恩諾沙星腸溶微粒包衣工藝研究

張戰(zhàn)偉

(杭州九天動(dòng)物保健品有限公司，杭州310029)

1 材料和儀器

1.1 材料 恩諾沙星(浙江新昌國(guó)邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)120517-1);恩諾沙星對(duì)照品(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)H0081206，含量99.9%);丙烯酸樹酯Ⅰ號(hào)(連云港萬(wàn)泰藥用材料有限公司，批號(hào)20121109);丙烯酸樹酯Ⅲ號(hào)(連云港萬(wàn)泰藥用材料有限公司，批號(hào)20121117);微晶纖維素(安徽山河藥用輔料有限公司，批號(hào)120901);PVPK30(重慶力宏精細(xì)化工科技有限公司，批號(hào)241010011);滑石粉(廣西桂林來(lái)生滑石制品有限責(zé)任公司，批號(hào)2012122701);食用淀粉(河北德瑞淀粉有限公司，批號(hào)2012112911);檸檬酸三乙酯(江蘇雷蒙化工科技有限公司，批號(hào)201212008)。

1.2 儀器 LW-B2型底噴干燥包衣鍋、LW-L3型多功能制粒制丸機(jī)和LW-H100型槽型混合機(jī)，常州龍文干燥設(shè)備有限公司;RCZ-8B型藥物溶出儀，天津大學(xué)精密儀器廠;GD751型紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司;BT25S型電子天平，北京賽多利斯公司;Syltech500型高效液相色譜儀，美國(guó)賽爾泰杭州公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定方法 取樣品研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于恩諾沙星25 mg)，置250 mL棕色量瓶中，加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，振搖溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀釋到刻度，照紫外-可見(jiàn)光分光光度法(《中華人民共和國(guó)獸藥典》二〇一〇年版一部附錄26頁(yè)，簡(jiǎn)稱UV法)[1]，在271 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，另取恩諾沙星對(duì)照品，同法測(cè)定。計(jì)算，即得。

2.2 測(cè)定方法的方法學(xué)驗(yàn)證[2]

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取恩諾沙星對(duì)照品25.06 mg，置250 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，振搖溶解，加水至刻度，搖勻，再精密量取2、3、4、5、6、7、8 mL 的溶液，分別置 100 mL棕色量瓶中，加水至刻度，搖勻，照UV法在271 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果恩諾沙星在2.0～8.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)，濃度和吸光度呈良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=0.1014C-0.0081，r=0.9999。

2.2.2 精密度試驗(yàn) 取已知含量的樣品，照2.1項(xiàng)下方法測(cè)定含量，每天重復(fù)測(cè)定一個(gè)樣品6次，連續(xù)測(cè)定3 d，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算日內(nèi)及日間精密度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD=0.39%，日間精密度RSD=0.33%。

2.2.3 回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品，精密稱定9份(每份含恩諾沙星25 mg)，分別加入20、25、30 mg的恩諾沙星各三份，研磨均勻后照2.1項(xiàng)下方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，平均回收率為99.88%。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.2.2項(xiàng)中的樣品溶液，室溫分別放置0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，按 2.1 項(xiàng)中測(cè)定法檢測(cè)吸光度，計(jì)算含量及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明供試品溶液在3 h內(nèi)吸光度幾乎沒(méi)有變化。

2.2.5 與高效液相色譜法測(cè)定結(jié)果比較 取按最佳工藝生產(chǎn)的樣品五批，照2.1項(xiàng)方法和《中國(guó)獸藥典》2010年版一部該品種片劑項(xiàng)下的高效液相色譜法，分別測(cè)定樣品的含量，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較兩種方法的含量測(cè)定結(jié)果(t檢驗(yàn)，α=0.10)。結(jié)果如表1所示，表明兩種方法測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著差異。

表1 兩種測(cè)定方法統(tǒng)計(jì)學(xué)比較結(jié)果

2.3 腸溶微粒的制備

2.3.1 粒芯的制備[3-5]處方:恩諾沙星 108 g;微晶纖維素40 g;淀粉852 g;PVPK30(0.5%)溶液:適量，共制1000 g。操作:取恩諾沙星過(guò)80目篩，與淀粉、微晶纖維素混合均勻后，加入PVPK30溶液制備軟材，用LW-L3型多功能制粒機(jī)過(guò)五號(hào)篩擠壓制粒，制得粒子在流化床內(nèi)80℃干燥完全后，過(guò)篩整粒，測(cè)定半成品含量。

2.3.2 包衣液配制 以包衣粒芯60 kg計(jì):取純化水10 kg置于不銹鋼桶中，加入滑石粉1.0 kg，攪拌混勻后依次加入丙烯酸樹酯Ⅰ、Ⅲ號(hào)溶液各6.3 kg、三醋酸三乙酯0.5 kg，邊加邊緩緩攪拌，最后加水至全量，啟動(dòng)不銹鋼桶中的振動(dòng)泵，使包衣液分布均勻，即可。

2.3.3 包衣方法 將包衣鍋拉至軌道加粒芯位置，加入粒芯60 kg，放置均勻后，恢復(fù)至原位封嚴(yán)，先打開(kāi)噴槍壓力閥，再打開(kāi)底進(jìn)風(fēng)閥，設(shè)置進(jìn)風(fēng)量在粒芯剛好完全拋起為宜，再設(shè)定底風(fēng)溫度、包衣液的槍壓和打入包衣液速度進(jìn)行包衣。整個(gè)包衣過(guò)程中，除特殊情況外不得改變運(yùn)行參數(shù)，以免出現(xiàn)意外。待包衣液輸送完畢后，升高底風(fēng)溫度至80℃，活化干燥1.5 h后，冷卻，過(guò)篩，即可。

2.4 正交實(shí)驗(yàn)[6]

2.4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)得出，在選擇好進(jìn)風(fēng)量的情況下影響包衣效果的主要因素為:打入包衣液的槍壓、打入包衣液的速度和包衣鍋底部的進(jìn)風(fēng)溫度。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，每個(gè)因素選擇三個(gè)水平(表2)，用L9(34)正交試驗(yàn)表安排實(shí)驗(yàn)，根據(jù)腸溶制劑釋放度要求[7]，考察各個(gè)因素對(duì)包衣工藝的影響，確定最佳工藝。

表2 正交試驗(yàn)因素水平表

2.4.2 釋放度的測(cè)定[1]依據(jù)《中華人民共和國(guó)獸藥典》二〇一〇年版一部附錄釋放度測(cè)定法第二法測(cè)定樣品在酸中和緩沖液中的釋放度。由于每粒量較少，依照藥典方法取樣一粒缺少合理性，故以一定量(0.2 g)的微粒為單位測(cè)定釋放度。

2.4.3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，可以看出各因素對(duì)在緩沖液中的釋放度無(wú)影響，對(duì)在酸中釋放度的影響大小順序?yàn)镽(A)＞R(B)＞R(C)，即設(shè)定的包衣液的槍壓影響最大，打入包衣液的速度影響次之，進(jìn)風(fēng)溫度對(duì)包衣效果幾乎沒(méi)有影響，其最佳包衣工藝為A1B3C1，從表4方差分析得出前兩種因素影響較為顯著，由于C因素對(duì)包衣效果影響可以忽略不計(jì)，為了加快包衣速度、提高效率，C因素選擇進(jìn)風(fēng)溫度50℃即C3，即選擇包衣工藝為A1B3C3，選擇最佳包衣工藝為打入槍壓0.24 MPa，打入包衣液速度60 mL/min，進(jìn)風(fēng)溫度50℃。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差分析(酸中)

2.5 成品測(cè)定結(jié)果 取按最佳工藝生產(chǎn)的樣品五批，按《中華人民共和國(guó)獸藥典》二〇一〇年版一部附錄腸溶制劑要求，測(cè)定樣品在酸和緩沖液中釋放度，記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果如表5?？梢钥闯鏊嶂? h后釋放度均小于標(biāo)示含量的10%，緩沖液中釋放度均大于標(biāo)示含量的70%。其他測(cè)定指標(biāo)也符合微粒項(xiàng)下規(guī)定，證明產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定可靠。

表5 五批樣品測(cè)定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

微粒制劑劑型本身具有顯著的優(yōu)點(diǎn)，如在胃腸道吸收一般不受胃排空的影響，釋藥的重現(xiàn)性較高，藥物在胃腸道表面分布的面積增大，提高了藥物的生物利用度、減小局部刺激等;恩諾沙星為濃度依賴性抗菌藥，血液濃度越高，臨床效果越好，制成腸溶制劑，藥物在腸道集中釋放吸收可明顯提高其血藥濃度，增強(qiáng)其療效，所以將恩諾沙星微粒制成腸溶制劑較為理想。

正交試驗(yàn)前，首先結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行了選擇并驗(yàn)證。方法學(xué)驗(yàn)證表明，所選擇的UV測(cè)定方法線性、精密度、回收率、穩(wěn)定性均能夠達(dá)到釋放度及含量測(cè)定的要求，相比法定方法(《中華人民共和國(guó)獸藥典》二〇一〇年版中高效液相色譜法)，UV法操作簡(jiǎn)單方便，費(fèi)用低廉，可以作為企業(yè)內(nèi)控方法應(yīng)用，但UV法易受有紫外吸收的物質(zhì)干擾，專屬性相對(duì)較差，對(duì)外評(píng)定產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)，仍以法定標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)。

正交試驗(yàn)時(shí)，通過(guò)對(duì)薄膜包衣參數(shù)的考察，優(yōu)化了產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝，制備微粒在體外釋放特性良好，在胃溶介質(zhì)中幾乎不溶，而在腸溶介質(zhì)中釋放達(dá)到80%以上。本法制備的藥物微粒進(jìn)行腸溶薄膜包衣，掩蓋了藥物本身的苦味，增強(qiáng)順應(yīng)性，改變藥物釋放特性，提高藥物的穩(wěn)定性，降低了毒副作用，節(jié)省了治療成本，為恩諾沙星制劑研究及大規(guī)模生產(chǎn)提供了依據(jù)。本試驗(yàn)的設(shè)計(jì)均是在體外模擬進(jìn)行，體內(nèi)的生物利用度還需要進(jìn)一步研究。

[1]中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典一部[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011:4.

[2]劉文英.藥物分析[M].第6版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:82.

[3]醫(yī)藥工業(yè)研究院藥物制劑部藥物制劑國(guó)家工程研究中心.藥用輔料應(yīng)用技術(shù)[M].第2版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002:211.

[4]陸 斌.藥物新劑型與新技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:289.

[5]陳衛(wèi)華，宋友明.環(huán)丙沙星微粒薄膜包衣制備工藝研究[J].制劑與技術(shù)，2011，11:18-37.

[6]何 雁，馬志慶.醫(yī)藥數(shù)理統(tǒng)計(jì)[M].北京:科學(xué)出版社，2009:184.

[7]李智慧，黃 山，孫文靜，等.氟苯尼考腸溶緩釋包衣微粒的制備及體外評(píng)價(jià)[J].中國(guó)獸藥雜志，2011，45(12):31-34.