核酸檢測(cè)在篩查獻(xiàn)血者乙型肝炎中的應(yīng)用

夏琳靜

核酸檢測(cè)(NAT)屬于新型血液病毒篩查檢測(cè)方法, 能夠直接檢測(cè)到血液中病原體的核酸［1］。核酸檢測(cè)在篩查獻(xiàn)血者乙型肝炎中具有重要作用, 本文選取無償獻(xiàn)血標(biāo)本92432份進(jìn)行分析, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2009年1月～2012年12月無償獻(xiàn)血標(biāo)本92432份, 其中應(yīng)用核酸檢測(cè)標(biāo)本34440份。確保采集血液標(biāo)本后每個(gè)獻(xiàn)血者均及時(shí)留取4管標(biāo)本；在對(duì)酶免4項(xiàng)、ALT予以檢測(cè)時(shí)可選用分離膠促凝真空采血管；核酸測(cè)定時(shí)則選擇帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管；對(duì)血型進(jìn)行測(cè)定時(shí)選取EDTA-K2抗凝真空采血管, 將具體的采集日期、樣品編碼等基礎(chǔ)信息進(jìn)行準(zhǔn)確記錄。得到的標(biāo)本需標(biāo)準(zhǔn)均在2 h內(nèi)進(jìn)行離心處理存至2～8℃冰箱內(nèi)。2～3 h內(nèi)送至檢測(cè)中心離心保存, 24 h內(nèi)血清學(xué)篩查并實(shí)施NAT檢測(cè)。

1.2 方法 ELISA檢測(cè)：所得到的每份獻(xiàn)血標(biāo)本在完成HBsAg檢測(cè)過程中均需予以2種ELISA試劑, 每批實(shí)驗(yàn)需具有室內(nèi)質(zhì)控品組、空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷的標(biāo)準(zhǔn)為:S/CO≥1屬于陽(yáng)性(此狀態(tài)的血液檢測(cè)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)), 0.5

核酸檢測(cè)：以混樣方法對(duì)核酸予以檢測(cè)。每級(jí)混樣池均有6個(gè)標(biāo)本, 且均設(shè)定內(nèi)對(duì)照。將混合所測(cè)定陰性定作陰性,將混合測(cè)定呈現(xiàn)陽(yáng)性者予以拆分檢測(cè), 當(dāng)拆分檢測(cè)呈現(xiàn)陰性時(shí)屬于NAT陰性, 當(dāng)拆分測(cè)定呈現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)則屬于NAT陽(yáng)性。

在所有核酸篩查時(shí), 當(dāng)標(biāo)本呈現(xiàn)陽(yáng)性時(shí), 核酸為陽(yáng)性但經(jīng)“二對(duì)半”測(cè)定屬陰性, 且核酸出現(xiàn)陰性獻(xiàn)血者予以追蹤隨訪, 持續(xù)2個(gè)月后重新采樣, 分別予以HBV-DNA和“兩對(duì)半”檢測(cè)。

2 結(jié)果

在本文所選取的92432份血液標(biāo)本中, 進(jìn)行血清學(xué)測(cè)定,標(biāo)本屬于HBsAg陰性者有92082份, 標(biāo)本屬于單試劑陽(yáng)性者有30份, 標(biāo)本屬于雙試劑陽(yáng)性者有320份。

予以核酸測(cè)定標(biāo)本共有34440份, 其中包括34430標(biāo)本予以HBsAg酶免檢測(cè)呈現(xiàn)陰性, 10份標(biāo)本予以單試劑測(cè)定呈現(xiàn)陽(yáng)性。在34440份標(biāo)本中, 核酸篩查呈現(xiàn)陽(yáng)性者52份,通過核酸測(cè)定呈現(xiàn)陽(yáng)性者38份, HBsAg測(cè)定呈現(xiàn)陽(yáng)性者2份,如表1所示, 陽(yáng)性檢出率與陽(yáng)性確認(rèn)率有15.1/萬(wàn)(52/34440)、11.6/萬(wàn)(40/34440)。在所認(rèn)定的呈現(xiàn)陽(yáng)性40份標(biāo)本內(nèi), 只有10份標(biāo)本經(jīng)HBsAg測(cè)定呈現(xiàn)單陽(yáng), 予以核酸篩查呈現(xiàn)陽(yáng)性,對(duì)HBVELISA漏檢率進(jìn)行計(jì)算得到8.7/萬(wàn)(30/34440)。另14份標(biāo)本通過核酸篩查發(fā)現(xiàn)其均呈現(xiàn)陽(yáng)性, 經(jīng)HBsAg篩查及乙肝“兩對(duì)半”測(cè)定屬于陰性。

表1 獻(xiàn)血者HBV核酸檢測(cè)與ELISA檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

核酸篩查呈現(xiàn)陽(yáng)性的52份標(biāo)本, 將其中符合條件的26份實(shí)施追蹤檢測(cè), 其中12份通過核酸篩查顯示屬于陽(yáng)性, 經(jīng)乙肝“兩對(duì)半”測(cè)定則呈現(xiàn)陰性, 14份標(biāo)本經(jīng)核酸檢測(cè)呈現(xiàn)陰性。經(jīng)追蹤檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 12份乙肝“兩對(duì)半”起始檢測(cè)呈現(xiàn)陰性標(biāo)本, 經(jīng)隨訪HBV-DNA(+)、HBsAg(+)8例,NAT對(duì)HBV酶免窗口期標(biāo)本檢出率2.32/萬(wàn)(8/34440), 隨訪HBsAg(－)4例, 為隱匿性HBV感染(OBI)；14份核酸測(cè)定屬于陰性, 隨訪過程中發(fā)現(xiàn)6例病毒載量低于20 IU/ml, 4例HBsAg一直呈現(xiàn)陰性, 屬于OBI。經(jīng)計(jì)算發(fā)現(xiàn)8例OBI, NAT對(duì)OBI檢出率2.32/萬(wàn)(8/34440)。

3 討論

輸血是否具有安全性主要風(fēng)險(xiǎn)在于被篩查病毒所處在的“窗口期”。有研究資料發(fā)現(xiàn), 經(jīng)NAT檢測(cè), 能夠減少HBV、HCV、HIV的EIA“窗口期”, 減少率達(dá)到40%～75%, 使得病毒經(jīng)輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)幾率大范圍降低。在本文研究中, 追蹤隨訪ELISA法檢測(cè)呈現(xiàn)陰性但核酸陽(yáng)性者, 有8例標(biāo)本HBsAg ELISA測(cè)定陰性轉(zhuǎn)化成陽(yáng)性, 由此可知此血樣于ELISA窗口期予以NAT檢測(cè)時(shí)被發(fā)現(xiàn)的, 而且NAT測(cè)定表明有4例屬于隱匿性HBV感染患者, 說明NAT檢測(cè)對(duì)血液篩查具有重要意義［2］。

NAT檢測(cè)在應(yīng)用中, 所使用的試劑必須具有較高的靈敏性、特異性, 且實(shí)驗(yàn)環(huán)境具有較高要求, 和EIA檢測(cè)相對(duì)比更具有嚴(yán)格性, 在檢查中應(yīng)用所需設(shè)備、試劑往往會(huì)提高血液檢測(cè)成本。而且核酸篩查存在局限性, 在病毒載量較低情況下, 通常NAT難以檢測(cè)出, 在本文研究中, 6標(biāo)本予以核酸篩查呈現(xiàn)陽(yáng)性, 但是應(yīng)用核酸測(cè)定則屬于陰性, 追蹤檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)病毒載量低于20 IU/ml［3］。

總之, NAT可以縮減“窗口期”, 減少病毒通過輸血途徑傳播風(fēng)險(xiǎn)性, 但是也會(huì)有漏檢標(biāo)本出現(xiàn)。NAT檢測(cè)時(shí)所關(guān)注的是病毒核酸, 而ELISA檢測(cè)則為抗原或抗體, 兩者所應(yīng)用的檢測(cè)原理和檢測(cè)方法均有差異性, 所以兩個(gè)方法在檢測(cè)血液標(biāo)本過程中并不存在重復(fù)性, 卻有一定的互補(bǔ)性, 屬于血液篩查檢測(cè)重要方法。

［1］何亞琴, 徐立, 楊愛龍.核酸檢測(cè)在篩查獻(xiàn)血者乙型肝炎病毒中的應(yīng)用.中國(guó)輸血雜志, 2013, 26(3):147-148.

［2］王東, 于原, 臧亮, 等.單人份核酸檢測(cè)在血液乙型肝炎病毒篩查中的應(yīng)用.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(7):780-781.

［3］季陽(yáng), 鄭忠偉, 蔡輝, 等.病毒血清學(xué)檢測(cè)與核酸檢測(cè)技術(shù)在輸血傳染病篩檢中的應(yīng)用.中國(guó)輸血雜志, 2010, 23(6):413-414.