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    復(fù)方益腎更寧合劑對圍絕經(jīng)期大鼠E2、β-EP 的影響*

    2013-11-21 08:01:54王新斌趙粉琴謝智慧安蓉芳
    中醫(yī)研究 2013年4期
    關(guān)鍵詞:下丘腦合劑絕經(jīng)期

    王新斌,趙粉琴,謝智慧,安蓉芳

    ( 甘肅中醫(yī)學(xué)院,甘肅 蘭州730000)

    目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對圍絕經(jīng)期綜合征的治療常用的是激素替代療法,雖然其改善圍絕經(jīng)期綜合征療效肯定,但因其可致陰道不規(guī)則出血、乳房脹痛、中遠(yuǎn)期使用可致子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等副作用而不被廣大婦女普遍接受,使而且應(yīng)用有一定局限性。中醫(yī)藥對本病的研究已經(jīng)逐步深入并且取得了一定的進(jìn)度,治療上辨病與辨證相結(jié)合,著眼于整體調(diào)治,具有綜合性強(qiáng),副作用少,遠(yuǎn)期療效較穩(wěn)定的特點(diǎn),因此從中醫(yī)藥角度尋找較為理想的療法,成為研究的重點(diǎn)。本文通過對圍絕經(jīng)期大鼠血清雌二醇(E2)及下丘腦β-內(nèi)啡呔(β-EP)的測定,探討益腎更寧合劑防治圍絕經(jīng)期綜合征的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 動 物

    SPF 級SD 健康雌性大鼠60 只,鼠齡15~18 月,體質(zhì)量(300±20)g;4~6 月齡SD 雌性大鼠10 只,體質(zhì)量(250 ±20)g。動物合格證:SCXK(甘)2004-0006,均由甘肅中醫(yī)學(xué)院中心實驗室提供。

    1.2 藥品、試劑與儀器

    益腎更寧合劑由熟地黃12 g、山茱萸10 g、淫羊藿18 g、珍珠母30 g、白芍12 g、麥冬10 g、黃連6 g、紫草12 g 等組成,由甘肅中醫(yī)學(xué)院制劑室提供;尼爾雌醇,1 mg/片,北京四環(huán)制藥有限公司產(chǎn)品,國藥準(zhǔn)字號[H11020123]。血清雌二醇(E2)、放射免疫盒,北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供,批號20070605;β-內(nèi)啡呔(β-EP )放射免疫盒,北京華英生物技術(shù)研究所提供,批號20070730。80-1 型電動離心機(jī),金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品;GC-911 型γ-放射免疫計數(shù)器,中國科技大學(xué)實業(yè)總公司產(chǎn)品,蘭空醫(yī)院放免科提供。

    1.3 模型的建立

    選取60 只15~18 月齡SPF 雌性SD 大鼠,連續(xù)5 d 進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片及光學(xué)顯微鏡下觀察,無規(guī)律性動情周期變化,確定為圍絕經(jīng)期大鼠[1]。

    1.4 動物分組與給藥

    據(jù)此選取15~18 月齡SD 雌性大鼠40 只,采用隨機(jī)數(shù)字法分為模型對照組(圍絕經(jīng)期組)、尼爾雌醇組和益腎更寧合劑高劑量組、中劑量組、低劑量組,每組8 只。另選青年大鼠(鼠齡4~6 月)8 只作為青年對照組。參照文獻(xiàn)方法[2],按人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比率1∶0.018 計算給藥劑量。模型對照組、青年對照組以蒸餾水0.01 mL/g體質(zhì)量灌胃,1 d 1 次。尼爾雌醇組,用蒸餾水配成混懸液,劑量為0.24 μg /g,相當(dāng)于成人用量的8 倍,以0.01 mL/g 體質(zhì)量灌胃,每2 周灌胃1 次。益腎更寧合劑高、中、低劑量組依次按生藥量26.56,13.28,6.64 g/kg,以0.01 mL/g 體質(zhì)量灌胃,1 d 1 次。各組根據(jù)體質(zhì)量變化,調(diào)整給藥劑量,連續(xù)給藥4 周。

    1.5 檢測指標(biāo)

    大鼠于末次給藥并且禁食、禁水24 h 后,于腹主動脈采集血,離心分離血清,-20 ℃保存?zhèn)溆?。大鼠血清E2、β-EP 檢測按試劑盒說明書操作。

    1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 13.0 統(tǒng)計分析軟件處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,采用單因素方差分析。以P<0.05 為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    益腎更年合劑可提高圍絕經(jīng)期大鼠E2、β-EP含量,且存在著一定的量效關(guān)系。與模型組對照對比,各劑量用藥組E2、β-EP 含量均有所升高,其中益腎更年合劑高、中、低劑量組E2和高劑量組β-EP較之,差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

    表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對比 ng·L-1,±s

    表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對比 ng·L-1,±s

    注:與模型對照組對比,* P <0.05,**P <0.01;與青年對照組對比,# P <0.05 ,## P <0.01。

    組 別 動物數(shù) E2 β-EP模型對照組 7 7.547 1 ±0.806 7## 115.374 3 ±30.196 8##青年對照組 8 14.340 0 ±0.627 5 194.008 0 ±45.076 9**尼爾雌醇組 8 11.137 1 ±0.932 6**## 171.906 5 ±32.639 7*復(fù)方益腎更寧合劑高劑量組 8 10.213 1 ±0.782 1**# 166.407 1 ±30.309 1*復(fù)方益腎更寧合劑中劑量組 8 9.283 8 ±0.539 5**## 145.838 4 ±26.107 0#復(fù)方益腎更寧合劑低劑量組 8 8.953 3 ±0.821 7* ## 140.841 3 ±21.804 7#

    3 討 論

    女性進(jìn)入圍絕經(jīng)期,由于卵巢功能減退,雌激素分泌減少,對下丘腦-垂體-卵巢軸的負(fù)反饋作用減弱,使FSH、LH 分泌增加。雌激素的缺乏是發(fā)病的始動環(huán)節(jié)。本實驗中,復(fù)方益腎更寧合劑低、中、高劑量組血清E2含量較模型對照組升高,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且低劑量、中劑量、高劑量組血清E2含量按順序呈遞增趨勢,可見益腎更寧合劑能升高圍絕經(jīng)期大鼠血清E2水平。近幾年,在中醫(yī)微觀辨證方面,有學(xué)者發(fā)現(xiàn):雌激素水平低下者,大多與腎陰、癸水不足有關(guān)[3]。這也與本病的病因病機(jī)相符合。復(fù)方益腎更寧合劑中,主要有熟地黃、山茱萸、白芍、麥冬等藥物,著重滋補(bǔ)腎陰,以升高雌激素水平,調(diào)整紊亂的生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)。此外,現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn):淫羊藿能增強(qiáng)下丘腦-垂體-性腺軸及腎上腺皮質(zhì)軸、胸腺軸等內(nèi)分泌系統(tǒng)的分泌功能;紫草具有抗促性腺激素和絨毛膜促性激素的作用,具有雌激素樣活性[4]。據(jù)此推測,益腎更寧合劑提高E2水平的機(jī)制,亦與其含有“植物樣雌激素”成分,具有類似雌激素作用有關(guān),但此尚需進(jìn)一步證實。

    β-EP 是神經(jīng)肽類物質(zhì),參與調(diào)節(jié)呼吸、心血管運(yùn)動、行為反應(yīng)等,并有鎮(zhèn)痛,抑制腎上腺素、多巴胺、P 物質(zhì)等釋放作用,且與內(nèi)分泌系統(tǒng)相互影響,對促性腺激素釋放激素(GnRH)、FSH、LH 有抑制作用。中樞性β-EP 參與神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié),下丘腦弓狀核β-內(nèi)啡肽神經(jīng)元內(nèi)有雌激素受體存在,成為雌激素在下丘腦的靶細(xì)胞之一。呂肖鋒等[5]研究發(fā)現(xiàn):絕經(jīng)婦女血中β-EP 及其抗體水平明顯低于正常育齡婦女,β-內(nèi)啡肽的下降與雌激素的下降同步。β-EP 抗體的下降可能表示免疫系統(tǒng)對神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)紊亂,從而出現(xiàn)圍絕經(jīng)期婦女神經(jīng)精神癥狀。此外,有學(xué)者[6]提出,精神抑郁與神經(jīng)介質(zhì)的變化有關(guān),而內(nèi)啡肽可與多種神經(jīng)介質(zhì)(包括兒茶酚胺)發(fā)生交叉反應(yīng),干擾生物胺(5-羥色胺、γ-氨基酸、組織胺等)的代謝,從而影響情緒和行為,與圍絕經(jīng)期抑郁的發(fā)生有關(guān)。本實驗中測定了圍絕經(jīng)期大鼠下丘腦的β-EP 含量,發(fā)現(xiàn)益腎更年合劑高劑量組β-EP 與模型對照組對比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明益腎更寧合劑高劑量組可使下丘腦的β-EP 水平回升。提示益腎更寧合劑是治療β-EP 水平降低致圍絕經(jīng)期情緒和行為異常等癥的有效藥物

    本研究結(jié)果為益腎更寧合劑治療圍絕經(jīng)期綜合征提供了實驗依據(jù),即益腎更寧合劑能夠改善圍絕經(jīng)大鼠體液內(nèi)分泌功能,這可能是其治療圍絕經(jīng)期綜合征作用機(jī)制之一。

    [1]程化奇,熊舜華,殷新尤,等.大鼠更年期實驗?zāi)P脱芯浚跩].實驗動物與比較醫(yī)學(xué),1993,13(4):1921.

    [2]黃繼汗,黃曉暉,陳志揚(yáng),等.藥理實驗動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學(xué)與治療,2004,9(9):1069-1071.

    [3]夏桂成.中醫(yī)婦科理論與實踐[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:166.

    [4]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2002:516-518.

    [5]呂肖鋒,葉雪清.絕經(jīng)后婦女血β-內(nèi)啡肽及其抗體改變[J].中國實驗臨床免疫學(xué)雜志,1993,5(4):37-38.

    [6]Hanker JP,Schncider HP.Path0genesis and diognosis of disorders in the climacteric[J].Gynakoioge,1986,19(4):210.

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