南疆塔吉克族和維吾爾族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因多態(tài)性分析

彭曉梅，阿地拉·多力坤，吐爾遜·買買提，阿麗旦，宋曼殳，多力坤·買買提玉素甫＊

（1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊830046；2.烏魯木齊市第七十一中學(xué)，新疆 烏魯木齊830006；3.首都醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與家庭醫(yī)學(xué)學(xué)院，北京100069）

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）是調(diào)節(jié)心血管和泌尿過程的腎素－血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵酶之一。人體ACE基因位于17號染色體長臂q23位點(diǎn)，長度為21kb，由26個外顯子和25個內(nèi)含子組成，而在16內(nèi)含子中存在287kb的DNA序列的插入（I）或缺失（D），構(gòu)成 ACE基因I／D多態(tài)性［1］。探討不同民族該基因的多態(tài)性分布，有助于從分子水平了解心血管疾病的發(fā)病率在不同種族間的差異。目前關(guān)于ACE基因多態(tài)性的研究已有報道［2，3］，但未見關(guān)南疆地區(qū)少數(shù)民族人群的相關(guān)報道。本研究旨在了解南疆地區(qū)塔吉克族和維吾爾族正常人群ACE基因I／D多態(tài)性分布情況。

1 材料與方法

1.1 研究對象

隨機(jī)抽取194例南疆地區(qū)無血緣關(guān)系的塔吉克族和維吾爾族健康人。已排除患冠心病、高血壓、心肌病、瓣膜性心臟病和先天性心臟病的患者。塔吉克族88例，男53例，女35例，年齡15－90歲；維吾爾族106例，男64例，女42例，年齡19－108歲。

1.2 基因組DNA提取

抽取外周靜脈血5ml，EDTA抗凝，用鹽析法提取外周血白細(xì)胞中的DNA。

1.3 PCR擴(kuò)增

1.3.1 參照 Rigat等［4］報道的方法，采用擴(kuò)增片段長度多態(tài)性（Amp－FLP）技術(shù)，用PCR對ACE基因擴(kuò)增。PCR引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司設(shè)計(jì)合成，上游引物為：5’－CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT－3’；下游引物為：5’－GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T－3’。

PCR反應(yīng)體系：100ng模板DNA，1UTaqDNA聚合酶（TaKaRa大連寶生物工程有限公司），引物各5pmol，dNTP 200μM，1×buffer 2.5μl，0.1mg／ml BSA 2.5μl，25mmol／L MgCl2 2μl，加去離子水補(bǔ)至終體積25μl。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min，94℃ 1min，58℃30s，72℃延伸1 min，共35個循環(huán)。最后在72℃下延伸10min。

1.3.2 PCR產(chǎn)物電泳 PCR產(chǎn)物在經(jīng)溴化乙錠染色的2%瓊脂糖凝膠上電泳55min后，凝膠成像系統(tǒng)照相并保存結(jié)果，確定基因型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

經(jīng)Hardy Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)各基因型頻率是否達(dá)到遺傳平衡，具有群體代表性。利用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，基因型分布及等位基因頻率比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 電泳結(jié)果

經(jīng)PCR反應(yīng)，得到3種基因型：DD型（缺失純合子，只含190bp片段）、ID型（缺失與插入雜合子，含190bp和490bp兩種片段）和II型（插入純合子，只含490bp片段）。見圖1。

圖1 PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果

2.2 南疆地區(qū)塔吉克族和維吾爾族人群ACE基因頻率

兩族人群ACE基因型及等位基因頻率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，比例符合Hardy－Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05），具有群體代表性?；蛐秃偷任换蝾l率分布男女無顯著性差異。見表1、表2。

由表3可知，南疆地區(qū)塔吉克族和南疆維吾爾族健康人群ACE基因型和等位基因頻率分布差異顯著（P＜0.05）。

表1 南疆地區(qū)塔吉克族健康人群ACE基因型和等位基因頻率分布

表2 南疆地區(qū)維吾爾族健康人群ACE基因型和等位基因頻率分布

表3 南疆地區(qū)塔吉克族和南疆維吾爾族健康人群ACE基因型和等位基因頻率分布的比較

2.3 新疆不同民族健康人群ACE基因頻率比較

由表4可知，新疆漢族II基因型頻率低于南疆塔吉克族（基因型：χ2＝6.614；P＝0.037；等位基因：χ2＝0.121；P＝0.728）；漢族與南疆維吾爾族比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型 ：χ2＝11.613，P＝0.003；等位基因：χ2＝6.545，P＝0.011）；維吾爾族與南疆塔吉克族比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型：χ2＝30.391，P＝0.000；等位基因：χ2＝17.319，P＝0.000）；維吾爾族與南疆維吾爾族比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型：χ2＝5.536，P＝0.063；等位基因：χ2＝1.668，P＝0.196）；哈薩克族與南疆塔吉克族比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型：χ2＝61.023，P＝0.000；等位基因：χ2＝45.996，P＝0.000）；哈薩克族與南疆維吾爾族比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型：χ2＝33.836；P＝0.000等位基因：χ2＝16.615；P＝0.000）；蒙古族與南疆塔吉克族比較差異不顯著（基因型：χ2＝3.050，P＝0.218；等位基因：χ2＝0.411；P＝0.521）；蒙古族與南疆維吾爾族比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型：χ2＝7.796，P＝0.020；等位基因：χ2＝5.153，P＝0.023）。

表4 新疆不同民族人群ACE基因型和等位基因頻率分布的比較

2.4 不同種族健康人群ACE基因頻率比較

由表5可知，南疆塔吉克族和南疆維吾爾族與日本、英國、德國、美國比較基因型頻率分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表5 不同種族健康人群中ACE基因型和等位基因頻率分布的比較

3 討論

不同民族和種族的遺傳背景差異可能造成他們對某些疾病的易感性差異。對人類基因多態(tài)性的研究可以幫助我們了解各種基因在不同人群中的分布（即不同人群的遺傳背景）及其與疾病的關(guān)系，從基因水平更深刻地認(rèn)識各種疾病在不同民族、種族中易感性差異和發(fā)病率差異的內(nèi)在機(jī)制。

本研究探討了新疆南疆地區(qū)塔吉克族和維吾爾族正常人群ACE基因多態(tài)性的分布特點(diǎn)，人群基因型分布符合Hardy－Weinberg遺傳平衡，說明樣本來自同一人群，其結(jié)果具有代表性。結(jié)果顯示，ACE基因多態(tài)性分布與性別無關(guān)，南疆塔吉克族和南疆維吾爾族差異有顯著性。和其他民族和種族比較，漢族與南疆塔吉克族比較無顯著性差異；維吾爾族與南疆塔吉克族比較差異非常顯著；維吾爾族與南疆維吾爾族比較差異不顯著；蒙古族與南疆塔吉克族比較差異不顯著，和哈薩克族、蒙古族比較差異顯著。從世界范圍來看，南疆塔吉克族和南疆維吾爾族與日本、英國、德國和美國人群相比差異顯著。結(jié)果提示，南疆地區(qū)正常人群ACE基因多態(tài)性分布存在種族和地域差異。

研究比較不同民族群體的遺傳特點(diǎn)，對于從分子流行病學(xué)角度了解ACE基因多態(tài)性在我國人群中的分布、認(rèn)識一些疾病在不同地區(qū)、不同種族表現(xiàn)出來的差異具有重要意義。本研究也為本地區(qū)塔吉克族和維吾爾族人群ACE基因多態(tài)性與多種疾?。ㄈ绺哐獕骸⒐诓?、糖尿病和腎病等）的關(guān)系提供了理論基礎(chǔ)。

［1］Rigat B，Hubert C，Alnenc－Gelas F，et al.An insertion／deleton polymorphism in the angiotensin I－converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels［J］.Clin Invest，1990，86（4）：1343.

［2］陳柏坤.溫州地區(qū)漢族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因多態(tài)性分析［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，20（5）：7.

［3］馮秀麗，楊忠偉，梁小安，等.新疆地區(qū)漢族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性分析［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，30（4）：358.

［4］Rigat B，Hubert C，Corvol P，et al.PCR detection of the insertion／deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene（DCP1）（dipeptidyl carboxypeptidase1）［J］.Nucleic Acids Res，1992，20：1433.

［5］馮秀麗，楊忠偉，梁曉安，等.新疆不同民族血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性分析［J］.解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2008，26（6）：411.

［6］Mizuiri S，Hemmih，Inoue A，el a1.Angiotensin－converting enzyme polymorphism and development of diabetic nephropathy in non－insulin－dependent diabetes mellitus［J］.Nephron，1995，70（4）：455.

［7］Harden P N，Geddes C，Rowe PA，et al.Polymorphisms in angiotensin－converting－enzyme，gene and progression of IgAnephropathy［J］.Lancet，1995，345 （8964）：1540.

［8］Schmidt S，Schone N，Ritz E，et al.Association of ACE gene polymorphism and diabetic nephropathy The Diabetic Nephropathy Study Group［J］.Kidney Int，1995，47（4）：1176.

［9］Tiret L，Kee F，Poirier O，et al.Deletion polymorphism angiotensin－converting－enzyme gene associated with parental history of myrocardial infarction［J］.Lancet，1993，341（8851）：991.