紅皮病性銀屑病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的研究

滕艷，王強(qiáng)

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，沈陽110032；2.沈陽市第七人民醫(yī)院，沈陽110003）

紅皮病性銀屑病是一種嚴(yán)重的皮膚病，屬中醫(yī)學(xué)“銀屑瘋”、“紅皮”范疇，由臟腑積熱，感受毒邪，毒熱入營，熏蒸肌膚而發(fā)病。本病多由尋常性銀屑病轉(zhuǎn)化而來，刺激性藥物、使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑過程中突然停藥或減量過快以及感染、精神壓力等可誘發(fā)。目前認(rèn)為銀屑病是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病[1]。本文檢測了15例紅皮病性銀屑病患者外周血中淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)情況，并與尋常性銀屑病患者和正常人對照、分析，旨在探討T細(xì)胞亞群在紅皮病性銀屑病患者外周血中的表達(dá)情況?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 15例患者為2010年1月—2012年12月沈陽市第七人民醫(yī)院收治的經(jīng)臨床和病理確診為紅皮病性銀屑病的患者，其中男10例，女5例，年齡 21～65歲，平均（57.4±8.7）歲，病程 7個月～30年，檢測者1個月內(nèi)未系統(tǒng)口服或外用皮質(zhì)類固醇或其他免疫抑制劑治療。

對照組Ⅰ為20例經(jīng)皮膚科臨床及病理確診為尋常性銀屑病患者，其中男13例，女7例，年齡18～62歲，平均（46.7±7.6）歲，病程 20 d～28年，檢測者 1個月內(nèi)未系統(tǒng)口服或外用皮質(zhì)類固醇或其他免疫抑制劑治療。對照組Ⅱ為20例健康體檢者。

1.2 主要試劑及儀器 試劑 美國Becton-Dickinson（BD）公司生產(chǎn)的Simultest IMK Lymphocytes Kit檢測試劑盒，其組成Isotype Control（MouseIgG1/IgG2a）；CD3-FITC/CD19-PE；CD3-FITC/CD4-PE；CD3 FITC/CD8-PE；CD3-FITC/CD16+CD56-PE；FACS Lysing Solution紅細(xì)胞裂解液。流式細(xì)胞儀由美國Becton-Dickinson（BD）公司生產(chǎn)，型號為 FACSCalibur型。

1.3 方法 流式細(xì)胞分析法：抽取靜脈血2 mL，用20 IU/mL EDTA-K2抗凝，取流式試管加熒光抗體20 μL與0.1 mL抗凝劑混勻，室溫避光反應(yīng)20 min，加10%溶血素混勻，室溫避光反應(yīng)10 min，待管內(nèi)液體透亮,然后1500 r/min，離心5 min，去上清，加PBS 1 mL，輕輕混勻，1500 r/min，離心 5 min，去上清，然后加入0.5 mL PBS混勻，制成單細(xì)胞懸液標(biāo)本，通過流式細(xì)胞儀對待測細(xì)胞進(jìn)行檢測定量分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗，顯著性檢驗水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組Ⅰ患者外周血T細(xì)胞亞群測定 觀察組CD19+細(xì)胞較對照組Ⅰ降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其余各項指標(biāo)比較差異，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表 1。

表1 2組患者外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞群表達(dá)（±s）

表1 2組患者外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞群表達(dá)（±s）

注：觀察組為紅皮病性銀屑病組，對照組Ⅰ為尋常性銀屑病組。檢驗水平為0.05。

組別觀察組對照組Ⅰn 1520 t P CD3+（T）70.03±5.5871.40±3.570.6840.258 CD19+（B）8.94±4.2812.67±4.091.8850.020 CD4+（Th）35.10±8.1436.09±5.520.3910.201組別觀察組對照組Ⅰn 1520 t P CD8+（Ts）40.14±9.2837.34±6.890.9390.704 CD3-16+56+（NK）11.35±5.2110.78±5.820.2840.727 CD4+/CD8+（Th/Ts）0.97±0.501.01±0.300.2680.403

2.2 觀察組與對照組Ⅱ外周血T細(xì)胞亞群測定觀察組 CD19+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD3-16+56+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值較對照組Ⅱ均降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），觀察組CD8+細(xì)胞較對照組Ⅱ升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 2組外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞群表達(dá) （±s）

表2 2組外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞群表達(dá) （±s）

注：觀察組為紅皮病性銀屑病組，對照組Ⅱ為健康體檢組。檢驗水平為0.05。

組別觀察組對照組Ⅰn 1520 t P CD3+（T）70.03±5.5872.37±4.791.2310.961 CD19+（B）8.94±4.2811.55±1.031.8850.020 CD4+（Th）35.10±8.1442.13±1.742.6720.003組別觀察組對照組Ⅰn 1520 t P CD8+（Ts）40.14±9.2830.18±2.363.1380.022 CD3-16+56+（NK）11.35±5.2112.24±1.490.5240.009 CD4+/CD8+（Th/Ts）0.97±0.501.39±0.132.5480.048

3 討論

銀屑病患者存在自身免疫紊亂[1]。細(xì)胞活化是銀屑病細(xì)胞免疫紊亂的重要環(huán)節(jié)，銀屑病皮損表皮和真皮內(nèi)都有活化T細(xì)胞存在[2]。細(xì)胞活化、增殖，進(jìn)而分泌細(xì)胞因子作用于表皮細(xì)胞，最后產(chǎn)生臨床可見的銀屑病皮損[3]。對不同淋巴細(xì)胞的CD抗原進(jìn)行測定，可了解紅皮病性銀屑病外周血中各類淋巴細(xì)胞及其功能亞群的比例及動態(tài)變化，有助于了解本病發(fā)病機(jī)制尤其是細(xì)胞在參與免疫調(diào)節(jié)異常中的作用。

本實驗結(jié)果顯示，紅皮病性銀屑病與尋常性銀屑病對照，CD19＋B細(xì)胞降低，B細(xì)胞與免疫調(diào)節(jié)、自身免疫病密切相關(guān)，主要表達(dá)CD19+，產(chǎn)生高親和力抗體，行使體液免疫功能，通過數(shù)據(jù)分析可看出，B細(xì)胞功能紊亂，提示體液免疫功能紊亂可能在尋常性銀屑病轉(zhuǎn)變?yōu)榧t皮病性銀屑病過程中起一定作用。

紅皮病性銀屑病與正常健康組比較，CD4+T細(xì)胞降低，CD8+T細(xì)胞升高，CD4+/CD8+比值降低，CD19+B細(xì)胞降低、CD3-16+56+NK細(xì)胞降低，說明紅皮病性銀屑病患者T細(xì)胞亞群、B細(xì)胞、NK細(xì)胞功能發(fā)生紊亂，提示免疫活性細(xì)胞功能異常，導(dǎo)致整個免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)失衡，最終導(dǎo)致病情加重。學(xué)者普遍認(rèn)為CD4+/CD8+比例失衡對銀屑病的發(fā)生發(fā)展非常重要[4]。 T 細(xì)胞分兩個亞群 Th（CD4＋）、Ts（CD8＋），CD4+T細(xì)胞在銀屑病發(fā)病環(huán)節(jié)上處于優(yōu)先狀態(tài)，即在早期和充分發(fā)展的皮損中主要是CD4+T細(xì)胞，而CD8+T細(xì)胞可能在皮損消退期起作用[4]。CD4+T細(xì)胞降低，可能由于周圍血中一部分活化的CD4+T細(xì)胞有選擇地進(jìn)入皮損中致皮損中CD4+細(xì)胞增多，而致循環(huán)中CD4+細(xì)胞減少[5]。

綜上所述，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中體液免疫功能紊亂可能起一定作用，具體機(jī)制有待于對大樣本病例數(shù)進(jìn)行深一步研究。

[1] 韓鳳嫻，徐麗敏，趙宏麗，等.流式細(xì)胞分析法測定外周血皮膚淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原陽性T細(xì)胞在尋常性銀屑病中的表達(dá)[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志,2008,7（3）：158-159.

[2] 何玉情，張錫寶，曾抗.銀屑病T細(xì)胞活化和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的進(jìn)展[J].國際皮膚性病學(xué)雜志,2008,34（1）：54-56.

[3] 韓義香，楊毅，章圣輝，等.銀屑病患者外周血T細(xì)胞亞群及B7/CD28 的表達(dá)[J].中國麻風(fēng)皮膚病雜志,2007,23（10）：908-909.

[4] 李玲玲，翟幸.尋常性銀屑病不同病期T細(xì)胞亞群的表達(dá)[J].中國麻風(fēng)皮膚病雜志,2011,27（11）:816-817.

[5] 翁孟武.免疫皮膚病學(xué)基礎(chǔ)與臨床[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1996：445.