江西特色中藥茶芎飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 熊志剛袁桂平 (.江西南華醫(yī)藥有限公司 南昌 330006；.江西省食品藥品檢驗(yàn)所 南昌 33009)

江西特色中藥茶芎飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 熊志剛1袁桂平2(1.江西南華醫(yī)藥有限公司 南昌 330006；2.江西省食品藥品檢驗(yàn)所 南昌 330029)

目的：建立茶芎飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定阿魏酸的含量。結(jié)果：TLC鑒別出與茶芎對照藥材相對應(yīng)的斑點(diǎn)；HPLC法測定出阿魏酸在0.02460～0.4920μg之間呈良好的線性，平均加樣回收率為99.72%(RSD=0.7%)。結(jié)論：所建立的定性定量方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可以作為茶芎飲片的質(zhì)量控制。

茶芎飲片；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量控制

茶芎[1]為我省特有中藥材品種，來源于傘形科植物茶芎LigusticumsinenseOliv.cv.Chaxiong Mss. 的干燥根莖。主產(chǎn)于我省的九江武寧、瑞昌、德安等地。具有活血行氣，祛風(fēng)止痛作用。臨床主要用于治療月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，閉經(jīng)，產(chǎn)后瘀阻腹痛，胸脅刺痛，癥瘕腹痛，跌打損傷，頭痛，風(fēng)濕痹痛?！督魇≈兴幉臉?biāo)準(zhǔn)》1996年版首次收載茶芎藥材，并制定藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，無飲片標(biāo)準(zhǔn)，且內(nèi)容簡單。為了有效規(guī)范茶芎飲片的質(zhì)量，提高茶芎飲片的質(zhì)量控制水平，確保茶芎的臨床療效，并將其方法收入新版《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》2008年版，課題組對中藥茶芎飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了全面的研究，采用TLC法對樣品進(jìn)行了定性鑒別；采用HPLC法對樣品中阿魏酸進(jìn)行了定量測定。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(Breeze工作站，Waters2487檢測器)；百萬分之一電子天平。

阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0773-9910，供含量測定用)；茶芎對照藥材(自制)；乙腈為色譜純，水為三重蒸餾水，其他試劑為分析純。

研究樣品：來源武寧魯溪、都昌南義和江西昭德堂藥業(yè)有限公司(071210～15)

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜定性鑒別[2]取茶芎飲片粉末1g，加乙醚15mL，置水浴上加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。另取茶芎對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖1。

圖1 茶芎飲片TLC圖譜

2.2 阿魏酸的HPLC含量測定[3]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:Thermo C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相:乙睛-0.085%磷酸溶液(18∶82)；檢測波長:316nm；流速:1mL/分；柱溫:35℃；理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于50005。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對照品適量，加70%甲醇制成每1mL含10μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取茶芎飲片樣品粉末(過三號篩)約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20mL，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 最大吸收測定 取阿魏酸對照品適量，用70%甲醇制成適當(dāng)?shù)臐舛?，?0%甲醇為空白，在400～200nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在316nm波長處有最大吸收，故確定檢測波長為316nm。

2.2.5 提取時(shí)間的考察 精密稱取樣品三份，各約0.25g，分別加熱回流20分鐘、30分鐘、60分鐘，對其提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果30分鐘可以完全提取阿魏酸。

2.2.6 供試品液相色譜分離情況 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果樣品中阿魏酸與其他組分色譜峰可達(dá)基線分離，且與其他相鄰色譜峰分離度大于1.5。見圖2、3。

圖2 阿魏酸對照品HPLC圖

圖3 茶芎樣品HPLC圖

2.2.7 耐用性試驗(yàn) 精密稱取樣品約0.25g，制備供試品溶液，分別采用三種不同廠家的色譜柱進(jìn)行測定，結(jié)果阿魏酸在各色譜柱中均分離良好，測得含量無顯著差異。

2.2.8 線性關(guān)系的考察 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥12小時(shí)的阿魏酸對照品12.30mg，置50mL量瓶中，精密加入70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后，精密量取各1mL分別置5，10，25，50，100mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，各精密吸取10μL注入液相色譜儀，按正文色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=5049298.9X+10479.4，r=0.9999，結(jié)果表明阿魏酸的量在0.02460～0.4920μg之間呈良好線性。

2.2.9 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定其阿魏酸峰面積，結(jié)果相對平均偏差為0.4%。

2.2.10 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號樣品，平行制備6份供試品溶液，各精密吸取10μL，測定阿魏酸平均含量為0.07555mg/g，RSD為0.3%。表明該法具有良好的重現(xiàn)性。

2.2.11 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，室溫放置0，2，4，8，12，24小時(shí)后進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果在24小時(shí)內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定(RSD為0.5%)。

2.2.12 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收率測定法，精密稱取已測定含量的同一批號樣品6份，分別加入阿魏酸對照品，依法測定，結(jié)果回收率為100.77%、99.70%、99.55%、99.26%、100.05%、99.02%，平均回收率99.72%，RSD=0.7%。

2.2.13 樣品測定 照上述條件和方法測定6批樣品，結(jié)果見表1。

表1 茶芎飲片樣品中阿魏酸的含量測定結(jié)果/mg·g-1

3 討論

3.1 本文針對江西特色中藥茶芎只有藥材標(biāo)準(zhǔn)，為建立有效飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，通過分析茶芎飲片化學(xué)成分，設(shè)計(jì)建立了茶芎飲片薄層色譜鑒別方法。采用不同的樣品前處理方法進(jìn)行提取、分離、純化；TLC鑒別薄層特征斑點(diǎn)清晰，分離好，背景污染小，可以有效控制茶芎飲片質(zhì)量。

3.2 采用HPLC法對茶芎飲片中主要有效活性成分-阿魏酸進(jìn)行定量測定，通過參考文獻(xiàn)和研究摸索，以乙腈-0.085%磷酸溶液(18∶82)為流動(dòng)相，流速:1.0mL/分，分離度好，保留時(shí)間適中(約9分鐘)；經(jīng)方法學(xué)考察，線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性的RSD均在2%以內(nèi)；加樣回收率在99.0%至100.8%之間，且RSD=0.7%。結(jié)果表明本定量方法可用于茶芎飲片的質(zhì)量控制。

[1]江西省衛(wèi)生廳編.江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M].南昌:江西科學(xué)技術(shù)出版社,1997:152～155.

[2]徐璐珊.中國藥材學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1996:551～554.

[3]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海：上海科技出版社,1996:976～979

R 284.1

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2012-10-17)