AR和HGF在大腸癌組織中的表達(dá)及其與肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系

李美琴，黃玲莎，朱 波，黃文成，趙慧柳，李佩章

（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣西 南寧530021）

大腸癌（colorectal cancer，CRC）是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，術(shù)后5年生存率在50%－55%。治療失敗的原因是術(shù)后的局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。肝臟是大腸癌最常見、15%－25% 患者初診時(shí)已存在肝轉(zhuǎn)移［1］，有30%－40%的患者出現(xiàn)晚期肝轉(zhuǎn)移。大腸癌術(shù)后約有50%在五年內(nèi)出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移。而大腸癌肝轉(zhuǎn)移不經(jīng)任何治療的自然生存期，平均為6－10個(gè)月。早期診斷肝轉(zhuǎn)移灶具有重要的臨床意義。雙向調(diào)節(jié)因子（Amphiregulin，AR）屬EGF家族成員，有促進(jìn)細(xì)胞侵襲和遷移的作用［2］。研究表明［3］，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepato－eyte growth factor，HGF）及其受體（C－met）在相當(dāng)一部分人類腫瘤中存在高表達(dá)。并與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究旨在探討AR和HGF的表達(dá)與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系及AR和HGF之間有無相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胃腸外科2009－01至2011－12大腸癌標(biāo)本207例，男120例，女87例，年齡19－82歲，中位年齡50.5歲。直腸癌120例，結(jié)腸癌87例。根據(jù)2009年UICC TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期81例，Ⅲ期51例，Ⅳ期57例；其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例，肝轉(zhuǎn)移60例，同時(shí)有淋巴結(jié)和肝轉(zhuǎn)移21例。肝轉(zhuǎn)移以病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法 兔抗人AR多克隆抗體及DAB顯色劑購(gòu)自長(zhǎng)沙贏潤(rùn)生物技術(shù)有限公司，兔抗人HGF單克隆抗體購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，按試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) AR在細(xì)胞核或胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，HGF在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。結(jié)果判斷采用常用的半定量計(jì)分法：①選染色均勻的陽性表達(dá)區(qū)域，以著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的多少計(jì)分：0分：≤5%；1分：6%－25% ；2 分：26%－50% ；3 分：51%－75%；4 分：＞75%。②顯色度計(jì)分：高倍鏡（×400）下取表達(dá)最強(qiáng)的部位，按顯色程度計(jì)分，顯色與背景相似者為0分；顯色淺，略高于背景為1分；中度顯色，明顯高于背景為2分；強(qiáng)染，顯色深棕色為3分。③總積分：將上述兩種積分乘積為0表示陰性（一），＞1分為陽性，其中1－2分表示弱陽性（＋），3－4分表示陽性（＋＋），≥5分表示強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)，等級(jí)資料用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大腸癌中AR和HGF表達(dá)水平與臨床病理因素的關(guān)系 AR和HGF的表達(dá)均與大腸癌瘤體大小、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與患者性別、年齡、部位無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

表1 AR、HGF表達(dá)與大腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2 AR和HGF在大腸癌表達(dá)的相關(guān)性（表2）AR的表達(dá)和HGF的表達(dá)顯著相關(guān)（P＜0.01）。

表2 AR和HGF在207例大腸癌患者表達(dá)的相關(guān)性（例）

3 討論

AR又名雙向調(diào)節(jié)因子，是人乳腺癌細(xì)胞株MCF－7識(shí)別的肝素結(jié)合糖基化蛋白，通過與表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用，主要作用是調(diào)控細(xì)胞擴(kuò)增。在研究AR與腫瘤的惡性表型關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)AR導(dǎo)致EGFR下調(diào)紊亂的現(xiàn)象，EGFR下調(diào)紊亂導(dǎo)致了EGFR蛋白的過度表達(dá)，這種過度表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增有明顯的促進(jìn)作用。因此，AR自分泌的出現(xiàn)，促進(jìn)了癌的進(jìn)展。在惡性腫瘤侵襲方面，涉及細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）的降解，蛋白酶是必需的，AR顯示導(dǎo)致了 MMP－2，MMP－9等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)［4］，由于 AR還有改變E－cadherin、cytokines的作用，故AR可能在細(xì)胞遷移和侵襲中發(fā)揮作用。本研究表明AR與大腸癌瘤體大小、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與患者性別、年齡、部位無關(guān)（P＞0.05）。這與 Michiyo Yamada等［5］報(bào)道一致。說明大腸癌腫瘤越大，分期越晚，AR表達(dá)程度越高；AR還可促進(jìn)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移。提示AR在降解破壞大腸癌腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)成分、促進(jìn)腫瘤血管生成及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等方面具有促進(jìn)作用。

HGF又名離散因子（SF），是酪氨酸激酶受體C－met的配體，在生理情況下HGF和C－met短暫結(jié)合發(fā)揮生理效應(yīng)，而在腫瘤組織中可同時(shí)高表達(dá)HGF和C－met，形成正反饋，導(dǎo)致腫瘤的無限生長(zhǎng)和侵襲行為，Toschi L等［6］表明HGF在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及促進(jìn)血管生成中發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HGF與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，說明其可能促進(jìn)淋巴侵犯，可能是HGF表達(dá)上調(diào)、通過直接或間接途徑促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮增生、淋巴管數(shù)目增多，增大了腫瘤細(xì)胞與淋巴管接觸的表面積；再加上新生淋巴管管壁薄、管腔大、通透性增加，有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管，從而促進(jìn)腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移［7］。另外，TNM分期越晚，HGF表達(dá)越多，可能是中晚期高惡性大腸癌更需要新生的淋巴管生成以促進(jìn)淋巴管播散、轉(zhuǎn)移［8］。本研究還顯示HGF表達(dá)與大腸癌肝轉(zhuǎn)移有關(guān)，這與Fazekas K等［9］報(bào)道一致，說明HGF在人類大腸癌組織中的表達(dá)可以作為肝轉(zhuǎn)移潛能的標(biāo)志物。我們的研究結(jié)果表明，HGF的表達(dá)與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，是大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素。

本研究還顯示AR和HGF的表達(dá)顯著相關(guān)，說明AR除了與其受體EGFR結(jié)合后促進(jìn)淋巴管生成和血道轉(zhuǎn)移外，與其他的生長(zhǎng)因子如HGF等也有協(xié)同刺激作用，共同促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。由于TNM分期、淋巴管轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移是大腸癌預(yù)后的重要參數(shù)，因此，AR和HGF可能是大腸癌預(yù)后不良的重要標(biāo)志之一。

防治大腸癌淋巴結(jié)與肝轉(zhuǎn)移已為臨床醫(yī)師高度重視，在大腸癌的發(fā)病過程中，AR與HGF的共同高表達(dá)具有協(xié)同效應(yīng)，聯(lián)合檢測(cè)能在大腸癌手術(shù)治療前，對(duì)大腸癌淋巴結(jié)及肝轉(zhuǎn)移的可能性有所了解，有利于采取有效的、綜合的和個(gè)體化的治療方案。Normanno N等［10］在研究雙調(diào)蛋白（AR）反義RNA表達(dá)對(duì)乳腺癌血管生成的抑制作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)AR反義RNA表達(dá)可有效抑制乳腺癌的血管生成，在乳腺癌模型上，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)AR反義重組腺病毒可有效地抑制腫瘤細(xì)胞的體外增殖及體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。另外一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，HGF的特異性拮抗劑NK4可以抑制腫瘤血管和淋巴管生成［11］。因此，可以通過同時(shí)抑制AR和HGF來抑制腫瘤淋巴管、血管生成，達(dá)到控制腫瘤淋巴管轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的目的，為腫瘤的治療提供一個(gè)新思路。

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