Pim-1激酶小分子抑制劑的研究進(jìn)展

孫占莉 肖旭華 袁博

（中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥工業(yè)研究院 上海 200437）

原癌基因pim-1是基因pim家族（現(xiàn)發(fā)現(xiàn)的有pim-1、pim-2、pim-3）中的一員，最早是作為莫洛尼小鼠白血病病毒(MoMuLV)的前病毒插入點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)[1]，其編碼的Pim-1激酶屬于鈣/鈣調(diào)蛋白調(diào)節(jié)激酶(calcium/calmodulin-regulated kinase，CAMK)，在多細(xì)胞組織的進(jìn)化過(guò)程中高度保守。pim-2和pim-3是pim家族的另外兩個(gè)成員，他們與pim-1分別具有55%和65%的同源性。

pim-1在調(diào)控細(xì)胞凋亡，分化，增殖以及腫瘤形成等方面發(fā)揮了非常重要的作用。Pim-1激酶能通過(guò)一個(gè)保守的甘氨酸環(huán)狀基序磷酸化眾多的在細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控中起重要作用的細(xì)胞因子，包括c-Myc，BAD，Socs1，Cdc25A，HP1，PAP-1，p21cip1/waf1，PTP-U2S，NFATc1等，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[2]。Pim-1對(duì)FLT3-ITD AML具有上調(diào)作用，其抑制劑AR00459339可以促進(jìn)FLT3下游靶點(diǎn)STAT5，AKT，BAD的去磷酸化，對(duì)FLT3-ITD細(xì)胞如MV-4-11，Molm-14，和TF/ITD細(xì)胞系以及FLT3-ITD主要樣品具有細(xì)胞毒性[3]。Pim-1通過(guò)直接磷酸化Cdc25C推進(jìn)細(xì)胞周期G2/M的進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化[4]。Pim-1還可通過(guò)與Socs1和Socs3抑制因子聯(lián)合作用發(fā)揮其潛在的STAT5轉(zhuǎn)錄抑制作用。Pim-1能夠與NFATcl轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合并使其絲氨酸片段磷酸化，促進(jìn)IL-2的生成，啟動(dòng)IL-2依賴的淋巴細(xì)胞的增殖和成熟[5]。最近研究表明Pim-1激酶在免疫調(diào)節(jié)、炎癥（炎性腸疾病）以及新陳代謝和細(xì)胞增長(zhǎng)中起著一定的作用[6-7]。通過(guò)抑制Pim-1激酶，還可以增強(qiáng)Runx3的表達(dá)和阻止TH2及TH17 T細(xì)胞變異，從而預(yù)防花生過(guò)敏[8]。

在癌細(xì)胞，如白血病，淋巴瘤，以及前列腺癌中過(guò)表達(dá)Pim-1具有致命作用[9]，而在正常細(xì)胞中沒(méi)有。因此，與傳統(tǒng)的化學(xué)治療方法相比，抑制Pim-1激酶不會(huì)有有害的副反應(yīng)。多種特異性和潛在的Pim-1激酶抑制劑也已經(jīng)表現(xiàn)出誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，增加癌細(xì)胞對(duì)化療的敏感性以及協(xié)同其他抗癌藥物作用，如抑制Pim激酶可以增強(qiáng)蘇尼替尼對(duì)腎細(xì)胞癌的活性[10]，Pim-1作用于Akt下游，可以調(diào)解地氟烷誘導(dǎo)和心肌缺血后適應(yīng)性，增加心肌細(xì)胞存活[11]。Pim-1抑制劑ETP-45299與PI3K抑制劑GDC-0941合并使用，對(duì)MV-4-11 AML細(xì)胞有很強(qiáng)的協(xié)同作用[12]，與Bcl-2家族的小分子抑制劑ABT-737聯(lián)合使用，體內(nèi)和體外均引起前列腺癌細(xì)胞顯著凋亡[13]。因此，Pim-1激酶是一個(gè)很有前景的治療靶點(diǎn)。

1 Pim-1的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

在典型的絲/蘇氨酸或蘇氨酸激酶中，ATP和鉸鏈區(qū)形成兩個(gè)氫鍵：一個(gè)是嘌呤的NH2作為供體與鉸鏈的羰基形成氫鍵，另一個(gè)是受體在嘌呤N-1和激酶的骨架NH之間聯(lián)系。在Pim家族中這個(gè)殘基是脯氨酸，因此同樣的氫鍵相互作用不存在（圖1）[14-15]。由于鉸鏈區(qū)脯氨酸殘基Pro123的存在，Pim-1激酶區(qū)域僅通過(guò)一個(gè)氫鍵結(jié)合天然底物ATP。脯氨酸的存在使Pim-1與其他的激酶顯著不同[16]。這個(gè)鉸鏈區(qū)域是由Leu120，Glu121，Arg122和Pro123構(gòu)成[9,17]，Pim-1結(jié)構(gòu)另一個(gè)重要區(qū)域是富含谷氨酸磷酸鹽結(jié)合彎曲部分（P-loop），包含氨基酸殘基：Gly45，Ser46，Gly47，Gly48，Phe49和Gly50。嵌入物和脯氨酸共同引起了鉸鏈區(qū)的擴(kuò)張并形成了更大的空間，以便抑制劑占領(lǐng)并發(fā)揮作用。

2 作用于Pim-1的小分子抑制劑

圖1 Pim-1鉸鏈區(qū)和P-loop

近年來(lái)報(bào)道的有關(guān)Pim-1小分子抑制劑結(jié)構(gòu)種類很多[9,17-22]。包括黃酮類、咪唑并[1,2-b]噠嗪、吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-芳基-6-氨基-三唑并[4,3-b]噠嗪、苯亞甲基-噻唑烷-2,4-二酮、吡咯并[2,3-a]咔唑、苯并呋喃-2-羧酸類、取代的吡唑酮類、高效有機(jī)釕衍生物（III）等。黃酮類也抑制其他幾種激酶，使得這些化合物作為Pim-1抑制劑的用途不是很清楚。咪唑并[1,2-b]-和三氮唑并[4,3-b]-哌嗪（II）是一種高效選擇性Pim-1抑制劑，在納摩爾濃度就有抑制活性[22-23]。此外，異噁唑并[3,4-b]喹啉酮及其類似物是一類在納摩爾濃度就有效的高選擇性的新型Pim-1和Pim-2抑制劑。

2.1 吲哚咔唑和二吲哚順丁烯二酰亞胺衍生物

一些吲哚咔唑和二吲哚順丁烯二酰亞胺衍生物具蛋白激酶抑制活性，研究發(fā)現(xiàn)星孢菌素和結(jié)構(gòu)相關(guān)的二吲哚順丁烯二酰亞胺類化合物1，2和3（圖2）在1μmol/L時(shí)可產(chǎn)生90%的Pim-1抑制作用。這類化合物與Pim-1的結(jié)合特點(diǎn)表明，Pim-1鉸鏈骨架通過(guò)Glu121的羰基氧與順丁烯二酰亞胺的NH形成氫鍵作用，而Pro123的存在使得鉸鏈區(qū)與順丁烯二酰亞胺羰基無(wú)其他的氫鍵作用。盡管化合物1沒(méi)有二面角構(gòu)象，仍能很好的固定到ATP結(jié)合縫隙中，其吲哚部分被氨基酸殘基Leu44，Phe49，Val52，Ala6，Ile104，Leu120，Leu174和Ile185通過(guò)疏水接觸包裹，產(chǎn)生穩(wěn)定的疏水作用力。

2.2 咪唑并[1,2-b]噠嗪類和吡唑并[1,5-a]嘧啶類

圖2 吲哚咔唑和二吲哚順丁烯二酰亞胺衍生物

Bullock等[14]首次報(bào)道咪唑并[1,2-b]噠嗪類化合物4-6（圖3）和吡唑并[1,5-a]嘧啶類化合物10（圖3B）在納摩爾濃度對(duì)Pim-1有抑制活性，且對(duì)Pim-1的選擇性是Pim-2的100倍[14]?；衔?具有抗白血病活性，X光衍射顯示化合物4結(jié)合到Pim-1的ATP結(jié)合位點(diǎn)上，Lys67的N-1位的氮原子參與氫鍵作用，抑制劑與殘基Leu44，Phe49，Ile104和Leu120之間有疏水穩(wěn)定作用?；衔?誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞系MV-4-11凋亡，減少Pim下游靶點(diǎn)的磷酸化；在體外可減少初期白血病的發(fā)生。咪唑并[1,2-b]噠嗪類（圖3A）被認(rèn)為是ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑而不是ATP類似物[1,24-25]。在各種咪唑并[1,2-b]噠嗪中化合物8和9（圖3A）活性較好。進(jìn)一步構(gòu)效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)R2疏水作用對(duì)選擇性和去溶劑化的影響不大，R1對(duì)活性影響較大。R1、R2結(jié)構(gòu)優(yōu)化獲得的化合物6對(duì)Pim-1的 IC50是39 nmol/L。

圖3 咪唑并[1,2-b]噠嗪類(A)和吡唑并[1,5-a]嘧啶類(B)

ETP-45299是一個(gè)有效的選擇性Pim-1抑制劑，能抑制Bad和4EBP1的磷酸化，阻止人細(xì)胞系中實(shí)體瘤和非實(shí)體瘤細(xì)胞的增殖。ETP-45299與PI3K抑制劑GDC-0941合并使用，對(duì)MV-4-11 AML細(xì)胞有很強(qiáng)的協(xié)同作用，這表明合并使用選擇性Pim激酶抑制與PI3K抑制劑可能會(huì)產(chǎn)生很好的臨床效益[12]。

SGI-1776是由SuperGen公司最初通過(guò)虛擬篩選得到的一個(gè)化合物，已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)。該化合物對(duì)Pim-1，Pim-2，Pim-3都具有較高的抑制作用，能夠誘導(dǎo)慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的凋亡；最近Hospital等[26]提出SGI-1776抗白血病的機(jī)制是直接抑制FLT3激酶在AML中的活性。SGI-1776還可以誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞中的細(xì)胞周期停滯和凋亡，與雄性激素-依賴性細(xì)胞相比，在雄性非依賴細(xì)胞中具有顯著的細(xì)胞毒性效應(yīng)。最重要的是SGI-1776可使對(duì)化療藥物耐藥的前列腺癌細(xì)胞系對(duì)紫杉醇再敏化。體內(nèi)腫瘤模型實(shí)驗(yàn)初步研究顯示SGI-1776具有治療效果[27]。

2.3 異噁唑并[3,4-b]喹啉-3,4（1H,9H）-二酮類

以異噁唑并[3,4-b]喹啉-3,4（1H,9H）-二酮為骨架的化合物，最初是由Abbott實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)作為Pim-1抑制劑，其中化合物11（圖4A）在納摩爾濃度對(duì)Pim具有抑制活性，化合物12（圖4A）對(duì)Pim-1的抑制作用是IC50=2.5 nmol/L，是該類中最高效的Pim-1抑制劑。Abbott實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步研究得到的化合物13（圖4A）對(duì)Pim具有很高的抑制活性和選擇性（IC50=2.5 nmol/L）。研究以異噁唑并[3,4-b]喹啉-3,4-（1H,9H）-二酮為骨架作為潛在的Pim-1和Pim-2激酶抑制劑的構(gòu)效關(guān)系表明，R2可以為多種烷基基團(tuán)，R3只能是小基團(tuán)，如質(zhì)子，甲基，以維持分子的抑制活性[18]。

2.4 吡啶酮類衍生物

吡啶酮類衍生物是Valeant Pharmaceuticals R&D從160 000個(gè)化合物中篩選得到[19]，其中化合物14（圖4B）活性最高（IC50=50 nmol/L），這一類化合物與Pim-1的復(fù)合物X光-單晶衍射分析推測(cè)，該類化合物是ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。化合物14與鉸鏈區(qū)唯一有潛在相互作用的部位是R1苯環(huán)的左側(cè)，這個(gè)復(fù)雜的結(jié)構(gòu)被定義為Glu121的主要羰基與R1芳香氫（C-3）的弱氫鍵作用（C=O…H-C）。Glu121的羰基與芳香族C-4的氫之間的氫鍵可能也有助于穩(wěn)定化合物14與Pim-1的鉸鏈區(qū)?；衔?4的結(jié)合可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制ATP的利用，從而抑制了Pim-1的功能[19]。

2.5 苯亞甲基-噻唑烷-2,4-二酮類[28]

5-苯基芐烯基噻唑-2,4-二酮類是一類新的Pim-1和Pim-2抑制劑[17]，IC50在納摩爾濃度范圍。這類化合物體外可以阻斷Pim磷酸化多肽和蛋白質(zhì)，并抑制前列腺癌細(xì)胞和白血病細(xì)胞在細(xì)胞周期G1階段的生長(zhǎng)?；衔?5（圖5A）是從ChemBridge化合物庫(kù)中篩選獲得，對(duì)Pim-1和Pim-2的抑制作用分別是IC50=24 nmol/L和0.1μmol/L?；衔?6（圖5A）對(duì)Pim-1的抑制作用稍強(qiáng)（IC50=13 nmol/L），而對(duì)Pim-2的抑制作用稍低（IC50=2.3μmol/L）。

圖4 異噁唑并[3,4-b]喹啉-3,4（1H,9H）-二酮類（A）和吡啶酮類衍生物（B）

2.6 3-芳基-6氨基-三唑并[4,3-b]噠嗪類[15]

X光-單晶衍射顯示化合物17（圖5B）與Pim-1結(jié)合方式與化合物4結(jié)合的方式不同，在化合物17與Pim-1結(jié)合的復(fù)合物中m-CF3-苯環(huán)通過(guò)兩部分氫鍵即芳香環(huán)C-5和C-6位上的質(zhì)子與Glu121骨架羰基之間的氫鍵與鉸鏈區(qū)的Glu121連接。

化合物17雖然是有效的Pim-1選擇性抑制劑，但是其物理性質(zhì)限制了其應(yīng)用。以化合物17為先導(dǎo)化合物，R用哌啶基取代得到化合物18（圖5B），其溶解度得到改善（pH 7.4時(shí)溶解度大于200 μmol/L），而活性不變。

2.7 吡咯并[2,3-a]咔唑類

以吡咯并[2,3-a]咔唑?yàn)楣羌艿腜im抑制劑，C-6位被溴原子取代得到化合物19（圖5C），對(duì)Pim-1有很好的抑制作用（IC50=6.8 nmol/L）。C-6位溴原子與Glu121骨架羰基之間的排斥力可能是化合物19與Pim-1的一個(gè)額外相互作用力[28]。對(duì)吡咯并[2,3-a]咔唑C-3位改造，可合成新的Pim激酶的選擇性抑制劑（化合物20，21，22和23）。體外實(shí)驗(yàn)測(cè)試表明，這類化合物均具有納摩爾濃度級(jí)的Pim激酶抑制活性。

圖5 苯亞甲基-噻唑烷-2,4-二酮類(A)，3-芳基-6氨基-三唑[4,3-b]噠嗪類（B）和吡咯并[2,3-a]咔唑類（C）

2.8 喹啉類衍生物

Sliman等[29]報(bào)道了一系列7-羰基-8-羥基喹啉衍生物（圖6A）對(duì)Pim-1具有抑制作用。其中化合物24活性最好（IC50=0.4 μmol/L）。這些活性化合物是以8-羥基喹啉-7-碳酸為核心，分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)表明雜環(huán)部分在Pim-1結(jié)合位點(diǎn)被精確放置，芳香環(huán)和Phe49苯環(huán)的疏水作用可以產(chǎn)生很高的抑制活性，輔助環(huán)通過(guò)氫鍵作用增強(qiáng)這種作用，而R1、R2、R3、R4四個(gè)取代基中最多同時(shí)含有一個(gè)羥基，另外三個(gè)取代基為氫時(shí)活性較好，如化合物 25（IC50=0.5 μmol/L）。

A47與咪唑并[1,2-b]噠嗪類化合物的作用方式一致，顯著地?fù)p壞鼠科動(dòng)物依賴Pim-1過(guò)表達(dá)的VaF3細(xì)胞轉(zhuǎn)變成IL3細(xì)胞過(guò)程[30]，這表明A47的抗癌活性部分是通過(guò)調(diào)節(jié)Pim-1活性實(shí)現(xiàn)。

2.9 苯并呋喃-2-羧酸類

這類化合物（圖6B）的作用模式是：①苯并呋喃5-位取代基與ATP鉸鏈區(qū)疏水口袋之間的疏水相互作用是非常重要的結(jié)合作用。②2-羧酸基團(tuán)與Lys67的鹽橋作用和Glu89與Asp186之間的氫鍵作用被認(rèn)為是另一個(gè)非常重要的結(jié)合位點(diǎn)。③門看守位置（gate keeper site)附近的多余取代不適合。④在核糖結(jié)合區(qū)域存在潛在的空間以用于結(jié)構(gòu)擴(kuò)張。研究發(fā)現(xiàn)2-羧酸基團(tuán)與末端氨基之間的氫鍵作用很重要。其代表者主要有化合物26和27[31]。

圖6 喹啉類衍生物（A）和苯并呋喃-2-羧酸類（B）

3 其他化合物

Anizon等[32]報(bào)道一系列的有機(jī)金屬?gòu)?fù)合物（28~30）(圖7)。這類化合物都含一個(gè)平面的雜環(huán)骨架，一個(gè)Ru的雙齒配體，激酶抑制活性低于納摩爾。吡啶咔唑和金屬?gòu)?fù)合物部分占領(lǐng)與星孢菌素的吲哚咔唑和碳酸酯碎片相同的結(jié)合位點(diǎn)。化合物31～33(圖7)是混合型Pim激酶抑制劑，對(duì)Pim-1和Pim-2均有抑制作用。

圖7 其他化合物

Tsuganezawa等[33]采用熒光關(guān)聯(lián)能色譜法從700個(gè)化合物中虛擬篩選出的化合物34(圖7)，對(duì)Pim-1有抑制作用，體外IC50為150 nmol/L，單晶衍射分析化合物34與Pim-1的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)化合物34主要作用于ATP結(jié)合位點(diǎn)，并與殘基Asp128和Glu171直接作用。Sarno等[34]發(fā)現(xiàn)ATP位點(diǎn)導(dǎo)向的蛋白激酶CK2抑制劑NBC（Ki=0.22 μmol/L），對(duì)Pim激酶也有抑制作用，尤其是對(duì)Pim-1和Pim-3，抑制活性與CK2相當(dāng)。去硝基得到的dNBC對(duì)CK2的抑制活性幾乎完全喪失（IC50大于30 μmol/L），而對(duì)Pim-1和Pim-3的抑制作用不變。

4 小結(jié)

Pim-1蛋白作為新的抗腫瘤靶點(diǎn)，具有較高的選擇性，近年來(lái)越來(lái)越被關(guān)注。與Pim-1相互作用的小分子抑制劑結(jié)構(gòu)類型多樣，暗示Pim-1抑制劑在腫瘤細(xì)胞中能鈍化多個(gè)靶點(diǎn)。

咪唑并[1,2-b]哌嗪類與Pim-1激酶結(jié)合部位相對(duì)于ATP類似物抑制劑在利用激酶P-loop時(shí)相當(dāng)特別。很明顯還有很大空間優(yōu)化這類配體小分子，以提高其Pim-1激酶抑制活性。SGI-1776作為唯一一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的小分子抑制劑，對(duì)Pim-1，Pim-2，Pim-3都具有較高的抑制作用，對(duì)慢性淋巴細(xì)胞白血病和前列腺癌細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞毒性效應(yīng)。5-（3-三氟甲氧基芐烯基）噻唑烷-2，4-二酮可以減少Pim-1在完整細(xì)胞中的自動(dòng)磷酸化，是ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，對(duì)Pim激酶具有選擇性。由于Pim-1激酶在正常細(xì)胞中作用不明顯，以及Pim-1激酶的獨(dú)特結(jié)構(gòu)，使得結(jié)構(gòu)多樣性的Pim-1小分子抑制劑不會(huì)產(chǎn)生很大的副作用，盡管目前還沒(méi)有Pim-1激酶抑制劑上市，但是這些研究成果為開(kāi)發(fā)新靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物提供了思路。

[1] Kumar A, Mandiyan V, Suzuki Y, et al. Crystal structures of proto-oncogene kinase Pim1: a target of aberrant somatic hypermutations in diffuse large cell lymphoma[J]. J Mol Biol,2005, 348(1): 183-193.

[2] Magnuson NS, Wang ZP, Ding G, et al. Why target PIM1 for cancer diagnosis and treatment?[J]. Future Oncol, 2010, 6(9):1461-1478.

[3] Fathi AT, Arowojolu O, Swinnen I, et al. A potential therapeutic target for FLT3-ITD AML: PIM1 kinase[J]. Leuk Res, 2012, 36(2): 224-231.

[4] Tu ML, Wang HQ, Sun XD, et al. Pim-1 is up-regulated by shear stress and is involved in shear stress-induced proliferation of rat mesenchymal stem cells[J]. Life Sci, 2011,88(5-6): 233-238.

[5] Rainio EM, Sandholm J, Koskinen PJ. Cutting edge:transcriptional activity of NFATc1 is enhanced by the Pim-1 kinase[J]. J Immunol, 2002, 168(4): 1524-1527.

[6] Jackson LJ, Pheneger JA, Pheneger TJ, et al. The role of PIM kinases in human and mouse CD4+T cell activation and inflammatory bowel disease[J]. Cell Immunol, 2012, 272(2):200-213.

[7] Shen YM, Zhao Y, Zeng Y, et al. Inhibition of Pim-1 kinase ameliorates dextran sodium sulfate-induced colitis in mice[J].Dig Dis Sci, 2012, 57(7): 1822-1831.

[8] Wang M, Okamoto M, Domenico J, et al. Inhibition of Pim1 kinase prevents peanut allergy by enhancing Runx3 expression and suppressing TH2 and TH17 T-cell differentiation[J]. J Allergy Clin Immunol, 2012, 130(4): 932-944.

[9] Holder S, Zemskova M, Zhang C, et al. Characterization of a potent and selective small-molecule inhibitor of the PIM1 kinase[J]. Mol Cancer Ther, 2007, 6(1): 163-172.

[10] Mahalingam D, Espitia CM, Medina EC, et al. Targeting PIM kinase enhances the activity of sunitinib in renal cell carcinoma[J]. Br J Cancer, 2011, 105(10): 1563-1573.

[11] Stumpner J, Smul TM, Redel A, et al. Desflurane-induced and ischaemic postconditioning against myocardial infarction are mediated by Pim-1 kinase[J]. Acta Anaesthesiol Scand, 2012,56(7): 904-913.

[12] Blanco-Aparicio C, Collazo AMG, Oyarzabal J, et al. Pim 1 kinase inhibitor ETP-45299 suppresses cellular proliferation and synergizes with PI3K inhibition[J]. Cancer Lett, 2011,300(2): 145-153.

[13] Song JH, Kraft AS. Pim kinase inhibitors sensitize prostate cancer cells to apoptosis triggered by Bcl-2 family inhibitor ABT-737[J]. Cancer Res, 2012, 72(1): 294-303.

[14] Bullock AN, Debreczeni JE, Fedorov OY, et al. Structural basis of inhibitor specificity of the human protooncogene proviral insertion site in moloney murine leukemia virus(PIM-1) kinase[J]. J Med Chem, 2005, 48(24): 7604-7614.

[15] Parker LJ, Watanabe H, Tsuganezawa K, et al. Flexibility of the P-loop of Pim-1 kinase: observation of a novel conformation induced by interaction with an inhibitor[J]. Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun, 2012, 68(Pt 8):860-866.

[16] Schulz MN, Fanghanel J, Schafer M, et al. A crystallographic fragment screen identifies cinnamic acid derivatives as starting points for potent Pim-1 inhibitors[J]. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 2011, 67(Pt3): 156-166.

[17] Xia Z, Knaak C, Ma J, et al. Synthesis and evaluation of novel inhibitors of Pim-1 and Pim-2 protein kinases[J]. J Med Chem, 2009, 52(1): 74-86.

[18] Tong Y, Stewart KD, Thomas S, et al. Isoxazolo[3,4-b]quinoline-3,4(1H,9H)-diones as unique, potent and selective inhibitors for Pim-1 and Pim-2 kinases: chemistry, biological activities, and molecular modeling[J]. Bioorg Med Chem Lett,2008, 18(19): 5206-5208.

[19] Cheney IW, Yan S, Appleby T, et al. Identification and structure-activity relationships of substituted pyridones as inhibitors of Pim-1 kinase[J]. Bioorg Med Chem Lett, 2007,17(6): 1679-1683.

[20] Debreczeni Jé, Bullock AN, Atilla GE, et al. Ruthenium half-sandwich complexes bound to protein kinase Pim-1[J].Angew Chem Int Ed Engl, 2006, 45(10): 1580-1585.

[21] Pierce AC, Jacobs M, Stuver-Moody C. Docking study yields four novel inhibitors of the protooncogene Pim-1 kinase[J]. J Med Chem, 2008, 51(6): 1972-1975.

[22] Pogacic V, Bullock AN, Fedorov O, et al. Structural analysis identifies imidazo[1,2-b]pyridazines as PIM kinase inhibitors with in vitro antileukemic activity[J]. Cancer Research, 2007,67(14): 6916-6924.

[23] Grey R, Pierce AC, Bemis GW, et al. Structure-based design of 3-aryl-6-amino-triazolo[4,3-b] pyridazine inhibitors of Pim-1 kinase[J]. Bioorg Med Chem Lett, 2009, 19(11): 3019-3022.

[24] Qian K, Wang L, Cywin CL, et al. Hit to lead account of the discovery of a new class of inhibitors of Pim kinases and crystallographic studies revealing an unusual kinase binding mode[J]. J Med Chem, 2009, 52(7): 1814-1827.

[25] Jacobs MD, Black J, Futer O, et al. Pim-1 ligand-bound structures reveal the mechanism of serine/threonine kinase inhibition by LY294002[J]. J Biol Chem, 2005, 280(14):13728-13734.

[26] Hospital MA, Green AS, Lacombe C, et al. The FLT3 and Pim kinases inhibitor SGI-1776 preferentially target FLT3-ITD AML cells[J]. Blood, 2012, 119(7): 1791-1792.

[27] Swords T, Kelly K, Mahalingam D, et al. Overcoming drug resistance with SGI-1776: a novel Pim kinase inhibitor with potent preclinical activity in acute myeloid leukemia[J].Haematol-Hematol J, 2009, 94: 306-306.

[28] Beharry Z, Zemskova M, Mahajan S, et al. Novel benzylidene-thiazolidine-2,4-diones inhibit Pim protein kinase activity and induce cell cycle arrest in leukemia and prostate cancer cells[J]. Mol Cancer Ther, 2009, 8(6): 1473-1483.structure-activity relationship of 8-hydroxy-quinoline-7-carboxylic acid derivatives as inhibitors of Pim-1 kinase[J].Bioorg Med Chem Lett, 2010, 20(9): 2801-2805.

[30] Miduturu CV, Deng X, Kwiatkowski N, et al. Highthroughput kinase profiling: a more efficient approach toward the discovery of new kinase inhibitors[J]. Chem Biol, 2011,18(7): 868-879.

[31] Xiang YB, Hirth B, Asmussen G, et al. The discovery of novel benzofuran-2-carboxylic acids as potent Pim-1 inhibitors[J].Bioorg Med Chem Lett, 2011, 21(10): 3050-3056.

[32] Anizon F, Shtil AA, Danilenko VN, et al. Fighting tumor cell survival: advances in the design and evaluation of Pim inhibitors[J]. Curr Med Chem, 2010, 17(34): 4114-4133.

[33] Tsuganezawa K, Watanabe H, Parker L, et al. A novel Pim-1 kinase inhibitor targeting residues that bind the substrate peptide[J]. J Mol Biol, 2012, 417(3): 240-252.

[34] Sarno S, Mazzorana M, Traynor R, et al. Structural features underlying the selectivity of the kinase inhibitors NBC and dNBC: role of a nitro group that discriminates between CK2 and DYRK1A[J]. Cell Mol Life Sci, 2012, 69(3): 449-460.