激肽釋放酶14在卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義

顏秋梅 李巧云 聞立紅

激肽釋放酶14在卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義

顏秋梅 李巧云 聞立紅

目的探討激肽釋放酶14(kallikreinl4)在卵巢癌組織的表達(dá)及臨床意義。方法應(yīng)用SP和ELISA法檢測(cè)不同卵巢患者KLK14蛋白的表達(dá)和KLK14血清學(xué)的濃度。結(jié)果卵巢癌組KLK14蛋白表達(dá)陽(yáng)性率/血清學(xué)濃度明顯高于卵巢良性上皮腫瘤組和正常卵巢組。KLKl4蛋白表達(dá)與卵巢癌患者的臨床分期，組織學(xué)分級(jí)有關(guān)。結(jié)論KLKl4過表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生、侵襲相關(guān)，提示其可能成為卵巢癌的標(biāo)志物。

腫瘤標(biāo)志物；卵巢上皮性惡性腫瘤；KLKl4；SP；ELISA

激肽釋放酶14(human kallikrein14)KLK14是人類激肽釋放酶家族的1個(gè)成員，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)它在卵巢癌組織中高度表達(dá)與卵巢癌的預(yù)后相關(guān)，提示其可能成為卵巢癌的標(biāo)志物[1]。卵巢癌患者就診時(shí)已處于晚期階段，至今缺乏有效的診斷、監(jiān)測(cè)，尋找能用于卵巢癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物十分必要。

本試驗(yàn)應(yīng)用SP和ELISA法檢測(cè)了卵巢上皮性癌、良性上皮腫瘤、正常卵巢中KLKl4的蛋白表達(dá)情況及不同卵巢組血清中KLK14 的濃度變化，分析KLKl4蛋白在不同卵巢組中的表達(dá)及其與卵巢癌的臨床病理之間的關(guān)系，探討KLK14在卵巢癌發(fā)生侵襲中的作用，為卵巢癌的早期診斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 標(biāo)本取自2004年至2011年我院卵巢腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本65例。良性上皮腫瘤24例(漿液性囊腺瘤15例、粘液性囊腺瘤9例)，上皮性卵巢癌41例(漿液性囊腺癌30例、粘液性囊腺癌11例)，上皮性卵巢癌為首發(fā)病例，年齡32～73歲，平均年齡50.5歲，3個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用任何激素治療及化放療，同期取子宮切除術(shù)中正常卵巢10例，手術(shù)病理分期1988(FIGO)：Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期21例，Ⅳ期6例。高分化10例，中分化12例，低分化19 例。

1.2方法

1.2.1SP：PBS代替一抗為陰性對(duì)照，已知KLKl4蛋白陽(yáng)性的乳腺癌石蠟切片為陽(yáng)性對(duì)照。胞漿有棕色顆粒者為KLKl4陽(yáng)性細(xì)胞，光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比，取5個(gè)視野的算術(shù)平均值。①根據(jù)顯色細(xì)胞的比例計(jì)分：陽(yáng)性細(xì)胞為0%計(jì)0分，陽(yáng)性細(xì)胞<10%計(jì)1分，陽(yáng)性細(xì)胞10%～50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞51%～80%計(jì)3分；陽(yáng)性細(xì)胞80%計(jì)4分。②根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：0分癌細(xì)胞無(wú)著色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為黃褐色。積分=染色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，積分范圍0～12分，>4分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.2.2ELASA：血清標(biāo)本取自術(shù)前2 d空腹肘靜脈全血3 ml，置于未加抗凝劑的試管中， KLKl4測(cè)定根據(jù)說(shuō)明書向被包有特異性單抗的微孔中準(zhǔn)確加入50 μl緩沖液再加50 μl標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，室溫震蕩孵育1 h，再加100 μl曲生物素標(biāo)記的第二抗體溶液，室溫震蕩孵育1 h，洗滌后加入酶結(jié)合物，室溫震蕩孵育30 min后洗滌，加底物液室溫孵育30 min,加終止液后，在450nm處測(cè)其吸光度。然后根據(jù)所測(cè)血清標(biāo)本的吸光度求出其KLKl4濃度。以正常對(duì)照組的均值±1.9個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，即95%可信區(qū)間值上限值作為KLKl4陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 11.0，計(jì)量資料比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ2。以P<0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1kLK14的表達(dá)KLK14主要表達(dá)卵巢上皮組織細(xì)胞的細(xì)胞漿，卵巢組織中的KLK14的陽(yáng)性表達(dá)見表1。

2.2卵巢癌KLK14 陽(yáng)性表達(dá)率與臨床病理的關(guān)系，見表2。

2.3不同卵巢組血清學(xué)濃度表達(dá)，見表3。

表1 KLK14蛋白在各卵巢組織中表達(dá)情況(例，%)

表2 KLKl4蛋白的表達(dá)與卵巢癌病理關(guān)系(例， %)

表3 卵巢癌、良性上皮卵巢腫瘤、正常婦女血清KLK14的濃度值例)

3 討論

KLK14 是2012年由Youself GM等利用候選基因位置克隆法定位出的一段序列，是激肽釋放酶基因家族成員，位于19q13.3～19q13.4 染色體上，全長(zhǎng)6349bp，在激素相關(guān)性組織組織中高表達(dá)，如乳腺、前列腺、睪丸等器官的腫瘤組織。

目前發(fā)現(xiàn)腫瘤侵襲對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解是一個(gè)重要步驟，其中需要多種降解酶，尤其腫瘤細(xì)胞分泌的蛋白酶能降解細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)和先決條件，活化后的KLK14具有雙重活性即胰島素樣糜蛋白酶活性，能夠有效水解層黏連蛋白5和膠原質(zhì)IV等細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜，穿透細(xì)胞外基質(zhì)，進(jìn)而促使腫瘤細(xì)胞侵襲臨近正常組織或轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處發(fā)生惡性增殖，因而，KLKl4在惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，原發(fā)惡性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生分泌的蛋白酶量，從側(cè)面可能反映了腫瘤細(xì)胞自身的侵襲與轉(zhuǎn)移能力，檢測(cè)KLK14蛋白的表達(dá)，可能有助于診斷和監(jiān)測(cè)卵巢癌的侵襲與轉(zhuǎn)移[3-5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，KLK14 主要表達(dá)于卵巢上皮組織細(xì)胞的細(xì)胞漿，正常卵巢，卵巢上皮良性腫瘤及卵巢癌組織中，KLK14 陽(yáng)性表達(dá)率分別為20%(2/10)，20.8%(5/24)，63.4%(25/41)，KLK14在早期卵巢癌(Ⅰ、Ⅱ期)組織中表達(dá)陽(yáng)性率為42.8%(6/14)，低于晚期卵巢癌(Ⅲ、Ⅳ期)組織中表達(dá)陽(yáng)性率70.3%(19/27)；說(shuō)明隨著卵巢癌的臨床進(jìn)展，KLK14表達(dá)水平隨之升高。本研究同時(shí)檢測(cè)了同期手術(shù)正常卵巢，卵巢上皮性良性卵巢腫瘤及卵巢癌患者的血清KLK14 水平，結(jié)果卵巢癌組血清KLK14濃度明顯升高,血清學(xué)上與免疫組化結(jié)果一致，均提示KLK14 蛋白與卵巢癌的惡性行為關(guān)系密切。有望成為新的腫瘤標(biāo)記物。

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Kallikrein14inovariancancertissuesanditsclinicalsignificance

YANQiu-mei,LIQiao-yun,WENLi-hong.

ObstetricsandGynecology,TheFifthAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Henan450052,China

ObjectiveTo investigate the effect of kallikrein 14 (kallikreinl4) expression in ovarian carcinoma and its clinical significance.MethodsThe concentration of different ovarian patients with KLK14 protein was detected by SP and ELISA expression and KLK14 serology.ResultsThe expression of ovarian cancer group the positive rate of KLK14 protein in serum concentrations were significantly higher than benign epithelial ovarian tumor and normal ovarian group. The expression of KLKl4 protein in ovarian cancer patients with clinical stages, histological classification,ConclusionOverexpression of KLKl4 and ovarian cancer,invasiveness,suggesting that it may become a marker in ovarian cancer.

Tumor marker; Epithelial ovarian cancer; KLKl4; SP; ELISA

450052 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科