不同類型殺蟲劑對(duì)西花薊馬的室內(nèi)毒力

張治軍，張友軍，徐寶云，朱國仁，呂要斌，吳青君

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)與微生物研究所，浙江 杭州 310021;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜花卉研究所，北京 100081)

西花薊馬Frankliniella occidentalis (Pergande)屬纓翅目 (Thysanoptera)薊馬科 (Thripidae)害蟲，寄主植物多達(dá)62 科500 多種［1-2］，是世界范圍分布的危險(xiǎn)性入侵害蟲［3］。我國最早于2003年在北京發(fā)現(xiàn)［4］，現(xiàn)已擴(kuò)散至云南、山東和浙江等14 省市，尤以云南和北京危害最為嚴(yán)重，在全國呈快速蔓延趨勢［5-6］。

在西花薊馬爆發(fā)期目前仍主要以化學(xué)防治為主［5］。由于西花薊馬體型微小，繁殖力強(qiáng)，能進(jìn)行孤雌生殖，種群增長迅速，田間用藥強(qiáng)度大［7］，導(dǎo)致國外西花薊馬對(duì)有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性［8-11］。篩選不同類型的防治藥劑，明確我國西花薊馬對(duì)不同類型藥劑的抗性風(fēng)險(xiǎn)［12-15］，開展田間西花薊馬抗性監(jiān)測對(duì)于明確不同地區(qū)西花薊馬的抗性譜和抗性水平，建立各地區(qū)合理的西花薊馬防治和西花薊馬抗性治理措施具有重要意義。

建立一套合理、可靠、省時(shí)、省力、快速、簡單、易行的生物測定方法是西花薊馬藥劑篩選的前提。目前西花薊馬的生物測定方法主要有玻璃殘留法［16］、改 進(jìn) 的Plexiglass cell 法［17］、改 進(jìn)的Munger cell 法［15］和改進(jìn)的離心管藥膜法(thtips insecticide bioassay system TIBS)［18］。上 述方法的共同點(diǎn)都是藥膜法，對(duì)于測定觸殺類型的藥劑行之有效，但是用于測定胃毒或胃毒兼觸殺等類型的藥劑存在缺陷。本研究在省時(shí)、省力的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，添加浸泡藥液的小葉盤 (直徑5.0 mm，藥餌)，稱之為葉管藥膜法，以此測定不同類型藥劑對(duì)西花薊馬若蟲和成蟲的室內(nèi)毒力，為防治西花薊馬篩選合適藥劑。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

供試的西花薊馬，2003年于北京市海淀區(qū)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所生產(chǎn)基地采集成蟲，在室內(nèi)產(chǎn)卵于四季豆豆莢上，孵化出的1 齡若蟲、2 齡若蟲、預(yù)蛹、蛹和成蟲都用四季豆飼養(yǎng)于養(yǎng)蟲室內(nèi)。飼養(yǎng)條件:溫度 (27 ± 1)℃，相對(duì)濕度75% ±5%，光周期16 h∶8 h (光照∶黑暗)。連續(xù)飼養(yǎng)30 代以上，期間不接觸任何藥劑，建立毒力敏感品系。

1.2 供試農(nóng)藥

選用氨基甲酸酯類、有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類、新煙堿類、抗生素類、吡咯類和沙蠶毒素類7 大類，共11個(gè)殺蟲劑品種。氨基甲酸酯類有90%滅多威可溶性粉劑 (上海杜邦農(nóng)化有限公司)、20%丁硫克百威乳油 (蘇州富美實(shí)植物保護(hù)有限公司)，有機(jī)磷類為48% 樂斯本乳油 (美國陶氏益農(nóng)公司)，擬除蟲菊酯類為4.5%高效氯氰菊酯乳油 (杭州慶豐農(nóng)化有限公司)，新煙堿類有25%阿克泰水分散粒劑 (瑞士先正達(dá)有限公司)、20%啶蟲脒可溶性液劑 (浙江正化股份有限公司)，抗生素類有2.5%菜喜懸浮劑 (美國陶氏益農(nóng)公司)、0.9% 愛福丁乳油 (北京農(nóng)業(yè)大學(xué)新技術(shù)開發(fā)總公司)、2.2%甲維鹽微乳劑 (山東省長清農(nóng)藥廠有限公司)，沙蠶毒素類為18%殺蟲雙水劑 (海鹽博大精細(xì)化工有限公司)，吡咯類為10%除盡懸浮劑 (德國巴斯夫股份有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 離心管藥膜法與葉管藥膜法比較

2種方法均以10% 除盡懸浮劑為測試藥劑，設(shè)5個(gè)濃度處理，即100，50，25，12.5，6.25 mg·L-1，以清水為對(duì)照，比較2種方法對(duì)西花薊馬2 齡若蟲的殺蟲效果。

離心管藥膜法 (TIBS)。將每個(gè)濃度藥液分別注滿1.5 mL 離心管3只，每只為1 重復(fù)，放置4 h。然后倒掉藥液，將離心管置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾干，待用。將長約10 cm 的細(xì)針針尖經(jīng)酒精燈加熱，刺晾干的離心管管底，燙出直徑2～3 mm 的孔。然后往離心管管蓋內(nèi)加入10%的糖水作為試蟲的食物，并用封口膜封上。真空泵的接口用紗布封好，套在處理好的離心管管口，打開真空泵，調(diào)節(jié)氣流大小，把離心管管底的燙孔對(duì)準(zhǔn)西花薊馬2 齡若蟲，使蟲順氣流吸入離心管。先對(duì)照后處理，每管吸2齡若蟲10～20 頭，然后蓋好管蓋，用封口膜封好燙孔。25℃環(huán)境下放置1～4 d。

葉管液膜法。是對(duì)TIBS 法的改進(jìn)，在上述步驟的基礎(chǔ)上，以浸藥的菜葉取代糖水。將摘來的鮮嫩甘藍(lán)葉洗干凈，晾干。分別在每個(gè)濃度藥液中浸葉1 片，時(shí)間10 s。浸過的葉子置實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾干，待用。然后在吸蟲之前，用剪刀將晾干的甘藍(lán)葉片剪成3 片2 cm×4 cm 的長方形小條，用小鑷子夾入相應(yīng)藥液濃度的離心管中，每管1 片，放置平整，取代10%的糖水作為試蟲食物。

1.3.2 西花薊馬若蟲、成蟲對(duì)不同類型藥劑的敏感性

以葉管藥膜法為生物測定方法分別測定西花薊馬若蟲、成蟲對(duì)11種不同類型藥劑的敏感性。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

應(yīng)用SAS 軟件分析10% 除盡懸浮劑不同處理(不同方法和不同濃度)之間西花薊馬2 齡幼蟲死亡率差異顯著性 (P ＜0.05;不同方法之間進(jìn)行t檢驗(yàn)，不同濃度之間進(jìn)行Turkey 氏測驗(yàn))。應(yīng)用Probit 機(jī)率值分析法，經(jīng)計(jì)算機(jī)求出毒力回歸方程及LC50、LC95和各自95% 置信限，以及相關(guān)系數(shù)等相關(guān)參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 西花薊馬生物測定方法

如表1 所示，西花薊馬在10% 除盡懸浮劑不同處理濃度和不同處理方法處理24 h 后，浸管又浸葉的葉管藥膜法處理西花薊馬的死亡率，除了對(duì)照以外，都明顯高于僅浸管時(shí)相應(yīng)處理濃度的死亡率。同時(shí)僅浸管時(shí)各藥劑處理濃度之間的死亡率無差異顯著性，而浸管+浸葉的葉管藥膜法中西花薊馬的死亡率在不同濃度的藥劑處理之間呈現(xiàn)出梯度變化。對(duì)照的死亡率與不同方法之間沒有明顯差別。說明用葉管藥膜法比TIBS 法對(duì)西花薊馬生物測定效果更好。

表1 西花薊馬在10% 除盡懸浮劑不同處理濃度和不同處理方法下的死亡率

2.2 11種藥劑對(duì)西花薊馬若蟲的毒力

應(yīng)用葉管藥膜法測定11種藥劑對(duì)西花薊馬敏感品系若蟲的毒力，分析建立各種殺蟲劑的毒力回歸方程，并計(jì)算出LC50和LC95致死濃度 (表2)。

表2 11種殺蟲劑對(duì)西花薊馬若蟲的致死劑量

由表2 可知，11種藥劑中，對(duì)西花薊馬若蟲毒力最高的是抗生素類2.5% 菜喜懸浮劑，LC50值為0.11 mg·L-1;2.2%甲維鹽微乳劑毒力較高，LC50值為0.68 mg·L-1;其次為48% 樂斯本乳油，其LC50值為1.04 mg·L-1;接下來就是0.9%愛福丁乳油、10%除盡懸浮劑、2.5% 阿克泰水分散粒劑、4.5%高效氯氰菊酯乳油，其LC50分別是4.81，5.02，7.77 和9.63 mg·L-1;20%丁硫克百威乳油、90%滅多威可溶性粉劑和20%啶蟲脒可溶性液劑的LC50值分別為44.92，63.73 和92.36 mg·L-1;毒力最差的是18%殺蟲雙水劑，LC50為212.32 mg·L-1。其中48%樂斯本乳油、2.5%菜喜懸浮劑、0.9%愛福丁乳油、2.2%甲維鹽微乳劑、10%除盡懸浮劑、25%阿克泰水分散粒劑、4.5%高效氯氰菊酯乳油7種農(nóng)藥對(duì)西花薊馬敏感品系若蟲具有顯著的生物活性，其效果明顯高于供試的其他藥劑。

各種藥劑對(duì)西花薊馬若蟲LC95值從小到大依次是2.5% 菜喜懸浮劑、48% 樂斯本乳油、2.2%甲維鹽微乳劑、0.9% 愛福丁乳油、10% 除盡懸浮劑、25%阿克泰水分散粒劑、20% 丁硫克百威乳油、90% 滅多威可溶性粉劑、18% 殺蟲雙水劑、20% 啶蟲脒可溶性液劑，分別為0.83，4.85，25.21，38.76，59.73，114.33，212.46，285.86，289.04，323.69 和591.90 mg·L-1，綜合LC50和LC95，20%丁硫克百威乳油、90%滅多威可溶性粉劑、18%殺蟲雙水劑、20%啶蟲脒可溶性液是供試藥劑中對(duì)西花薊馬敏感品系若蟲毒力最弱的4種殺蟲劑。

2.3 10種藥劑對(duì)西花薊馬成蟲的毒力

從表3 可以看出，24 h 后各藥劑對(duì)西花薊馬成蟲LC50從高到低依次是:2.5%菜喜懸浮劑＞48%樂斯本乳油＞2.2%甲維鹽微乳劑＞10%除盡懸浮劑＞0.9%愛福丁乳油?。?.5%高效氯氰菊酯乳油＞20%丁硫克百威乳油＞20%啶蟲脒可溶性液劑＞18%殺蟲雙水劑＞90% 滅多威可溶性粉劑。其中2.5%菜喜懸浮劑毒力最好LC50值為0.02 mg·L-1，毒力最差的是90% 滅多威可溶性粉劑，其LC50值為365.03 mg·L-1，是2.5%菜喜懸浮劑的18 250 倍。2.2%甲維鹽微乳劑和10%除盡懸浮劑作用沒有差異，2.5%菜喜懸浮劑與其他9 藥劑間具有明顯的差異，同是氨基甲酸酯類的90% 滅多威可溶性粉劑與20% 丁硫克百威乳油間沒有明顯差異，而48%樂斯本乳油與其他藥劑間的毒力具有明顯差異。就LC95值而言，毒力最高的依然是2.5%菜喜懸浮劑，其LC95值為0.22 mg·L-1，其次是48%樂斯本乳油，是12.93 mg·L-1，再次是10%除盡懸浮劑﹑2.2%甲維鹽微乳劑﹑0.9%愛福丁乳油、4.5%高效氯氰菊酯乳油和20% 丁硫克百威乳油，分別是74.04，77.56，88.40，148.48 和362.95 mg·L-1，最低的是20%啶蟲脒可溶性液劑﹑ 90%滅多威可溶性粉劑和18%殺蟲雙水劑，分別是781.51，2 795.57 和6 107.86 mg·L-1。

表3 10種殺蟲劑對(duì)西花薊馬成蟲的致死劑量

3 小結(jié)和討論

比較分析不同殺蟲劑對(duì)西花薊馬若蟲和成蟲的致死劑量，結(jié)果表明西花薊馬若蟲﹑成蟲對(duì)不同藥劑的敏感性不同。西花薊馬若蟲﹑成蟲對(duì)90% 滅多威可溶性粉劑的敏感性具有明顯差異，90%滅多威可溶性粉劑對(duì)于西花薊馬若蟲的毒殺效果顯著高于成蟲。48%樂斯本乳油用于防治西花薊馬若蟲﹑成蟲都有效，對(duì)若蟲的LC50值是1.04 mg·L-1，成蟲LC50值是2.73 mg·L-1，且對(duì)若蟲的效果明顯好于成蟲。4.5%高效氯氰菊酯乳油、0.9%愛福丁乳油和2.2%甲維鹽微乳劑對(duì)西花薊馬若蟲﹑成蟲效果與48%樂斯本乳油和90%滅多威可溶性粉劑的作用情形相同，對(duì)2個(gè)蟲態(tài)都表現(xiàn)出很高毒力效果，且對(duì)若蟲的毒力明顯高于成蟲。20%丁硫克百威乳油和20% 啶蟲脒可溶性液劑對(duì)西花薊馬若蟲﹑成蟲2個(gè)蟲態(tài)之間沒有明顯的差別。而2.5%菜喜懸浮劑對(duì)西花薊馬成蟲和若蟲的作用非常獨(dú)特，對(duì)2個(gè)蟲態(tài)都表現(xiàn)出最高的作用效果，對(duì)若蟲和成蟲的LC50值分別為0.11 和0.02 mg·L-1，對(duì)成蟲的作用顯著高于若蟲，原因可能是西花薊馬成蟲活動(dòng)性更強(qiáng)、取食量更大，從而接觸到的藥劑量大于若蟲。張安盛等［19］報(bào)道的結(jié)果與之相反，是若蟲更敏感，可能與生物測定方法不同有關(guān)，他們采用的是浸蟲法，可能若蟲的表皮結(jié)構(gòu)比成蟲更利于藥劑的滲透。

西花薊馬抗藥性監(jiān)測是西花薊馬抗藥性治理的必要組成部分，其目的是為了明確西花薊馬的抗性水平、抗性分布情況、抗性變化的時(shí)空動(dòng)態(tài)以及建立和評(píng)價(jià)抗性治理措施的效果。為此，必須具備一套準(zhǔn)確而簡便、快速的抗性監(jiān)測技術(shù)。本研究在省時(shí)、省力、快速、簡單、易行的TIBS 基礎(chǔ)上加以改進(jìn):添加浸泡藥液的小葉盤 (直徑5.0 mm，藥餌)，稱之為葉管藥膜法。因?yàn)槲骰ㄋE馬的活動(dòng)性強(qiáng)，應(yīng)用玻璃殘留法、浸蟲法、改進(jìn)的Plexiglass cell 法和改進(jìn)的Munger cell 法等生物測定方法，挑取試蟲難度大，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。TIBS 用真空泵作為動(dòng)力源制造細(xì)微氣流，在挑取試蟲時(shí)省時(shí)、省力。TIBS 應(yīng)用1.5 mL 離心管作為實(shí)驗(yàn)容器，試蟲通過接觸內(nèi)壁的藥膜而使藥劑對(duì)其發(fā)生作用，這對(duì)僅有觸殺類型的藥劑不失為一種很好的生物測定方法。但是，對(duì)于同時(shí)具有胃毒或僅有胃毒等其他作用方式的藥劑進(jìn)行效果評(píng)價(jià)時(shí)，很可能低估它們的效果或者根本就不能說明其效果。本研究在TIBS 基礎(chǔ)上建立的葉管藥膜法，通過浸管和浸葉，附著藥膜的葉片作為實(shí)驗(yàn)過程中試蟲的食料，試蟲充分接觸到處理藥液，因而能更準(zhǔn)確有效地評(píng)價(jià)相關(guān)藥劑的效果。

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