MMP-9在胃腺癌中的表達(dá)意義

張穎 張古林 胡建功

胃癌是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，位居癌癥死因的第二位［1］。胃癌的發(fā)生涉及腫瘤細(xì)胞與宿主之間復(fù)雜的相互作用，多個(gè)基因及其產(chǎn)物參與了過(guò)程的調(diào)控。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix m etalloproteinases，MMPs)是一類結(jié)構(gòu)中含有Zn2+的肽鏈內(nèi)切酶家族，是腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障的主要執(zhí)行者。其中MMP-9為明膠酶，可選擇性降解ECM和基底膜的主要成分O型膠原和明膠，為腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造必需條件，并同時(shí)促進(jìn)腫瘤中新生血管的形成［2］。本研究通過(guò)檢測(cè)胃癌組織中MMP-9蛋白的表達(dá)及其與胃癌臨床病理學(xué)特征之間的相關(guān)性，旨在探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為胃癌預(yù)后的判斷及臨床治療提供一定的理論參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取手術(shù)切除標(biāo)本60例(胃癌組)及其癌旁組織(距離癌組織5 cm處)20例(癌旁組)和10例胃鏡下取的正常黏膜(對(duì)照組)。胃癌組中男33例，女27例;＜50歲18例，≥50歲42例;中分化16例，低分化44例;浸潤(rùn)黏膜下層6例，肌層11例，漿膜層33例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無(wú)轉(zhuǎn)移18例。所有病例均經(jīng)病理診斷證實(shí)，資料完整，且均未做過(guò)放化療。

1.2 檢測(cè)方法 兔抗人MMP-9單克隆抗體，稀釋濃度為1∶50，即用型免疫組化試劑盒，均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定。采用免疫組化S-P法，DAB顯色，具體操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知喉癌陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 以特定著色部位出現(xiàn)棕黃色顆粒視為陽(yáng)性著色，MMP-9染色陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞質(zhì)。以表達(dá)陽(yáng)性率的形式表示染色陽(yáng)性率。選取細(xì)胞分布均勻的視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞總數(shù)，每例計(jì)數(shù)10個(gè)視野，計(jì)算其中平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，以百分?jǐn)?shù)表示。即表達(dá)陽(yáng)性率=(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/瘤細(xì)胞總數(shù))×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMP-9在胃癌中的表達(dá) MMP-9的表達(dá)陽(yáng)性率在胃腺癌組顯著高于對(duì)照組及癌旁組(P＜0.01)，在癌旁組中顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 CD147、MMP-9在胃癌中的表達(dá)率%，±s

表1 CD147、MMP-9在胃癌中的表達(dá)率%，±s

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與癌旁組織比較，#P＜0.05

癌旁組(n=20)胃腺癌組(n=60) 72.6±8.1*#

2.2 MMP-9表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 MMP-9表達(dá)陽(yáng)性率低分化癌組顯著高于中分化癌組(P＜0.05)，浸潤(rùn)肌層及浸潤(rùn)漿膜層組顯著高于浸潤(rùn)黏膜下層組(P＜0.05)，浸潤(rùn)肌層及浸潤(rùn)漿膜層組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)習(xí)意義(P＞0.05);在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)。MMP-9的表達(dá)陽(yáng)性率與患者性別、年齡、腫瘤體積等無(wú)關(guān)(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

3 討論

MMP-9可由腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞以酶原的形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表面的膠原和明膠，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞沿著破損的基底膜向周圍組織浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移［2］。腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)成分及基底膜的降解是腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，MMP-9能降解包括Ⅳ型膠原在內(nèi)的多種基質(zhì)成分。

研究顯示，MMP-9在多種腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)，并與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后有關(guān)。茍小霞等［3］檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MMP-9在喉鱗癌的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于喉炎組，與喉癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。MMP-9表達(dá)陰性組5年生存率明顯高于MMP-9表達(dá)陽(yáng)性組。提示其表達(dá)增強(qiáng)與喉癌侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)，MMP-9是喉癌預(yù)后的危險(xiǎn)因子。Tamamura等［4］發(fā)現(xiàn)，MMP-9在正常及增生口腔黏膜缺乏表達(dá)，原位癌呈弱表達(dá)，浸潤(rùn)癌表達(dá)陽(yáng)性率明顯增高，差異有顯著性。提示MMP-9與口腔鱗癌的發(fā)生及演進(jìn)有關(guān)。Yang等［5］檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MMP-9在胃腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常黏膜中，并與腫瘤體積、組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān)，與患者性別、年齡無(wú)關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，MMP-9表達(dá)陽(yáng)性率在胃腺癌組織中顯著高于正常胃黏膜上皮及癌旁組織中;MMP-9表達(dá)陽(yáng)性率在低分化癌組織中顯著高于中分化癌組織中，在浸潤(rùn)肌層及浸潤(rùn)漿膜層組織中顯著高于浸潤(rùn)黏膜下層組織中，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。MMP-9的表達(dá)陽(yáng)性率與患者性別、年齡、腫瘤體積等無(wú)關(guān)。本研究與Yang等［5］研究結(jié)果一致。提示MMP-9促進(jìn)了胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移，與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。故推測(cè)MMP-9可能促進(jìn)了胃癌的演進(jìn)與發(fā)展。同時(shí)也表明，針對(duì)MMP-9靶向治療可能對(duì)胃癌的臨床治療具有重要意義。

表2 MMP-9表達(dá)胃癌臨床病理特征的關(guān)系%，±s

表2 MMP-9表達(dá)胃癌臨床病理特征的關(guān)系%，±s

注：與黏膜下層比較，*P ＜0.05;與肌層比較，#P ＜0.05

≥50(n=42) 72±9＜50(n=18) 75±10 1.000腫瘤直徑(cm)≥5(n=43) 70±10＜5(n=17) 79±9 1.000分化程度中(n=16) 62±10低(n=44) 77±10 0.025浸潤(rùn)深度黏膜下層(n=6) 55±9肌層(n=11) 71±9* 0.033漿膜層(n=43) 76±7*# *0.019，△1.000淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)(n=18) 62±8有(n=42)77±8 0.022

1 徐飚，王建明.胃癌流行病學(xué)研究.中華腫瘤防治雜志，2006，13：1-7.

2 Groblewska M，Siewko M，Mroczko B，etal.The role of matrix metalloproteinases(MMPs)and their inhibitors(TIMPs)in the development of esophageal cancer.Folia Histochem Cytobiol，2012，50：12-19.

3 茍小霞，金鳳，陳海霞，等.喉癌中細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶2、9的表達(dá)及其臨床意義.中華醫(yī)學(xué)雜志，2010，90：1264-1265.

4 Tamamura R，Nagatsuka H，Siar CH，etal.Comparative analysis of basal lamina type IV collagen α chains，matrix metalloproteinases-2 and-9 expressions in oral dysplasia and invasive carcinoma.Acta Histochem，2012，Epub ahead of print.

5 Yang S，Zhao Z，Wu R，Expression and biological relationship of vascular endothelial growth factor-A and matrix metalloproteinase-9 in gastric carcinoma.JInt Med Res，2011，39：2076-2085.