食物殘?jiān)黃TR分型破案1例

劉亞舉，蘇偉民

（1.許昌市公安局 刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南 許昌 461000；2.長(zhǎng)葛市公安局 刑偵大隊(duì)，河南 長(zhǎng)葛461500）

1 案例

1.1 案情簡(jiǎn)要

2012年6月下旬至9月上旬，某轄區(qū)內(nèi)先后發(fā)生多起入室盜竊案，受害人早上離家外出務(wù)工，晚上回家時(shí)發(fā)現(xiàn)家中被盜?？彬?yàn)人員在不同的現(xiàn)場(chǎng)分別提取到1.7cm×2.1cm咀嚼過(guò)的油條食物殘?jiān)?份和咬嗑的瓜籽殼11粒，所有物證均在案發(fā)當(dāng)天提取，第二天送至DNA室，受理后立即進(jìn)行DNA檢驗(yàn)。

1.2 DNA檢驗(yàn)及結(jié)果

將油條食物殘?jiān)骄湃雰芍?.5mL離心管中，編為1號(hào)、2號(hào)檢材；取8粒瓜籽殼也平均放入兩支1.5mL離心管中，編為3號(hào)、4號(hào)檢材。檢材采用英國(guó)LGC公司AGOWA sbeadex?磁珠法法醫(yī)試劑盒進(jìn)行手動(dòng)DNA提取，具體步驟如下：（1）細(xì)胞裂解：在離心管內(nèi)加入200μL裂解液FN和9μL PK（試劑盒自帶，干粉狀，加9mL純水溶解混勻），漩渦震蕩5S，65℃保溫 30min。（2）磁珠結(jié)合 DNA：離心后取 190μL 上清液于新的離心管，同時(shí)加入380μL結(jié)合液FN和10μL磁珠，充分混勻溶液，室溫放置2min（期間震蕩數(shù)次），將離心管置于磁力架上，1min后吸去液體。（3）洗滌：加300μL洗液FN1，震蕩混勻，室溫放置5min（期間震蕩數(shù)次），置于磁力架上，1min后吸去液體；再加300μL洗液FN2，重復(fù)上述步驟；最后加300μL純水，再重復(fù)上述步驟。（4）洗脫DNA：加60μL洗脫液FN，充分混勻溶液，62℃溫浴10min（期間震蕩數(shù)次），震蕩后速置于磁力架上，3min后吸取50μL DNA溶液備檢。

按照Identifiler試劑盒說(shuō)明書(shū)配制PCR反應(yīng)液，其中取反應(yīng)液混合物6μL和上述模板DNA4μL在9700型擴(kuò)增儀上標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物在3500XL型遺傳分析儀上檢測(cè)，用GeneMapper IDX軟件進(jìn)行STR分型。結(jié)果顯示，1～4號(hào)檢材均未得到完整STR分型。于是將1號(hào)、2號(hào)油條食物殘?jiān)麯NA溶液合并于Microcon-100柱管中，3號(hào)、4號(hào)瓜籽殼DNA溶液合并于另外一個(gè)Microcon-100柱管中，其中Microcon-100柱管為斜底面，型號(hào)30K。然后在Eppendorf冷凍離心機(jī)上先14 000rpm離心30min，最后再1 000rpm離心10min，分別得到濃縮DNA溶液15μL左右。將濃縮后的DNA溶液仍按上述方法擴(kuò)增檢測(cè)，最終得到完整DNA分型（見(jiàn)圖1）。

1.3 DNA數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)

將STR分型結(jié)果錄入至本市DNA數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)后，與江蘇一現(xiàn)場(chǎng)物證串并，并比中2010年9月安徽省某市檢驗(yàn)入庫(kù)的違法人員姚某（男性，19歲，系本報(bào)道發(fā)案地居民）。抓獲姚某后，供述了上述等多起入室盜竊案件。

2 討論

由于口腔黏膜上皮細(xì)胞具有代謝旺盛、易脫落等特點(diǎn)，在外力作用下可以遺留在相應(yīng)的載體上，當(dāng)承載體和外部接觸后，由于環(huán)境的影響，這些檢材就會(huì)有不同程度的DNA降解和混合大量不同種類(lèi)的抑制劑，導(dǎo)致DNA提取和PCR擴(kuò)增失敗，繼而得不到完整STR分型結(jié)果，給后期的分析帶來(lái)困難，因此去除PCR抑制劑和樣品DNA回收量是成功的關(guān)鍵。

磁珠法核酸純化技術(shù)是利用強(qiáng)永磁體以確保DNA進(jìn)行有效分離，省略了離心和苯酚等有機(jī)溶劑提取步驟。LGC公司AGOWA sbeadex?法醫(yī)試劑盒的磁珠呈咖啡色，顆粒微小，具有小尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，無(wú)沉淀易于分散，其磁粒是被修飾過(guò)的超順性粒子，可以對(duì)小的或大的DNA片段進(jìn)行有效地、高質(zhì)量地純化；非極性的結(jié)合緩沖溶液改變DNA的周?chē)嬖诃h(huán)境，驅(qū)使極性的DNA特異性結(jié)合到極性的磁珠表面，適量的磁珠，偶聯(lián)得到的DNA產(chǎn)量和質(zhì)量高；經(jīng)過(guò)兩種洗液和純水洗滌增強(qiáng)了去除抑制劑的作用，洗滌過(guò)程中無(wú)需干燥即可洗脫，節(jié)省了操作時(shí)間，60μL洗脫液溶解的DNA半定量效果好，并能對(duì)產(chǎn)量進(jìn)行均一化，使下游的擴(kuò)增檢測(cè)得到的STR峰型尖銳清晰、均衡性好，無(wú)非特異性產(chǎn)物。該試劑盒不僅可以手動(dòng)操作，而且也可以在自動(dòng)化設(shè)備上使用[1]，適用于法醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)各類(lèi)檢材。在本案中，為了保證檢材被裂解液充分浸沒(méi)，故將每份檢材分成2份進(jìn)行DNA提取，由于60μL的洗脫體積沒(méi)有得到完整STR分型，于是將每同種檢材的DNA溶液合并，并聯(lián)合使用了斜底面（30K）的 Microcon-100柱[2]，沒(méi)有額外變換DNA溶液成分，只是將多余水分過(guò)濾掉，集中了DNA溶液濃度，從而成功檢出STR分型。

圖1 A為油條食物殘?jiān)黃TR分型，B為咬嗑瓜籽殼STR分型

我國(guó)DNA數(shù)據(jù)庫(kù)高速發(fā)展，庫(kù)容豐富，實(shí)驗(yàn)室間聯(lián)網(wǎng)運(yùn)行，實(shí)現(xiàn)了資源共享，共同發(fā)展。該案的快速偵破也是得益于DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的發(fā)展成果，DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的快速發(fā)展也促進(jìn)著實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法的提高，最終實(shí)現(xiàn)破案效益的最大化。

[1]孫大成，孫善永，姜曜恒，等.應(yīng)用自動(dòng)化工作站批量提取生物檢材 DNA[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（1）：54-55.

[2]顧麗華，董研，張晨，等.濃縮DNA法結(jié)合miniSTR分型技術(shù)檢驗(yàn)微量 DNA[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（5）：361-363.