zhuǎn)移距離R0分別為3.11、3.49、4.04、4.59 nm;補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與色氨酸殘基之間的距離r分別為4.36、4.75、5.25、5.89 nm。由于r＜7 nm，并且0.5 R0＜r＜1.5 R0，表明補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素均與LYSO發(fā)生了非輻射能量轉(zhuǎn)移，使LYSO熒光發(fā)生猝滅。

2.2.4 呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO結(jié)合的熱力學(xué)性質(zhì) 藥物與蛋白的作用力主要包括氫鍵、范德華力、靜電引力和疏水作用力等。當(dāng)溫度變化范圍不大時(shí)，作用過(guò)程的焓變?chǔ)隨溫度的改變可忽略不計(jì)，根據(jù)熱力學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系式［24］:

可分別得到不同溫度下4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO相互作用的焓變?chǔ)、熵變?chǔ)和生成自由能變?chǔ)。根據(jù)藥物與蛋白相互作用的相關(guān)熱力學(xué)參數(shù)，可以判斷二者的作用力類(lèi)型。若ΔH＞0，ΔS＜0，則分子間作用力主要為靜電作用力和疏水作用力;若ΔH＜0，ΔS＜0，分子間作用力主要為范德華力和氫鍵;若ΔH＜0，ΔS＞0，則分子間作用力主要為靜電作用力;若ΔH＞0，ΔS＞0，分子間作用力主要為疏水作用力［25］。

根據(jù)上述公式求得303 K和310 K下4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO作用的熱力學(xué)參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。由ΔH＜0，ΔS＜0，可知補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素及8-甲氧基補(bǔ)骨脂素類(lèi)藥物與LYSO之間的作用力均為范德華力和氫鍵。

2.2.5 呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響 為了考察4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO相互作用后對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響，在室溫條件下，測(cè)定了LYSO和藥物－LYSO體系的圓二色譜圖(見(jiàn)圖5)。

圖4 303 K時(shí)4種呋喃香豆素類(lèi)藥物的吸收光譜(a)與LYSO的熒光光譜(b)重疊圖Fig.4 Overlaps of the absorption spectra of four furanocoumarin drugs(a)and the fluorescence spectrum of LYSO(b)at 303 K

圖5 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的圓二色譜圖Fig.5 Circular dichroism spectra of four furanocoumarin drugs with LYSO

由圖5可知，LYSO的α-螺旋結(jié)構(gòu)在208 nm和222 nm的紫外區(qū)出現(xiàn)2個(gè)負(fù)的特征肩峰譜帶，這是LYSO中α-螺旋結(jié)構(gòu)的特征峰［25］。隨著呋喃香豆素類(lèi)藥物濃度的逐漸增加，LYSO峰強(qiáng)度均減小，表明4種呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO的二級(jí)結(jié)構(gòu)均有不同程度的影響。為了定量分析LYSO中α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量，對(duì)LYSO的圓二色光譜進(jìn)行了分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物對(duì)LYSO二級(jí)結(jié)構(gòu)α-螺旋含量的影響Table 2 Effect of various concentrations of four furanocoumarin drugs on α-helix content of LYSO secondary structure

由表2可知，在游離態(tài)的LYSO中α-螺旋結(jié)構(gòu)(規(guī)則的α-螺旋和不規(guī)則的α-螺旋)的含量為21.8%，當(dāng)補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和5-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO的摩爾比由0∶1變至4∶1時(shí)，LYSO中α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量分別降至15.9%、19.3%和19.5%，推測(cè)可能是這3種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO中的氨基酸殘基結(jié)合，破壞了LYSO中多肽鏈上的氫鍵，從而導(dǎo)致肽鏈變得疏松［26－27］，使得LYSO的二級(jí)結(jié)構(gòu)有所伸展。而8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO的摩爾比由0∶1變至4∶1時(shí)，LYSO中α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量先降至20.4%后又升至21.6%，表明8-甲氧基補(bǔ)骨脂素在較低濃度時(shí)與LYSO中的氨基酸殘基結(jié)合，導(dǎo)致肽鏈變得疏松;而較高濃度時(shí)則對(duì)LYSO的肽鏈影響較小。總之，4種藥物的加入導(dǎo)致LYSO中α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量有不同程度的降低，分別降低了27.1%、11.5%、10.6%和0.917%。因此，4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO相互作用后對(duì)LYSO的二級(jí)結(jié)構(gòu)均產(chǎn)生不同程度的影響。

2.2.6 同步熒光光譜法研究呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的相互作用 固定LYSO的濃度，逐漸增加呋喃香豆素類(lèi)藥物溶液的濃度，固定Δλ=60 nm，可得LYSO中色氨酸殘基的同步熒光光譜，結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO作用的同步熒光光譜圖Fig.6 Synchronous fluorescence spectra of the interaction between four furanocoumarin drugs with LYSO

由圖6可知，隨著4種呋喃香豆素類(lèi)藥物濃度的增加，LYSO中色氨酸殘基的熒光發(fā)生了猝滅。補(bǔ)骨脂素的加入導(dǎo)致了LYSO中色氨酸殘基的峰藍(lán)移約2.0 nm，說(shuō)明色氨酸殘基所處環(huán)境的疏水性增強(qiáng)［26］，故而導(dǎo)致LYSO的構(gòu)象發(fā)生改變。由圖6還可觀察到，異補(bǔ)骨脂素的加入并未使得色氨酸殘基的峰位發(fā)生變化，說(shuō)明在加入異補(bǔ)骨脂素的前后，色氨酸殘基周?chē)氖杷原h(huán)境并未發(fā)生改變。而5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素分別使LYSO中的色氨酸峰紅移約1.5 nm和1.0 nm，說(shuō)明這兩種藥物的加入均降低了色氨酸殘基所處環(huán)境的疏水性，導(dǎo)致LYSO構(gòu)象發(fā)生改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO相互作用后均對(duì)LYSO的構(gòu)象產(chǎn)生影響，而異補(bǔ)骨脂素則對(duì)LYSO的構(gòu)象影響較小。

2.2.7 呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的相互作用及其構(gòu)效關(guān)系 上述研究結(jié)果表明，4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO均發(fā)生結(jié)合，呋喃環(huán)和甲氧基位置的不同導(dǎo)致了4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的作用強(qiáng)弱不同，其作用力順序依次為8-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞5-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞異補(bǔ)骨脂素＞補(bǔ)骨脂素。

通過(guò)分析4種呋喃香豆素類(lèi)藥物的分子結(jié)構(gòu)，表明由于呋喃環(huán)位置的不同導(dǎo)致異補(bǔ)骨脂素分子的偶極矩不同，而偶極矩越大，藥物分子與溶菌酶的作用力則越強(qiáng)［28］。此外，呋喃環(huán)與香豆素母核相比其平面剛性特征較弱，會(huì)呈現(xiàn)不同的空間取向，進(jìn)而影響其空間構(gòu)象及與溶菌酶的相互作用［29］。因此異補(bǔ)骨脂素中的呋喃環(huán)的位置更有利于香豆素母核與LYSO發(fā)生相互作用。此研究結(jié)果與何文英等［6］報(bào)道的補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素鍵合人血清白蛋白相互作用的結(jié)果不同，推測(cè)可能是蛋白的種屬差異所致。

甲氧基的引入增大了呋喃香豆素母核分子的脂溶性，有利于呋喃香豆素母核與LYSO的結(jié)合;另外，－OCH3是給電子基團(tuán)，它的引入使呋喃香豆素母核上的電子云密度增大，故增強(qiáng)了呋喃香豆素母核中酮基與LYSO中氨基酸殘基之間形成的分子間氫鍵。因此，5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO結(jié)合的能力較補(bǔ)骨脂素強(qiáng)。而甲氧基位置的不同又導(dǎo)致8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO的結(jié)合較5-甲氧基補(bǔ)骨脂素強(qiáng)。這是因?yàn)?位較5位的甲氧基更能增大2位酮基的電子云密度［30］，且8位較5位的甲氧基對(duì)呋喃香豆素母核與LYSO形成氫鍵的空間位阻較小。

本文研究結(jié)果表明，對(duì)呋喃香豆素母核進(jìn)行一定的化學(xué)修飾，可以增強(qiáng)呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的結(jié)合力，使香豆素類(lèi)藥物在血漿中的貯留時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，釋放更緩慢，從而提高呋喃香豆素類(lèi)藥物的臨床藥效，同時(shí)減少其毒副作用的發(fā)生，此結(jié)果為臨床藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)的研究提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)［31］。此外呋喃環(huán)和甲氧基位置的不同導(dǎo)致了4種呋喃香豆素類(lèi)藥物與LYSO的作用強(qiáng)弱不同，這對(duì)于呋喃香豆素類(lèi)藥物的開(kāi)發(fā)利用具有指導(dǎo)意義。

3 結(jié)論

本文在模擬人體生理?xiàng)l件下，采用紫外光譜、熒光光譜、同步熒光光譜及圓二色譜法研究了補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素與LYSO相互作用的光譜行為。結(jié)果表明:4種物質(zhì)對(duì)LYSO的內(nèi)源熒光均存在顯著的猝滅作用，且猝滅機(jī)制主要為靜態(tài)猝滅和非輻射能量轉(zhuǎn)移。4種呋喃香豆素類(lèi)藥物均可與LYSO形成1∶1復(fù)合物，以范德華力和氫鍵作用力為主。4種呋喃香豆素類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中呋喃環(huán)和甲氧基位置的不同導(dǎo)致了4種藥物與LYSO作用力強(qiáng)弱的不同，其作用力順序依次為8-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞5-甲氧基補(bǔ)骨脂素＞異補(bǔ)骨脂素＞補(bǔ)骨脂素。本文結(jié)果闡明了該類(lèi)藥物的構(gòu)效關(guān)系，為呋喃香豆素類(lèi)藥物的臨床藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)研究及該類(lèi)藥物的開(kāi)發(fā)利用等提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)。

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