銀藍(lán)調(diào)脂膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的調(diào)血脂作用研究*

★ 陳玉興 黃雪君 杜鐵良 曾曉會(huì) 姚楠 黃丹娥 (廣東省中醫(yī)研究所 廣州 510095)

銀藍(lán)調(diào)脂膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的調(diào)血脂作用研究*

★ 陳玉興**黃雪君 杜鐵良 曾曉會(huì) 姚楠 黃丹娥 (廣東省中醫(yī)研究所 廣州 510095)

目的:觀察銀藍(lán)調(diào)脂膠囊對(duì)高脂血癥模型大鼠血脂的影響,為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法: 給予大鼠高脂飼料8周，制造高脂血癥大鼠模型。造模4周后測(cè)定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量，按血脂水平分組給藥，測(cè)定灌服銀藍(lán)調(diào)脂膠囊4周后高脂血癥模型大鼠甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白脂酶(LPL)、肝酯酶(HL)、游離脂肪酸(FFA)等指標(biāo)的變化。結(jié)果:銀藍(lán)調(diào)脂膠囊能明顯降低高脂飼料飲食所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量，升高HDL-c 、ApoA1含量和LPL、HL、總酯酶活性，降低LDL-c、ApoB、FFA含量，提高ApoA1/ApoB比值。結(jié)論:銀藍(lán)調(diào)脂膠囊具有明確的調(diào)節(jié)高脂血癥的作用。

銀藍(lán)調(diào)脂膠囊；高脂血癥大鼠

銀藍(lán)調(diào)脂膠囊為中藥六類新藥，經(jīng)臨床十余年應(yīng)用篩選形成，由銀杏葉、絞股藍(lán)等中藥組成，具有益氣健脾、活血化瘀、祛痰利濕等功效，主要適用于氣虛痰瘀阻痹型高脂血癥的治療。銀藍(lán)調(diào)脂膠囊處方及制劑工藝申請(qǐng)了專利1項(xiàng)，申請(qǐng)?zhí)?009100419601；獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥物臨床試驗(yàn)批件1項(xiàng)，批件號(hào)2012L01011。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)其調(diào)血脂作用進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察，為銀藍(lán)調(diào)脂膠囊臨床治療高脂血癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑

銀藍(lán)調(diào)脂膠囊，由廣東省中醫(yī)研究所制劑室制備提供，批號(hào)090402；非諾貝特膠囊，法國(guó)利博福尼制藥公司，批號(hào)93640；血脂康膠囊，北京北大維信生物科技有限公司，批號(hào)20090210；膽固醇，廣州合達(dá)生物科技有限公司，批號(hào)20090512；豬油，市售豬板油煉制，臨用現(xiàn)煉；丙基硫氧嘧啶，廣州康和藥業(yè)有限公司，批號(hào)20090211；膽固醇試劑盒，上海科欣生物技術(shù)研究所，批號(hào)20090602；甘油三酯試劑盒，上?？菩郎锛夹g(shù)研究所，批號(hào)20090602；直接高密度脂蛋白膽固醇試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)090162；直接低密度脂蛋白膽固醇試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)090191；LPL/HL測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20090812；載脂蛋白A1測(cè)定試劑盒，上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，批號(hào)20090514；載脂蛋白B測(cè)定試劑盒，上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，批號(hào)20090514；游離脂肪酸FFA測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20090812。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重180～220g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(粵)2008-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)№0051076。實(shí)驗(yàn)環(huán)境，廣東省中醫(yī)研究所SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，SYXK(粵)2005-0059。

1.3 儀器

JJ3000動(dòng)物電子秤，Gamp;G公司產(chǎn)品；BS224S電子天平(1/萬(wàn))，德國(guó)SARTORIUS產(chǎn)品； HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市富華儀器有限公司產(chǎn)品；3K30離心機(jī)，SIGMA公司產(chǎn)品；752N型紫外分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1 大鼠高脂飼料配制 參照文獻(xiàn)方法[1]進(jìn)行配制，大鼠高脂飼料組成：2%膽固醇，10%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，87.8%基礎(chǔ)飼料，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工配制。

2.2動(dòng)物分組與模型建立[2]取SPF級(jí)SD大鼠84只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為7組，分別為正常對(duì)照組、高脂模型組，非諾貝特組、血脂康組、銀藍(lán)調(diào)脂膠囊高、中、低劑量組，每組12只，雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠6只。除正常對(duì)照組給予正常飼料外，其余各組大鼠每天上午9時(shí)左右每籠給予高脂飼料200g，下午5時(shí)左右換成正常飼料100g，自由飲水，連續(xù)8周。第4周末下午5時(shí)各組大鼠均禁食不禁水15小時(shí)，第2天8時(shí)各組大鼠均從眼眶靜脈叢采血1mL，離心分離血清，按膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒說(shuō)明書測(cè)定大鼠血清中TC、TG含量作為大鼠給藥前血脂水平。測(cè)定血脂水平后各給藥組大鼠每天上午按劑量灌胃給予相應(yīng)藥物10mL/kg，正常對(duì)照組、高脂模型組給予等量蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥4周。末次給藥前各組大鼠均禁食不禁水15小時(shí)，末次給藥1小時(shí)后取血，離心分離血清，分別按各試劑盒說(shuō)明書測(cè)定各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、LPL、HL和FFA含量。

2.3 血脂及相關(guān)指標(biāo)測(cè)定 血清總膽固醇(TC)測(cè)定采用膽固醇氧化酶法；甘油三酯(TG)測(cè)定采用甘油磷酸氧化酶法；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)定采用磷鎢酸-鎂沉淀法；低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)采用聚乙烯硫酸沉淀法；載脂蛋白A (ApoA1)、載脂蛋白B (ApoB)測(cè)定采用免疫透射比濁法；脂蛋白脂酶(LPL)及肝脂酶(HL)試劑盒采用銅試劑比色法；游離脂肪酸(FFA)測(cè)定采用銅試劑比色法。均按試劑盒說(shuō)明書步驟測(cè)定。

2.4 統(tǒng)計(jì)分析方法 所有計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差( )表示。多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，組間均數(shù)兩兩比較，方差齊時(shí)采用SNK法；方差不齊時(shí)采用Dunnett's T3法。由SPSSl5.0軟件完成。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)進(jìn)食高脂飼料所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量的影響

在造模4周后(給藥前)各組造模大鼠與正常對(duì)照組大鼠相比，血清TC、TG含量均顯著升高(Plt;0.01)。給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清TC、TG含量仍明顯升高(Plt;0.01)；與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥·kg-13個(gè)劑量均能使高脂飼料飲食所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量明顯降低(Plt;0.05或Plt;0.01)。詳見(jiàn)表1。

表1 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量的影響

3.2 對(duì)進(jìn)食高脂飼料所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清HDL-c、LDL-c含量的影響

給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清HDL-c、LDL-c含量均明顯升高(Plt;0.01)；與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊5.148g生藥·kg-1劑量能使高脂飼料飲食所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清HDL-c含量顯著升高(Plt;0.01)、LDL-c含量明顯下降(Plt;0.01)。詳見(jiàn)表2。

表2 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清HDL-c、LDL-c含量的影響

3.3 對(duì)進(jìn)食高脂飼料所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清ApoA1、ApoB含量的影響

給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清ApoB含量明顯升高(Plt;0.01)、ApoA1/ApoB比值顯著下降(Plt;0.01)；與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥·kg-13個(gè)劑量均能顯著升高實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠ApoA1含量和ApoA1/ApoB比值(Plt;0.05或Plt;0.01)，明顯降低ApoB含量(Plt;0.01)。詳見(jiàn)表3。

表3 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清ApoA1、ApoB含量的影響

3.4 對(duì)進(jìn)食高脂飼料所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清LPL、HL、總酯酶活性的影響

給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清LPL、HL和總酯酶活性顯著下降(Plt;0.05或Plt;0.01)；與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥·kg-13個(gè)劑量均能使高脂飼料飲食所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清HL、總酯酶活性顯著升高(Plt;0.01)，在一定程度上升高血清LPL活性。詳見(jiàn)表4。

表4 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清LPL、HL、總酯酶活性的影響

3.5 對(duì)進(jìn)食高脂飼料所致實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清FFA含量的影響

給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清FFA含量顯著升高(Plt;0.01)；與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥/kg 3個(gè)劑量均能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清FFA含量(Plt;0.05或Plt;0.01)。詳見(jiàn)表5。

表5 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清清FFA含量的影響

4 討論

高脂血癥(hyperlipidemia，HLP)是誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、冠心病或其它心腦血管疾病的首要危險(xiǎn)因素，動(dòng)脈粥樣硬化所致的心腦血管疾病是當(dāng)前危及人類生命健康的主要疾病之一，有效防治HLP 已成為防治心腦血管疾病的重要環(huán)節(jié)。

2002年全國(guó)第四次營(yíng)養(yǎng)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示全國(guó)血脂異常的人群約1.6億，血膽固醇≥6.24 mmol/L人群在不同性別、年齡及地區(qū)35-74歲人群中的高膽固醇血癥總患病率為(9.0±0.3)%。面臨著嚴(yán)峻的血脂異常高發(fā)情況，我國(guó)對(duì)于血脂異常的知曉率、控制率及達(dá)標(biāo)率卻較低[3]，對(duì)于經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的中國(guó)來(lái)說(shuō)，高血脂在整個(gè)21世紀(jì)，將會(huì)成為中國(guó)人健康的重大威脅。

西醫(yī)對(duì)高脂血癥的研究和治療取得了較大的成果，臨床常用的調(diào)血脂西藥主要有[4,5]：(1)貝特類，該類藥物通過(guò)激動(dòng)PPARα，增加LPL酶活性，降低甘油三酯和膽固醇，但常有惡心、腹脹、腹瀉、白細(xì)胞減少等不良反應(yīng)；(2)他汀類，作用靶標(biāo)為HMG-COA，主要降低膽固醇，降脂作用強(qiáng)，起效快，但有頭痛、失眠、惡心等不良反應(yīng)；(3)煙酸類，降低血清甘油三酯的作用較強(qiáng)，但易產(chǎn)生皮膚紅斑、熱感、瘙癢；(4)多烯不飽和脂肪酸類，該類藥物與膽固醇結(jié)合成酯，促進(jìn)其降解為膽汁酸，使血漿膽固醇濃度下降，該類藥物具有抗血小板凝集作用，故需謹(jǐn)慎使用；(5)膽固醇吸收抑制劑，代表藥物Ezetimibe，該藥通過(guò)與膽汁酸結(jié)合，阻斷膽汁酸重吸收，促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，從而降低體內(nèi)膽固醇，常見(jiàn)不良反應(yīng)有腹脹、惡心、便秘，不適合患有胃腸道疾病病人使用。此外，近年來(lái)他汀類、貝特類與他汀類合用引起的橫紋肌溶解這一副作用受到了越來(lái)越多的關(guān)注，這嚴(yán)重影響了當(dāng)前兩大降血脂藥物在臨床上長(zhǎng)期應(yīng)用的安全性[6]。高脂血癥臨床需長(zhǎng)期用藥，西藥長(zhǎng)期用藥所引起的肝腎功能、肌肉損害及停藥后血脂反跳一直是西醫(yī)治療本病的難題[7]。

當(dāng)前，降血脂藥物研究策略及靶標(biāo)主要有影響膽固醇合成、干擾脂質(zhì)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程、促進(jìn)高密度脂蛋白的形成、抑制低密度脂蛋白的形成以及抑制膽固醇的吸收等[8,9]。高脂血癥病因病機(jī)較為復(fù)雜，由多因素引起并呈現(xiàn)多器官、多靶點(diǎn)同時(shí)病變的趨勢(shì)，與西藥單組分、單靶標(biāo)的作用模式相比，中藥的多組分、多靶點(diǎn)、毒副小、整體調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)更具優(yōu)勢(shì)。充分發(fā)揮中醫(yī)藥的特色和優(yōu)勢(shì)治療高脂血癥具有廣闊的應(yīng)用前景[10]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脂質(zhì)代謝紊亂乃由臟氣虧虛、氣化功能失調(diào)所致。因血脂為水谷精微物質(zhì)所化，參與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)與代謝。若臟氣虧虛，氣化功能失調(diào)，不能運(yùn)化輸布水谷精微至全身，多余之脂質(zhì)則會(huì)滯留沉淀于血脈肌肉之中形成脂濁，進(jìn)而影響血脈津液之運(yùn)行以致痰濁、瘀血內(nèi)著，終成臟氣虧虛，痰瘀互結(jié)之錯(cuò)綜復(fù)雜之病理變化[11]。是故痰濁瘀血阻滯是高脂血癥的重要的病理基礎(chǔ)，高脂血癥的發(fā)生主要?dú)w結(jié)于脾、腎，脾腎虛弱為本，痰瘀互結(jié)為標(biāo)[12]。

銀藍(lán)調(diào)脂膠囊功能益氣健脾、活血化瘀、祛痰利濕，對(duì)氣虛痰瘀阻痹型高脂血癥有較好療效。本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊能夠顯著降低外源性飲食性高脂血癥大鼠TC、TG含量，升高HDL-c含量，降低LDL-c含量。其作用機(jī)理是通過(guò)提高ApoA1水平促進(jìn)CE利用合成HDL-c，從而促進(jìn)TC轉(zhuǎn)化CE，降低了TC水平；通過(guò)降低ApoB水平，減少了LDL-c的合成；通過(guò)升高LPL、HL和總酯酶活性促進(jìn)TG的水解代謝；通過(guò)降低FFA含量促進(jìn)了TG的代謝活動(dòng)。

實(shí)驗(yàn)提示銀藍(lán)調(diào)脂膠囊具有整體調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用，在高脂血癥的防治方面具有良好的應(yīng)用前景。

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廣州市科技計(jì)劃立項(xiàng)資助項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2012J4100043)。

**作者簡(jiǎn)介：陳玉興(1971-)，男，漢族，海南儋州人，主任中藥師，主要從事中藥配方顆粒和中藥新藥的研發(fā)工作，Tel:020-83576735, E-mail: cyx89333@qq.com 。

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2013-07-29)