襄麥冬不同極性部位粗提物抗氧化性能初步評價*

聶 倫，熊尚森，余海忠

(湖北文理學(xué)院化學(xué)工程與食品科學(xué)學(xué)院，湖北襄陽441053)

襄麥冬，即湖北麥冬Liriope spicata(Thunb.)Lour.Var.Prolifera Y.T.Ma，為《中華人民共和國藥典》(1995年版、2000年版、2005年版和2010版)收錄的麥冬基原植物之一，已成為中藥麥冬的主流商品。此道地藥材因主產(chǎn)于湖北襄陽而俗稱為襄麥冬，國家質(zhì)檢總局已于2008年發(fā)布53號公告批準(zhǔn)對“襄麥冬”實施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)。研究表明，襄麥冬植物天然產(chǎn)物在抗氧化性、清除自由基作用方面有突出的表現(xiàn)，這對于防癌、抗癌、抗衰老、預(yù)防心血管疾病，提高人民身體健康具有積極的作用［1］。襄麥冬活性物質(zhì)抗氧化性的研究目前尚未見報道，為了更加合理利用襄麥冬資源，本研究以蒸餾水、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等為溶劑，采用α－脫氧核糖法、鄰苯三酚自氧化法、鐵氰化鉀還原法、抗脂質(zhì)過氧化試驗等方法，分別提取襄麥冬不同極性部位粗提物，并對其抗氧化性進(jìn)行初步評價。

1 材料與方法

1.1 材料

襄麥冬，采自湖北襄陽歐廟襄麥冬規(guī)范化栽培基地。將其新鮮塊根洗凈瀝干后置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱50℃烘干至恒重，切片，粉碎，置于密閉容器中待用。

鄰苯三酚、HCL、Tris堿、α －脫氧核糖、FESO4、EDTA、硫代巴比妥酸(TBA)、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、K3［Fe(CN)6］、三氯乙酸、FeCl3、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、KCl、10%卵黃懸液(1.15%的KCl溶液為溶劑)、十二烷基硫酸鈉均為分析純，購于國藥集團(tuán)上海公司。FZ10型微型植物粉碎機(jī)(天津泰斯特);GZX－9030－MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊);RE－52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮);DKB－501A超級恒溫水槽(上海精宏);AL204電子分析天平(梅特勒－托利多);可調(diào)式微量移液槍(Finntte);UV－2550紫外－可見分光光度計(日本島津);LRH－250－Gb光照培養(yǎng)箱(廣東醫(yī)療)。

1.2 方法

1.2.1 襄麥冬活性物質(zhì)的提取 分別稱取10 g樣品粉碎物，用100 mL蒸餾水、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷50℃恒溫水浴提取3 h，過濾，再分別向濾渣中加入100 mL上種溶劑50℃恒溫水浴提取3 h，過濾。再重復(fù)一遍上述操作。合并3次濾液，經(jīng)減壓濃縮分別得到襄麥冬不同溶劑的提取浸膏，完全干燥后配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/mL溶液。

1.2.2 襄麥冬粗提物體外抗氧化活性測定

羥基自由基清除能力的評價方法:采用α－脫氧核糖法，取0.2 mL的FeSO4－EDTA混合液(10 mmol/L)于具塞試管中，加入0.2 mLα－脫氧核糖溶液(10 mmol/L)，然后加入1 mL樣品溶液，并用磷酸緩沖液(pH=7.4，0.1 mol/L)定容至1.8 mL，最后加入0.2 mL H2O2(10 mmol/L)，混勻后于37℃水浴中恒溫保持1 h;然后再加入2.8%(w/w)三氯乙酸(TCA)溶液1.0 mL、1.0%(w/w)硫代巴比妥酸(TBA)溶液1 mL，混勻后于沸水浴中加熱10 min，冷水冷卻后在532 nm處測定吸光值A(chǔ)S［2］。不加樣品溶液，同上操作處理，測定其對比吸光值A(chǔ)C。以不加樣品溶液且不在37℃水浴中反應(yīng)作為參比。樣品的羥自由基清除能力可表示為:清除率(%)=［(1－AS)/AC］×100。

超氧陰離子自由基清除能力的評價方法:采用鄰苯三酚自氧化法，取4.5 mL pH 8.2的Tris－HCI緩沖液(50 mmol/L)于具塞試管中，加入3.2 mL蒸餾水、1 mL樣品溶液(空白管用蒸餾水代替)，混勻后在25℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入25℃預(yù)熱過的0.3 mL鄰苯三酚(3 mmol/L)，空白管用10 mmol/L HCl代替。迅速搖勻后倒入比色杯，在325 nm處每隔30 s測定吸光值，共測4 min，推遲30 s［3］。樣品的·O－2清除能力可表示為:清除率(%)=［(A0－A)/A0］×100(A=A1－A2)。其中，A0為鄰苯三酚自氧化速率;A1為加入樣品后鄰苯三酚自氧化速率;A2為樣品的吸光值。

還原能力評價方法:采用鐵氰化鉀還原法，取1 mL樣品溶液與2.5 mL pH 6.6的磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L)及2.5 mL 1%鐵氰化鉀溶液混合，50℃保溫20 min，加入2.5 mL 10%三氯乙酸，混勻，靜置10 min于700 nm處測吸光值［4］。以吸光值大小表示還原能力大小。

抗脂質(zhì)過氧化作用評價方法:抗脂質(zhì)過氧化作用采用卵黃過氧化體系［5］。在具塞試管中加入0.5 mL 10%的卵黃懸浮液和0.1 mL不同濃度浸提液，用蒸餾水補(bǔ)至1 mL，再加入1.5 mL 20%的醋酸溶液和1.5 mL 0.8%TBA溶液，用微型混合振動儀振蕩混合，加塞于95℃恒溫水浴中加熱60 min，流水冷卻至室溫，加入5.0 mL正丁醇，振蕩后，3 000 rpm離心10 min，取上層清液，以正丁醇為空白管調(diào)零，用紫外分光光度計測定532 nm處的吸光度A1。不加提取物的對照體系吸光度為A0，平行測定5次。按下式計算提取物對卵黃脂蛋白過氧化作用:抑制率(%)==(A0－A1)/A0×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 羥基自由基清除能力的評價結(jié)果

采用α－脫氧核糖法評價襄麥冬不同極性部位粗提物清除·OH的能力，其原理為:Fe2+－EDTA+H2O2→Fe3+－EDTA+·OH+OH;·OH+α－脫氧核糖→氧化產(chǎn)物丙二醛;丙二醛+TBA(TCA)→粉紅色化合物。當(dāng)反應(yīng)體系中存在·OH清除劑時，·OH被部分清除，氧化產(chǎn)物丙二醛生成量減少，粉紅色化合物生成量減少，532 nm下吸收減弱［6］。因此，清除能力的大小可以通過粉紅色化合物生成量減少來表示。由圖1可知，襄麥冬不同極性部位粗提物均對Fenton體系產(chǎn)生的·OH有清除能力，且清除活性隨粗提物質(zhì)量濃度的升高而逐漸增強(qiáng)?？疾焐鲜鋈軇┐痔嵛锲骄宄芰?，則可以得出清除能力的大小順序為:乙醇粗提?。炯状即痔嵛铮疽宜嵋阴ゴ痔嵛铮救燃淄榇痔嵛铮臼兔汛痔嵛铮菊麴s水粗提物。其中，乙醇粗提取、甲醇粗提物及乙酸乙酯粗提物的清除能力相近，均超過60%。

圖1 襄麥冬不同極性部位粗提物的羥自由基清除能力Fig.1 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on hydroxyl radical-scavenging abilities

2.2 超氧陰離子自由基清除能力的評價結(jié)果

采用鄰苯三酚自氧化法評價襄麥冬不同極性部位粗提物對·O－2的清除能力，其原理如下:在堿性條件下(pH 8.2)，鄰苯三酚發(fā)生自氧化反應(yīng)，生成超氧陰離子自由基(·O－2)和中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物在325 nm處有一特征吸收峰。當(dāng)加入自由基清除劑時，·O－2的生成受到抑制，自氧化過程受阻，中間產(chǎn)物生成減少，在325 nm處的吸收減弱［6］。因此，可以通過測定A325的變化，推測襄麥冬不同極性部位粗提物對·O－2的清除能力。由圖2可知，不同粗提物均對·O－2有一定的清除能力，除了三氯甲烷粗提物外，清除能力隨粗提物質(zhì)量濃度的升高而逐漸增強(qiáng)，但清除率普遍不高。在濃度為1.6 mg/mL時，最大清除率也不到40%(甲醇粗提物)。

圖2 襄麥冬不同極性部位粗提物的超氧陰離子自由基清除能力Fig.2 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on superoxide anion radical-scavenging abilities

2.3 還原能力評價結(jié)果

采用鐵氰化鉀還原法評價襄麥冬不同極性部位粗提物的還原能力，其原理為:當(dāng)體系中存在還原性物質(zhì)時，鐵氰化鉀被還原成亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀在酸性條件下與三氯化鐵反應(yīng)，生成普魯士藍(lán)，在700 nm波長處有最大吸收峰。故吸光值越大，表示待測物質(zhì)的還原能力越強(qiáng)［6］。由圖3可知，襄麥冬不同極性部位粗提物平均還原能力大小排序為:甲醇粗提物＞三氯甲烷粗提物＞乙醇粗提?。疽宜嵋阴ゴ痔嵛铮菊麴s水粗提物＞石油醚粗提物。

圖3 襄麥冬不同極性部位粗提物的還原能力Fig.3 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on reducing abilities

2.4 抗脂質(zhì)過氧化作用評價結(jié)果

試驗結(jié)果表明，襄麥冬不同極性部位粗提物均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化作用，且均隨質(zhì)量濃度升高而增強(qiáng)。其作用強(qiáng)度順序為:三氯甲烷粗提物＞石油醚粗提物＞乙酸乙酯粗提物＞蒸餾水粗提物＞甲醇粗提物＞乙醇粗提取(圖4)，且平均抑制率均超過55%，三氯甲烷粗提物達(dá)到91.21%。

圖4 襄麥冬不同極性部位粗提物抗脂質(zhì)過氧化作用Fig.4 Anti lipid peroxidation effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera

3 結(jié)論

本文采用α－脫氧核糖法、鄰苯三酚自氧化法、鐵氰化鉀還原法、抗脂質(zhì)過氧化試驗4種國內(nèi)外常用的體外抗氧化活性檢測方法，對鄂西北產(chǎn)道地藥材襄麥冬的蒸餾水、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷粗提物的抗氧化性進(jìn)行了化學(xué)評價，結(jié)果表明，襄麥冬不同極性部位粗提物均具有一定抗氧化性，而且在試驗質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈明顯量效關(guān)系。襄麥冬是一種藥食兼用的中藥植物，其塊根目前廣泛應(yīng)用到保健品、食品的開發(fā)中。因此，除了對·O－2清除能力偏低(不到40%)外，襄麥冬粗提物·OH的清除活性、還原能力及抗脂質(zhì)過氧化作用在今后食品生產(chǎn)與保存中的應(yīng)用值得期待。

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