隔離器飼育SPF雞微生物質(zhì)量控制方法的建立

吳韜奮，張瑞忠、2，孫鳳萍，王佳樂(lè)

(1.上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，上海 201615;2.中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，上海 201615;3.上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，上海 201106)

SPF雞是生物醫(yī)學(xué)研究及生物制品生產(chǎn)的重要支撐條件，其質(zhì)量直接關(guān)系到上述各方面研究成果及產(chǎn)品的可靠性及準(zhǔn)確性［1］。我國(guó)自20世紀(jì)80年代引進(jìn) SPF雞群以來(lái)，已成功建立了 SPF種雞群［2］，但絕大多數(shù)是在屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)，在 SPF隔離器中飼養(yǎng)國(guó)內(nèi)還少有報(bào)道。本文介紹了我們從中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所引進(jìn)SPF種蛋，建立了隔離器環(huán)境內(nèi)飼育SPF雞的技術(shù)，探討了在隔離器環(huán)境中飼育SPF雞的飼養(yǎng)管理中微生物質(zhì)量控制的方法。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF雞種蛋來(lái)源于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，在本中心孵化后作為 SPF雞種群進(jìn)行繁育。

1.2 主要設(shè)備

SPF雞隔離器購(gòu)自蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司，9WF系列孵化器購(gòu)自無(wú)錫萬(wàn)利畜牧機(jī)械有限公司。

1.3 SPF雞的飼養(yǎng)管理

1.3.1 SPF雞隔離器的消毒 在隔離器安裝使用前，首先檢查隔離器的密閉性以及隔離器電器元件是否能夠正常使用。確認(rèn)后，先使用泡騰片(有效成分為三氯異氰尿酸)溶液將隔離器內(nèi)外擦拭2次，以去除包體內(nèi)外灰塵及做到初步消毒的目的，再使用2%過(guò)氧乙酸溶液進(jìn)行噴霧滅菌并安裝高效過(guò)濾器，放置24 h后，通風(fēng)吹干。最后以60 mL/m3甲醛加30 g/m3高錳酸鉀的比例進(jìn)行隔離器內(nèi)部熏蒸，放置24 h后，通風(fēng)兩天留用。

1.3.2 SPF種蛋的孵化 孵化機(jī)用福爾馬林熏蒸消毒，置于SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)。將 SPF雞種蛋熏蒸消毒后進(jìn)行孵化。孵化機(jī)溫度設(shè)定為37.8℃，相對(duì)濕度設(shè)定為60%，每隔2 h自動(dòng)翻蛋一次。孵化第5日齡進(jìn)行第一次照蛋，10日齡進(jìn)行第2次照蛋，排除無(wú)精蛋、死精蛋及死胎蛋，并做好記錄。18日齡落盤(pán)，出雛器溫度設(shè)定為37.5℃，相對(duì)濕度為65%。21日齡出雛。

1.3.3 SPF日常飼養(yǎng)管理 將岀雛的種雞通過(guò)無(wú)菌傳遞箱傳入消毒完畢的雞隔離器中進(jìn)行飼養(yǎng)，種雞在隔離器中以放養(yǎng)方式飼養(yǎng)。傳入隔離器的雛雞應(yīng)先讓其飲水，48 h內(nèi)開(kāi)始喂食0～8周齡的育雛期飼料。由于剛孵化的幼雛對(duì)環(huán)境極為敏感，需要嚴(yán)格控制隔離器中的溫濕度、光照等各種環(huán)境指標(biāo)。出雛后第一周溫度應(yīng)控制在34～35℃，以后每周下降3℃，直至20～25℃;濕度第 1周應(yīng)控制在65%以上，第2周則可降至60%;光照1～3 d應(yīng)保持每天24 h光照時(shí)間，以后每2天減少1 h，直至減至每天14 h。在雛雞養(yǎng)至8～10日齡進(jìn)行斷喙，一般需斷去喙端至鼻孔段的2/3。注意在斷喙后適量補(bǔ)充VK。9～20周為雞的育成期，此階段的重點(diǎn)應(yīng)使雛雞體格得到充分的發(fā)育，對(duì)育成雞采用一定程度的限制飼養(yǎng)及人工光照。營(yíng)養(yǎng)方面，前兩周可仍飼喂雛雞料，但可在雛雞料中摻入一定的育成期料，并且隨時(shí)間逐步加大育成期料的比例。光照則應(yīng)保持每天8 h。21周至65周為雞的產(chǎn)蛋期。一般SPF雞于22周齡左右開(kāi)產(chǎn)，需要在21周開(kāi)始飼喂產(chǎn)蛋期飼料，并且在19周齡開(kāi)始逐漸延長(zhǎng)光照時(shí)間，以第一周延長(zhǎng)1 h，然后每周延長(zhǎng)0.5 h，最終增加到 16 h/d 為止［3］。

日常飼養(yǎng)管理中對(duì)進(jìn)入隔離器物品遵循能通過(guò)高壓滅菌的物品都均以高壓鍋121℃，30 min進(jìn)行消毒滅菌后方能傳入隔離器中使用;不耐高溫高壓的物品用2%過(guò)氧乙酸溶液噴霧或使用熏蒸方法進(jìn)行消毒滅菌后方能傳入［4，5］。

飼養(yǎng)人員在操作隔離器前應(yīng)更換干凈的工作制服，手部清洗消毒。檢測(cè)隔離器是否有破損、漏氣。每日使用低濃度消毒劑擦拭隔離器外部并定期對(duì)隔離器存放房間噴灑消毒。由于SPF雞在隔離器中以放養(yǎng)方式飼養(yǎng)，隔離器內(nèi)部比較臟亂，每日也需用低濃度消毒劑擦拭隔離器內(nèi)部。

1.3.4 SPF雞的微生物監(jiān)測(cè) 種雞飼養(yǎng)至10周齡、20周齡與40周齡時(shí)全種雞采血進(jìn)行檢測(cè)。用一次性注射器從雞翅膀內(nèi)測(cè)靜脈采血2 mL，血樣經(jīng)過(guò)離心(4℃、12 000 g、15 min)后，將離心后所得的血清樣本委托由上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心和上海農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所進(jìn)行檢測(cè)。SPF雞的微生物檢測(cè)項(xiàng)目按國(guó)標(biāo)［GB/T 17999.1-2008 SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)］中“SPF雞的生物學(xué)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目”進(jìn)行檢測(cè)，具體項(xiàng)目如下:雞白痢沙門(mén)氏菌(salmonella pullorum)， 副 雞 嗜 血 桿 菌 (haemophilus paragallinarum)，多殺性巴氏桿菌(pasteurella multocida)，雞毒支原體(mycoplasma gallisepticum)，滑液囊支原體(mycoplasma synoviae)，禽流感病毒(avian influenza virus)，新城疫病毒(newcastle disease virus)，傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus)，傳染性喉氣管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus)，傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus)，淋巴白血病病毒(lymphatic leukemia virus)，網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒(reticuloendotheliosis virus)，馬立克氏病毒(marek’s disease virus)，雞傳染性貧血病毒(chicken infectious anemia virus)，禽呼腸弧病毒(avian reovirus)，禽腦脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus)，禽腺病毒Ⅰ群(avian adenoviruses groupⅠ)，禽腺病毒Ⅲ群(avian adenoviruses groupⅢ)，禽痘病毒(fowl Pox virus)。

2 結(jié)果

SPF雞微生物檢測(cè)結(jié)果狀況見(jiàn)表1。

表1中組別1種蛋引自哈爾濱獸醫(yī)研究所，經(jīng)孵化后，傳入隔離器中進(jìn)行飼養(yǎng)，其所產(chǎn)種蛋即為組別2種蛋。組別3種蛋重新引自哈爾濱獸醫(yī)研究所，組別4為其后代，組別5為組別4后代，組別6為組別5后代，組別7為組別6后代。

由于組別1種雞飼育的微生物控制比較成功，因此組別2種蛋孵化過(guò)程中，由于思想上麻痹大意，簡(jiǎn)單認(rèn)為單位所在地非禽類(lèi)傳染病疫區(qū)，且附近無(wú)禽類(lèi)生產(chǎn)企業(yè)，要控制SPF雞微生物狀況是比較容易的，而未對(duì)孵化環(huán)境徹底消毒，同時(shí)也未嚴(yán)格控制人員及物品的消毒滅菌，結(jié)果造成組別2種雞污染，其10周檢測(cè)就發(fā)現(xiàn)大量種雞血清樣本呈陽(yáng)性。組別2種雞亦隨即淘汰。有組別2微生物污染的教訓(xùn)，重新引種后嚴(yán)格控制孵化及飼養(yǎng)管理每一環(huán)節(jié)，嚴(yán)格控制人員進(jìn)出及物品消毒，組別3及其后代的檢測(cè)均未發(fā)現(xiàn)微生物污染。組別6及組別7后期因課題結(jié)題，未能進(jìn)行微生物檢測(cè)。

3 討論

孵化器在SPF種蛋孵化前需經(jīng)福爾馬林熏蒸消毒后才能使用。但在操作過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)雛雞出雛時(shí)，雛雞身上的絨毛在孵化器內(nèi)四處飛散，絨毛常常粘付在孵化器的各個(gè)角落。而孵化器內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜，死角較多，一般很難將絨毛去除干凈，這樣就容易造成孵化器消毒不徹底。因此我們?cè)诜N蛋孵化前，先將孵化器內(nèi)死角較多的部分(諸如電腦主控板)徹底密封，而在雛雞出雛后，孵化器內(nèi)外部也應(yīng)用低濃度消毒劑擦拭2遍以上。

SPF雞隔離器的消毒比起大小鼠隔離器的消毒不僅存在更多的死角，而且經(jīng)飼養(yǎng)后的隔離器內(nèi)，雞飼養(yǎng)過(guò)程中所產(chǎn)生的污物很容易粘付在死角上，即使全面清理也很難去除。而不清理干凈又容易造成消毒滅菌不徹底。因此我們采用在熏蒸前用2%過(guò)氧乙酸溶液進(jìn)行噴霧消毒，利用高壓氣泵進(jìn)行噴霧，其噴霧的氣壓較大，易將死角內(nèi)粘付的顆粒清除，同時(shí)起到清洗消毒的作用。

原定每個(gè)隔離器飼養(yǎng)20羽種雞，但飼養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)因空間較小，雞群打斗、互啄現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，并且由于密度過(guò)高，飼養(yǎng)清潔衛(wèi)生難以控制，環(huán)境中塵埃物質(zhì)較多，造成高效過(guò)濾器易堵塞。同時(shí)母雞產(chǎn)蛋后，其種蛋較易被破壞不利于種蛋收集。組別3、4對(duì)其改進(jìn)，每個(gè)隔離器飼養(yǎng)種雞13羽，不僅環(huán)境清潔得到有效控制，而且環(huán)境中塵埃物明顯減少，高效過(guò)濾器堵塞現(xiàn)象得到控制，換氣次數(shù)得到保障，同時(shí)雞群打斗現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，種蛋破損率也大幅下降;組別5、6、7由于課題需要將大部分種雞移至屏障設(shè)施進(jìn)行飼養(yǎng)，隔離器內(nèi)只保持繁殖用種雞，每個(gè)隔離器內(nèi)種雞控制在5羽，隔離器中環(huán)境進(jìn)一步好轉(zhuǎn)，雞群打斗現(xiàn)象基本停止，種蛋破損率也進(jìn)一步下降。說(shuō)明控制飼養(yǎng)密度不僅有利于控制環(huán)境進(jìn)而控制環(huán)境微生物狀況，同時(shí)也有利于種雞飼養(yǎng)及種蛋回收。

表1 SPF雞飼養(yǎng)狀況及微生物檢測(cè)結(jié)果Tab.1 The rearing condition and results of microbiological testing from SPF chickens

飼料和水是SPF雞微生物質(zhì)量控制的一個(gè)重要因素。雞在飲水及吃料時(shí)，常將糞便混入飲水器及料盒中，容易造成飲水及飼料的污染，需定期對(duì)飲水器及料槽進(jìn)行清洗消毒。輻照飼料在傳入隔離器前，需檢驗(yàn)塑料包裝袋的密封狀況，一旦發(fā)現(xiàn)破損，應(yīng)立即棄用。

通過(guò)對(duì)以上一系列的操作方法進(jìn)行控制，我們?cè)诮M別3后能夠穩(wěn)定的控制SPF雞的微生物質(zhì)量，説明這一系列在隔離器環(huán)境中飼育SPF雞的微生物質(zhì)量控制的方法是有效、可靠的。

［1］ 夏長(zhǎng)友，魏炳泉，張玲．SPF雞微生物質(zhì)量控制方法探討［J］．畜牧獸醫(yī)科技信息，2005.12:41－42．

［2］ 秦卓明，王永華．SPF雞生產(chǎn)及其開(kāi)發(fā)意義［J］．中國(guó)禽業(yè)導(dǎo)刊，2001，18(7):6－8．

［3］ 夏長(zhǎng)友，陳洪巖，南錫．BWEL-SPF種雞在隔離器中的培育和管理［J］．中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志 2003，13(6)377－380．

［4］ 秦卓明，張世東，徐懷英，等．SPF雞管理中的核心消毒滅菌技術(shù)(上)［J］．山東家禽 2003.11:26－30．

［5］ 秦卓明，張世東，徐懷英，等．SPF雞管理中的核心消毒滅菌技術(shù)(下)［J］．山東家禽 2003.12:24－25．