北五味子醇提物對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠記憶功能的影響

徐 博 安 英 沈 楠 趙麗晶 陳 雪 吳畏難 陳建光

阿爾茨海默病病理機制復雜，更缺乏有效的治療措施已成為老年人致殘最嚴重的疾病之一，并且隨著人口的老齡化，患者日益增多，將給家庭和社會帶來沉重的負擔[1]。因此對老年性癡呆藥物的尋求和研究是當前醫(yī)學界的一個緊迫問題。學習記憶的“痕跡論”表明，記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)組成了記憶的全過程[2]。本文應用亞硝酸鈉造成小鼠記憶鞏固障礙，從而觀察北五味子醇提物（Schisandra Chinensis baill extract,SCE）對記憶障礙的改善作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料實驗所用動物為 60只清潔級健康昆明種小白鼠，雌雄兼用，體重（20±2）g，實驗動物許可證號為SCXK-（吉）2003～2004，由長春高新醫(yī)學動物實驗研究中心提供；實驗所用試劑分別為 SCE（北華大學林學院）；亞硝酸鈉，長春市試劑廠，批號：930220；腦復康，天津金世制藥有限公司，批號：20060661；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，南京建成生物工程研究所批號：20080417；丙二醛（MDA）含量測定試劑盒，南京建成生物工程研究所批號：20080417；實驗所用儀器為小鼠避暗測試儀（成都泰盟科技有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組、造模及給藥[3-4]將篩選的昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機均分成6組，對照組、模型組、腦復康組、SCE低劑量組、SCE中劑量組、SCE高劑量組。對照組與模型組給予蒸餾水灌胃，腦復康組給予腦復康0.3g/kg·d，SCE低、中、高劑量分別給予SCE 0.15g/kg、0.30g/kg、0.60g/kg連續(xù)灌胃給藥（每只小鼠按0.1ml/10g灌胃）15d。在第15天灌胃給藥1h后，進行避暗實驗。將小鼠面部背向洞口放入明室，適應環(huán)境5min，然后立即通以36V交流電，打開隔板，小鼠穿過洞口進入暗室受到電擊，記時自動停止。取出小鼠，記錄小鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需時間，即潛伏期。實驗完畢除空白對照組外，其余各組立即皮下注射（sc）亞硝酸鈉120mg/kg，即破壞記憶的鞏固，對照組注射同體積的生理鹽水。在第16天重做測試，記錄小鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需時間即潛伏期和5min內受電擊次數(shù)。

1.2.2 樣本取材及測定實驗第18天稱重，快速剝離腦組織，用電子天平稱腦組織濕重后用錫箔紙包好，置-80℃低溫冰箱保存，待測各種生化指標。測定時，按重量:體積=1:9的比例加入預冷的生理鹽水，用組織勻漿機充分勻漿，制成10%的腦組織勻漿，用微量移液器轉移至離心管中，3000r/min離心10min。測定時取上清液進行超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的測定。

1.3 統(tǒng)計學處理本文中數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差（±s）表示，經(jīng)SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件單因素方差分析（One-way ANOVA）中的Dunnett's Test處理。

2 結果

實驗結果如表1～3所示。

3 討論

實驗表明，在第二次記憶測試中，SCE中、高劑量組較模型組潛伏期延長，錯誤次數(shù)減少，表明SCE可以改善記憶鞏固障礙模型小鼠的記憶能力。SCE可增高抗氧化酶 SOD的活力，抑制脂質過氧化產(chǎn)物MDA的增多，從而減少氧自由基的損傷，加速體內自由基的清除，并且隨著 SCE劑量的增加，此種變化越明顯，且中藥SCE中、高劑量組抗氧化作用明顯高于低劑量組。提示，SCE具有清除自由基，延緩細胞老化，抑制細胞退化和變性，改善機體的結構和功能，提高機體生命力的作用。

近年自由基學說與AD的關系越來越引起學者的關注，被認為是AD的一個重要致病因素，而且大量實驗也證明抗氧化劑對AD的發(fā)病有保護和延緩進程的作用[5]。SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基，保護細胞免受損傷。MDA是氧自由基與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化的產(chǎn)物，其產(chǎn)生量與氧自由基的量相平行，因而測定MDA能反映氧自由基的水平，間接反映出細胞損傷的程度。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合，SOD活力的高低間接反應了機體清楚氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。

本實驗為臨床前期研究 SCE藥物治療老年癡呆癥、改善學習和記憶功能提供了有價值的實驗數(shù)據(jù)，但要獲得更有價值的治療藥物，還需要做大量艱苦工作。相信隨著時間的推移和對SCE改善學習記憶、防治衰老和老年癡呆癥的研究進一步深入，SCE相關藥物及其保健產(chǎn)品的研發(fā)將會取得突破。

表1 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠記憶能力的影響(避暗法)[(±s),n=10]

表1 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠記憶能力的影響(避暗法)[(±s),n=10]

注：與對照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01

分組 動物數(shù) 潛伏期(s) 錯誤次數(shù)(n)對照組 10 125.68±30.08 3.50±1.29模型組 10 49.35±32.88## 7.83±1.72##腦復康組 10 99.71±21.95** 3.43±1.40**SCE低劑量組 10 75.59±33.55 6.00±1.51 SCE中劑量組 10 88.38±28.83* 5.00±1.41**SCE高劑量組 10 104.31±30.09** 3.57±2.37**

表2 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織SOD活性的影響[(±s),n=10]

表2 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織SOD活性的影響[(±s),n=10]

注：與對照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01

分組 動物數(shù) SOD(U/mgprot)對照組 10 78.97±10.50模型組 10 44.08±13.72##腦復康組 10 63.90±9.00**SCE低劑量組 10 49.70±7.56 SCE中劑量組 10 58.79±10.07*SCE高劑量組 10 78.24±15.55**

表3 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織MDA含量的影響[(±s),n=10]

表3 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織MDA含量的影響[(±s),n=10]

注：與對照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01

分組 動物數(shù) MDA(nmol/mgprot)對照組 10 29.93±10.91模型組 10 74.24±29.89##腦復康組 10 32.60±26.38*SCE低劑量組 10 49.21±24.97 SCE中劑量組 10 36.77±25.16*SCE高劑量組 10 30.82±12.52**

[1]趙麗波,付宏娟,張健莉.阿爾茨海默病發(fā)生機制的研究進展[J].中國老年學雜志,2011,31(24):4997-4998.

[2]林途春,閏也.阿爾茨海默病發(fā)病機制研究的現(xiàn)狀與進展[J].遼寧醫(yī)學院學報,2009,30(6):558-560.

[3]鄒宇曉,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對記憶障礙模型大鼠、小鼠學習記憶能力的影響[J].中國食品學報,2010,10(1):26-29.

[4]羅建,王曄,程薇波.磷脂酰膽堿對小鼠記憶障礙模型的影響[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2011,38(3):446-448.

[5]林玉坤,曾園山,屈澤強,等.氧化應激與阿爾茨海默病[J].解剖學研究,2009,31(1):67-70.