99例新生兒ABO溶血病血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

康 凱,盧興兵,練正秋

(成都市第三人民醫(yī)院輸血科，四川 成都 610000)

·論 著·

99例新生兒ABO溶血病血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

康 凱,盧興兵,練正秋

(成都市第三人民醫(yī)院輸血科，四川 成都 610000)

目的通過(guò)分析新生兒ABO溶血病(ABO-HDN)的高膽紅素血癥及血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，系統(tǒng)性回顧評(píng)價(jià)血清學(xué)檢測(cè)診斷方法，探討ABO-HDN的血清學(xué)檢查結(jié)果與高膽紅素血癥的關(guān)系。方法對(duì)某院99例確診為ABO-HDN進(jìn)行相關(guān)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及同時(shí)段的血清膽紅素檢測(cè)。結(jié)果99例ABO-HDN中熱抗體放散實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率達(dá)到97.98%，游離抗體實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為76.74%，直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為35.35%；出生后30 min內(nèi)就檢標(biāo)本中高膽紅素血癥0例，發(fā)病率為0%，隨著就檢時(shí)間的延長(zhǎng)，ABO-HDN發(fā)病率越高，高膽紅素血癥的陽(yáng)性率也越大，并且A組的ABO-HDN陽(yáng)性率(高膽紅素血癥陽(yáng)性率)與B-I組有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論臨床上應(yīng)該在出現(xiàn)病理性黃疸之前進(jìn)行新生兒溶血病3項(xiàng)血清學(xué)檢查，熱抗體釋放試驗(yàn)是診斷新生兒溶血病最敏感的指標(biāo)，并且在出生后30 min內(nèi)進(jìn)行血清學(xué)檢查的臨床意義最大。

新生兒溶血病；ABO血型不合；血清學(xué)診斷；膽紅素血癥

1 資料與方法

1.1檢查對(duì)象

2011年11月18日至2012年11月18日某院產(chǎn)房或新生兒室因母嬰ABO血型不合送檢且“3項(xiàng)試驗(yàn)”至少1項(xiàng)為陽(yáng)性的99例患兒，抽血送檢時(shí)間為出生后0～168 h，主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性黃疸、高膽紅素血癥。

1.2儀器與試劑

奧林巴斯AU2700全自動(dòng)生化分析儀、貝克曼庫(kù)爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)總膽紅素測(cè)定試劑盒，血型鑒定試劑盒、抗人球蛋白試劑、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供)，久保田KA2200離心機(jī)，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠HH.W21.600S恒溫水浴箱。

1.3方 法

把確診為新生兒溶血病的99例標(biāo)本根據(jù)不同就檢時(shí)間段分為A～I(xiàn)共9組，0～0.5 h為A組，0.5～1.0 h為B組，1.0～2.0 h為C組，2.0～12.0 h為D組，12.0～24.0 h為E組，24.0～48.0 h為F組，48.0～72.0 h為G組，72.0～96.0 h為H組，96.0～168.0 h為I組。各組再嚴(yán)格按照操作規(guī)程分別進(jìn)行如下檢測(cè)：

1.3.1膽紅素測(cè)定

采用重氮鹽法，按試劑盒操作說(shuō)明書操作。

1.3.2母嬰血型測(cè)定

以試管法進(jìn)行產(chǎn)婦血型正反定型，新生兒正定型。

1.3.3直接抗人球蛋白試驗(yàn)

將患兒紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌2次，配成2%紅細(xì)胞生理鹽水懸液，取小試管2只，分別加入2%紅細(xì)胞懸液1滴，其中一管加入廣譜抗人球蛋白試劑1滴，另一管加入鹽水1滴?；靹蚝罅⒓匆? 000 r/min離心15秒觀察結(jié)果。在顯微鏡下若有3個(gè)或4個(gè)以上紅細(xì)胞的凝集均勻分布在游離的細(xì)胞中間，則為陽(yáng)性，無(wú)凝集則為陰性。若鹽水管出現(xiàn)凝集則說(shuō)明患兒紅細(xì)胞本身有自凝現(xiàn)象，試驗(yàn)結(jié)果無(wú)參考意義。

1.3.4紅細(xì)胞抗體熱放散試驗(yàn)

將患兒紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3到4次，取壓積紅細(xì)胞1 m，加等量生理鹽水置56 ℃水浴中不斷振搖7～8 min，取出后置于盛有56 ℃熱水的離心管中，立即以2 000 r/min離心3 min，取上層釋放液，分3管分別加入A、B、O型5%紅細(xì)胞懸液1滴，置37 ℃致敏30 min，取出后生理鹽水洗滌3次，加入廣譜抗人球蛋白試劑1滴，以3 000 r/min離心15秒觀察結(jié)果。

1.3.5游離抗體測(cè)定實(shí)驗(yàn)

取小試管3只，各加入患兒血清2滴，再分別加入5% A、B、O型紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻后37 ℃致敏30 min，取出后生理鹽水洗滌3次，加入廣譜抗人球蛋白試劑1滴，以3 000 r/min離心15秒觀察結(jié)果。

1.4ABO血型HDN的判定

根據(jù)直接抗人球蛋白試驗(yàn)(改良法)、釋放試驗(yàn)和游離抗體測(cè)定實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性[2]。

1.5高膽紅素血癥的標(biāo)準(zhǔn)

(1)24 h>103 μmol/L，(2)48 h>154 μmol/L，(3)3 d以上>220.6 μmol/L；以間接膽紅素為主[3]。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

各組患兒高膽紅素血癥發(fā)生率的比較均選Pearson卡方檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)不同就檢日期的高膽紅素血癥發(fā)生率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1ABO-HDN 3項(xiàng)試驗(yàn)反應(yīng)關(guān)系

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示：直抗陰性、游離和釋放試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性的百分?jǐn)?shù)為42.42%(42/99)；血清學(xué)三項(xiàng)指標(biāo)均陽(yáng)性約占32.32%(32/99)；只有釋放試驗(yàn)為陽(yáng)性占20.20%(20/99)；游離陰性、直抗和釋放陽(yáng)性約占3.03%(3/99)；只有游離試驗(yàn)為陽(yáng)性約占2.02%(2/99)。通過(guò)上述數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)新生兒溶血病的三項(xiàng)試驗(yàn)中，熱抗體放散實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率達(dá)到97.98%，游離抗體實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為76.74%，直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性占比只為35.35%，并且釋放試驗(yàn)與游離、直抗試驗(yàn)陽(yáng)性率比較均有顯著的差別(P<0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2送檢標(biāo)本各時(shí)間段與ABO-HDN陽(yáng)性率的分析

通過(guò)對(duì)99例新生兒溶血病患兒標(biāo)本不同送檢時(shí)間的HDN陽(yáng)性率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)可知：A組的陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)為0，陽(yáng)性率0%，隨著就檢時(shí)間段增加，其HDN陽(yáng)性率大致逐漸增高，I組的HDN陽(yáng)性率最高為81.82%。A組的陽(yáng)性率與B～I(xiàn)組各組的陽(yáng)性率之間存在顯著的差異(P<0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表 1 送檢標(biāo)本各時(shí)間段例數(shù)及高膽紅素血癥陽(yáng)性率

與B～I(xiàn)組比較，*P<0.05

3 討 論

新生兒溶血病系因母嬰血型不合而產(chǎn)生同族血型的免疫性溶血,在我國(guó)以ABO血型不合多見，是引起HDN的主要原因，也是發(fā)生高膽紅素血癥的常見原因，約占20%。主要發(fā)生在母親為O型血、胎兒為A型或B型血，其次是Rh血型不合[4]。ABO-HDN往往只有出現(xiàn)黃疸、核黃疸、溶血性貧血等典型臨床表現(xiàn)時(shí)才得到臨床確診，但此時(shí)的病情已經(jīng)開始惡化，臨床治療十分棘手，嚴(yán)重影響治療效果以及新生兒智力發(fā)育不全等后遺癥，給我國(guó)新生兒健康造成巨大威脅。因此，在ABO-HDN患兒出現(xiàn)黃疸、溶血、核黃疸等嚴(yán)重表現(xiàn)之前，進(jìn)行有效的ABO-HDN 3項(xiàng)血清學(xué)檢測(cè)是十分必要的，更有助于減少臨床誤診率及進(jìn)行臨床干預(yù)，以降低新生患兒病死率，對(duì)我國(guó)優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質(zhì)是很有必要性的。

ABO-HDN常見于O型母親所產(chǎn)的A或B型新生兒，并且50%發(fā)生在第一胎[5]，由于患兒可以出現(xiàn)不同程度的高膽紅素血癥，嚴(yán)重者可引起新生兒神經(jīng)系統(tǒng)不可逆損傷等后遺癥。目前臨床上常對(duì)懷疑為ABO-HDN患兒進(jìn)行血型血清學(xué)3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，血清學(xué)3項(xiàng)試驗(yàn)包括：直接抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)及抗體釋放試驗(yàn)，主要是檢測(cè)新生兒紅細(xì)胞上的免疫抗體。通過(guò)上述數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，新生兒溶血病的3項(xiàng)試驗(yàn)中，熱抗體放散實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率達(dá)到97.98%，游離抗體實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為76.74%，直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性占比只為35.35%，并且釋放試驗(yàn)與游離、直抗試驗(yàn)陽(yáng)性率比較均有顯著的差別，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，臨床上診斷ABO-HDN的3項(xiàng)血清學(xué)試驗(yàn)中，將直抗或釋放試驗(yàn)陽(yáng)性者，即可診斷為新生兒ABO溶血病，而只是游離試驗(yàn)陽(yáng)性者只能作為參考，不能作為診斷指標(biāo)[6]；熱抗體釋放試驗(yàn)是最敏感的指標(biāo)，對(duì)早期確診ABO-HDN疑似病具有重要臨床意義。此外，在本次試驗(yàn)中有些就檢標(biāo)本的3項(xiàng)血清學(xué)檢測(cè)中雖然只是釋放(20.20%)或者游離抗體(2.02%)試驗(yàn)為陽(yáng)性，不能直接確診為新生兒溶血病，但也并不能說(shuō)明新生患兒的紅細(xì)胞表面沒(méi)有結(jié)合類抗體，有可能是由于抗原發(fā)育不完全，反應(yīng)強(qiáng)度不及成人，其表面抗原部位數(shù)目只占成人的25%～50%[7]，加之反應(yīng)時(shí)間相對(duì)不足等原因，因此在反應(yīng)靈敏性和強(qiáng)度(抗原抗體結(jié)合率)都與成人有顯著差別。不過(guò)在臨床實(shí)踐中熱抗體放散實(shí)驗(yàn)所用時(shí)間較長(zhǎng)，可先進(jìn)行相對(duì)需要時(shí)間較短的直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)和游離抗體實(shí)驗(yàn)，若出現(xiàn)陽(yáng)性就向臨床初步報(bào)告危急值，之后再進(jìn)行熱抗體釋放試驗(yàn)，可為臨床盡早治療爭(zhēng)取時(shí)間，但直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)和游離抗體實(shí)驗(yàn)為陰性就必須進(jìn)行熱抗體釋放試驗(yàn)才能向臨床報(bào)告。此外，有研究表明，孕婦懷孕期間抗體滴度的增加與新生兒高膽紅素血癥有非常顯著的相關(guān)性[8]，孕婦在產(chǎn)前進(jìn)行抗體滴度測(cè)定對(duì)預(yù)防新生兒溶血病也具有重要意義。因此，新生兒溶血3項(xiàng)試驗(yàn)應(yīng)與抗體滴度有機(jī)結(jié)合，提高新生兒溶血病的診斷率。

由于母嬰ABO血型不合引起新生兒紅細(xì)胞表面免疫抗體包被，隨之在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)被巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞釋放的溶酶體酶溶解而破壞，產(chǎn)生高膽紅素血癥而表現(xiàn)出黃疸、溶血性貧血病情的嚴(yán)重性不僅與血型(ABO)不合有關(guān)，也與新生兒溶血病發(fā)病時(shí)間有關(guān)。由表1可知：隨著就檢時(shí)間的增加，高膽紅素血癥陽(yáng)性率也在增加(0%～81.82%)，與有關(guān)報(bào)道不一致[9]。并且A組與B～I(xiàn)各組的陽(yáng)性率之間存在顯著的差異(P<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雖然A組患兒沒(méi)有出現(xiàn)高膽紅素血癥，達(dá)不到ABO-HDN典型臨床表現(xiàn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，但血清學(xué)3項(xiàng)試驗(yàn)最終確診A組均為ABO-HDN患兒，也與后期的臨床診斷相符合。此外，從表1中發(fā)現(xiàn)D組陽(yáng)性率(25%)和H組陽(yáng)性率(75.0%)分別低于C組(33.3%)、G組(76.19%)，這可能是由于本次研究收集標(biāo)本容量過(guò)少，或者是由于紅細(xì)胞表面的溶血性抗體數(shù)量偏少所造成的。從表1中可發(fā)現(xiàn)ABO-HDN患兒血中的膽紅素濃度高峰期是在出生后第1～3天，而后又隨就檢時(shí)間的增加呈下降趨勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)相一致[10]，而臨床實(shí)際送檢時(shí)間段也主要集中在患兒出生后0～72 h內(nèi)(68例、68.68%)與其相吻合。因此，臨床上應(yīng)該在出現(xiàn)病理性黃疸之前進(jìn)行新生兒溶血病3項(xiàng)血清學(xué)檢查，其中熱抗體釋放試驗(yàn)是診斷新生兒溶血病最敏感的指標(biāo)，并且在出生后30 min內(nèi)進(jìn)行血清學(xué)檢查的臨床意義最大，這也與有文獻(xiàn)研究結(jié)論“血清學(xué)檢測(cè)的陽(yáng)性率受就檢時(shí)間的影響較大，就檢時(shí)間越早檢出率越高[2]”相吻合。但從本次報(bào)告的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，HDN 3項(xiàng)試驗(yàn)陽(yáng)性模式與送檢時(shí)間相關(guān)性并不明顯，可能與母親溶血抗體在宮內(nèi)就已經(jīng)產(chǎn)生并與患兒紅細(xì)胞結(jié)合，且發(fā)生時(shí)間個(gè)體差異較大。同時(shí)有文獻(xiàn)也提到3項(xiàng)試驗(yàn)反應(yīng)強(qiáng)度與溶血程度相關(guān)性也不大，這是因?yàn)镠DN的嚴(yán)重程度還與其他多種因素有關(guān)[1]，故難以從反應(yīng)模式上推斷整個(gè)ABO-HDN病程所處階段。從本組病倒后期臨床治療得知，76.77%的患兒血漿中尚有富余抗體可以繼續(xù)致敏紅細(xì)胞，因此加重高膽紅素血癥癥狀，有必要盡早治療。

綜上所述，對(duì)于ABO-HDN疑似患兒臨床上應(yīng)該在出現(xiàn)病理性黃疸、溶血性貧血等典型臨床癥狀之前進(jìn)行新生兒溶血病3項(xiàng)血清學(xué)檢查，其中熱抗體釋放試驗(yàn)是診斷新生兒溶血病最敏感的指標(biāo)，就檢時(shí)間越早，越有利于ABO-HDN早期確診，出生后半小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血清學(xué)檢查的臨床意義最大，對(duì)減少誤診漏診、提高早期確診率、臨床早期干預(yù)及治療都具有重要意義。

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Theanalysisof99casesofneonatalABOhemolyticdiseaseserologicaltest

KANG kai,LU Xing-bing,LIAN Zheng-qiu

(Department of Blood Transfusion,Chengdu third People’s Hospital,Chengdu,Sichuan,Province,610000,China)

ObjectiveTo investigate the relationship of ABO HDN serologic test results to high blood bilirubin,through the analysis of high blood bilirubin of ABO hemolytic disease of newborn (ABO HDN) and serological test results,as well as a systemic review evaluation serological detection diagnosis method.MethodsThe related serological tests and serum bilirubin from 99 cases diagnosed with ABO HDN were detected at the same time.ResultsResults showed that 99 cases of ABO hemolytic disease of newborn hot antibodies in children with radiation experiments positive rate reached up to 97.98%,free antibody test positive rate was 76.74%;by contrast the direct anti globulin test positive accounted for only 35.35%;Specimens of 30 minutes after birth to check high bilirubin levels,0 cases,the incidence was 0%.With the prolonging of the test time,the higher incidence of newborn children ABO hemolytic disease,the higher blood bilirubin positive rate.Moreover,the high bilirubin positive rate of ABO HDN group A compared with group B～I(xiàn) were significant differences statistically (P<0.05).ConclusionThree serologic test for neonatal hemolysis disease should be carried out before pathologic jaundice was observed in the clinical.Hot antibody release test was the most sensitive indicators for diagnosis of hemolytic disease of newborn,and serological examination within half an hour after birth is the most significantly in the clinical.

Newborns hemolytic disease;ABO blood type disagreement;Serological diagnosis; Bilirubin levels

1673-2995(2013)04-0244-04

R722.1

A

康 凱(1978-)，男(漢族)，主管技師，本科.

2013-03-15)

新生兒溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)是因母體內(nèi)存在與其胎兒紅細(xì)胞不合的IgG血型抗體引起的胎兒或新生兒同種免疫性溶血。在母嬰血型不合引起的HDN中，以ABO血型系統(tǒng)最為常見，即ABO-HDN，占新生兒溶血的85.3%[1]，多發(fā)于O型孕婦所生的非O型嬰兒，這與O型母親體內(nèi)含有不同滴度的抗-A(B)IgG抗體有關(guān)。由于母親體內(nèi)缺乏胎兒的紅細(xì)胞血型抗原，當(dāng)胎兒紅細(xì)胞通過(guò)胎盤進(jìn)入母體循環(huán)后，使母體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫抗體，此抗體又經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，并與胎兒紅細(xì)胞膜表面的相應(yīng)抗原結(jié)合，這些被免疫抗體包被的紅細(xì)胞隨之在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)被巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞釋放的溶酶體酶溶解而破壞，產(chǎn)生高膽紅素血癥而表現(xiàn)出黃疸、溶血性貧血，嚴(yán)重的可導(dǎo)致流產(chǎn)、新生兒生理缺陷或死亡，少數(shù)病例新生兒出生后出現(xiàn)智力發(fā)育不全等后遺癥。如何在新生兒溶血病患者出現(xiàn)高端紅素血癥之前確診將具有重要的臨床意義。本研究將2011年11月18日至2012年11月18日某院產(chǎn)房或新生兒室因母嬰ABO血型不合送檢且“3項(xiàng)試驗(yàn)”至少1項(xiàng)為陽(yáng)性的99例確診的ABO-HDN患兒血清學(xué)檢測(cè)，結(jié)果分析如下。