GP73聯(lián)合AFP、VEGF檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷意義

郝鋒

GP73聯(lián)合AFP、VEGF檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷意義

郝鋒

目的探討高爾基體糖蛋白73(GP73)、甲胎蛋白(AFP)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷意義。方法用化學(xué)發(fā)光免疫分析法、ELISA法和全自動(dòng)生化分析儀分別檢測(cè)100例原發(fā)性肝癌和50例健康對(duì)照患者GP73、AFP和VEGF含量，分析GP73聯(lián)合AFP、VEGF檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷意義。結(jié)果健康對(duì)照組GP73、AFP和VEGF含量明顯低于原發(fā)性肝癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；單獨(dú)檢測(cè)GP73、AFP和VEGF對(duì)診斷原發(fā)性肝癌的特異性分別為93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分別為62.5%、67.2%、72.3%，聯(lián)合檢測(cè)GP73、AFP和VEGF可提高診斷原發(fā)性肝癌的特異性和敏感性，分別為100%和98.9%，單項(xiàng)檢測(cè)的特異性和敏感性高于聯(lián)合檢測(cè)(P<0.05)。結(jié)論聯(lián)合檢測(cè)GP73、AFP和VEGF作為診斷原發(fā)性肝癌的重要指標(biāo)，可提高原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值。

GP73；AFP；VEGF；原發(fā)性肝癌

原發(fā)性肝癌(HCC)是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康與生命的疾病，其發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素是肝炎病毒感染[1]。近年來(lái)，大量文獻(xiàn)報(bào)道GP73可能成為肝癌診斷的重要標(biāo)志物[2]，但聯(lián)合檢測(cè)GP73、AFP和VEGF診斷HCC的報(bào)道較少。本次研究聯(lián)合檢測(cè)HCC患者血清中GP73、AFP和VEGF，同時(shí)同步檢測(cè)50例健康對(duì)照組的GP73、AFP和VEGF，并進(jìn)行對(duì)比分析，從而探討GP73、AFP和VEGF對(duì)HCC的診斷價(jià)值，總結(jié)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2011年6月至2012年11月收治的100例原發(fā)性肝癌患者為研究對(duì)象，其中男65例，女35例，年齡18～70歲，平均(38±9.6)歲；根據(jù)臨床表現(xiàn)、CT、B超、AFP定量等確診，部分病例經(jīng)MRI和病理切片進(jìn)一步診斷。對(duì)照組50例，男30例，女20例，年齡21～71歲，平均(39±10.6)歲，均為同期健康體檢者。 兩組患者的一般資料(年齡、性別等)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

1.2材料

1.2.1儀器 AXSYMPLUS(美國(guó)雅培)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀、奧地利HT2型酶標(biāo)儀。試劑：GP73 測(cè)定試劑盒購(gòu)自碧云天生物公司；AFP測(cè)定試劑盒為AXSYM全自動(dòng)免疫分析儀配套原裝進(jìn)口試劑；VEGF測(cè)定試劑盒購(gòu)自晶美生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司。

1.2.2標(biāo)本采集 原發(fā)性肝癌組：空腹抽取靜脈血2 ml，離心3000rpm/min，分離血清，置-20℃冰箱保存用于檢測(cè)GP73、VEGF，其余用于AFP檢測(cè)。健康對(duì)照組：早晨空腹抽取靜脈血2 ml，3000rpm/min離心分離血清檢測(cè)GP73、AFP和VEGF。

1.2.3方法 GP73蛋白含量測(cè)定采用Western印跡；AFP檢測(cè)采用全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；VEGF檢測(cè)采用ELISA法。

2 結(jié)果

2.1兩組血清GP73、AFP和VEGF水平變化 結(jié)果顯示健康對(duì)照組GP73、AFP和VEGF含量明顯低于原發(fā)性肝癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兩組GP73、AFP和VEGF水平變化

2.2各腫瘤標(biāo)志物單項(xiàng)和聯(lián)合檢測(cè)的特異性及敏感性 單獨(dú)檢測(cè)GP73、AFP和VEGF對(duì)診斷原發(fā)性肝癌的特異性分別為93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分別為62.5%、67.2%、72.3%，聯(lián)合檢測(cè)GP73、AFP和VEGF可提高診斷原發(fā)性肝癌的特異性和敏感性，分別為100%和98.9%，單項(xiàng)檢測(cè)的特異性和敏感性高于聯(lián)合檢測(cè)(P<0.05)。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 GP73、AFP和VEGF對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值(%)

3 討論

近年來(lái)，血清腫瘤標(biāo)志物越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于腫瘤患者的檢測(cè)，作為一種無(wú)創(chuàng)性診斷，同步檢測(cè)多項(xiàng)標(biāo)志物可使陽(yáng)性診斷率提高，并能早期及時(shí)診斷[3]。Kladney等[4]人從巨細(xì)胞肝炎患者中篩選出GP73，它是一種跨膜糖蛋白，屬高爾基體Ⅱ型，全長(zhǎng)3042 bp，基因位于9號(hào)染色體長(zhǎng)臂，定位于高爾基體順面，內(nèi)含1個(gè)開(kāi)放閱讀框，大小為1200 bp，可進(jìn)行400個(gè)氨基酸的編碼，包括胞外、跨膜和胞內(nèi)3個(gè)區(qū)域，胞外段為N-末端，是發(fā)揮作用的主要功能區(qū)。因在WB上相對(duì)分子質(zhì)量顯示為7300而得名，又稱(chēng)GOLM1或GOLPH2。

AFP是一種糖原蛋白，目前人們公認(rèn)血清AFP的檢測(cè)是診斷HCC的重要手段。在哺乳動(dòng)物胚胎期AFP由卵黃囊細(xì)胞和肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞、胃腸道黏膜細(xì)胞合成。AFP是檢測(cè)原發(fā)性肝癌的特異性生化指標(biāo)，可大大提高肝癌的診斷準(zhǔn)確率。AFP由HCC患者的肝癌細(xì)胞產(chǎn)生和分泌[5]，先滲入癌周?chē)M織再進(jìn)入血液循環(huán)，AFP在血液中特異性強(qiáng)且含量極穩(wěn)定。由于胚胎來(lái)源AFP與人肝臟和人血清來(lái)源的AFP之間存在大量共同的免疫和生化特征，因此，AFP陽(yáng)性患者極易與其他妊娠、慢性肝病或腫瘤發(fā)生重疊現(xiàn)象，所以尋找具有互補(bǔ)診斷意義且特異性強(qiáng)的檢測(cè)指標(biāo)顯得更為重要。AFP近30%～40%為陰性，陽(yáng)性檢出率為60%～70%，同時(shí)也常發(fā)現(xiàn)假陽(yáng)性，如肝硬化、慢性肝炎、胚胎癌、胃癌等都伴有AFP一過(guò)性增高，從一定程度上使原發(fā)性肝癌的診斷更為困難。

多種血管內(nèi)皮細(xì)胞增生因子由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生和分泌，其中作用最強(qiáng)的是VEGF，它是體內(nèi)重要的血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞分裂的促進(jìn)因子，腫瘤預(yù)后及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)和VEGF的高表達(dá)密切相關(guān)[6]。Torimura等[7]用原位雜交技術(shù)及免疫組化顯示：正常肝組織內(nèi)VEGF mRNA及蛋白的表達(dá)比肝癌組織低很多，腫瘤患者的VEGF與血管的分化程度密切相關(guān)。在肝癌形成過(guò)程中，多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子和生長(zhǎng)因子，可促進(jìn)VEGF的表達(dá)并結(jié)合其特異性受體(VEGFR)，從而充分發(fā)揮生物學(xué)功能，當(dāng)發(fā)生肝癌后，會(huì)破壞血管生成抑制因子和血管生成因子調(diào)控的穩(wěn)定作用，使肝癌細(xì)胞的免疫應(yīng)答受到嚴(yán)重影響機(jī)體。

有研究表明，GP73蛋白的表達(dá)在肝癌患者的肝組織中顯著升高，且與廣泛的纖維化程度和肝臟炎癥一致，它是一個(gè)頗具潛力的、新的腫瘤標(biāo)志物，與腫瘤的產(chǎn)生過(guò)程、預(yù)后和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。為使肝癌患者診斷的陽(yáng)性率提高，許多學(xué)者認(rèn)為血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌患者的診斷有明顯的提高作用[8]。本次對(duì)100例原發(fā)性肝癌患者進(jìn)行GP73、AFP和VEGF等腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，健康對(duì)照組GP73、AFP和VEGF含量明顯低于原發(fā)性肝癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。單獨(dú)檢測(cè)GP73、AFP和VEGF對(duì)診斷原發(fā)性肝癌的特異性分別為93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分別為62.5%、67.2%、72.3%，聯(lián)合檢測(cè)GP73、AFP和VEGF可提高診斷原發(fā)性肝癌的特異性和敏感性，分別為100%和98.9%，單項(xiàng)檢測(cè)的特異性和敏感性高于聯(lián)合檢測(cè)(P<0.05)。

總之，血清腫瘤標(biāo)志物均具有廣譜性，診斷HCC時(shí)缺乏高度的特異性，進(jìn)行單項(xiàng)檢測(cè)時(shí)，易棄漏陽(yáng)性患者，陽(yáng)性率不高，而聯(lián)合檢測(cè)三項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物時(shí)，陽(yáng)性率達(dá)98.9%。聯(lián)合檢測(cè)GP73、AFP和VEGF作為診斷原發(fā)性肝癌的重要指標(biāo)，可互為印證，互為補(bǔ)充，從而提高原發(fā)性肝癌的診斷率。

[1] 馬桂英，劉 娟，姚紅昌，等.多種腫瘤標(biāo)志物對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值.臨床內(nèi)科雜志，2001，18(2)：147-149.

[2] 王 洋，余 憲，張 旭，等.AFP、AFU、GGT、ALP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2003，10(1)： 23-24.

[3] Wright LM， Huster D， Lutsenko S， et al. Hepatocyte GP73 expression in Wilson disease. J Hepatol，2009，51：557-564.

[4] Kladney KD， Bulla GA， Guo L， et al. GP73，a novel Golgilocalized protein upregulated by viral infegtion.Gene，2000，249：53-65.

[5] Marrero JA， Romano PR， Nikolaeva O， et al. GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma. J Hepatol，2005，43：1007-1012.

[6] 毛一雷，楊華瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清標(biāo)記物GP73在肝癌診斷中的初步研究.中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88(14)：948-951.

[7] Cabibbo G， Craxi A. Epidemiology,risk factors and surveillance of hepatocellular carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci，2010，14(4)：352-355.

[8] 趙發(fā)林，候艷，李康.臨床試驗(yàn)評(píng)價(jià)的ROC分析方法.中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)，2007，24(4)：349-35 1.

GP73jointAFP,VEGFdiagnosticsignificanceofthedetectionofprimarylivercancer

HAOFeng.

DepartmentofBloodTransfusion,FirstPeople’sHospitalofShangqiuCity,Shangqiu, 476000,China

ObjectiveTo explore the Golgi glycoprotein 73 (of GP73), alpha-fetoprotein (AFP) and vascular endothelial growth factor (VEGF) and diagnostic significance of combined detection of primary liver cancer.MethodsChemiluminescence immunoassay, ELISA and automatic biochemical analyzer were used to detecte 100 cases of primary liver cancer and 50 healthy control patients of GP73, AFP and VEGF content GP73 joint AFP, VEGF detection of primary liver cancer the diagnostic significance.ResultsThe healthy control group of GP73, AFP and VEGF content was significantly lower than primary liver cancer group, the difference was statistically significant (P<0.05),separate detection of GP73 specificity of AFP and VEGF in the diagnosis of primary liver cancer 93.2%, 95.6% and 92.3%, sensitivity of 62.5%, 67.2%, 72.3%, the joint detection GP73, AFP and VEGF may improve the specificity and sensitivity for the diagnosis of primary liver cancer, respectively, 100% and 98.9 %, the specificity and sensitivity of the individual tests is higher than the joint detection (P<0.05).ConclusionThe combined detection of GP73, AFP and VEGF as an important indicator for the diagnosis of primary liver cancer, can improve the diagnostic value of primary liver cancer.

GP73；AFP；VEGF；Primary liver cancer

476000 河南省商丘市第一人民醫(yī)院輸血科