布氏菌病活疫苗的生產(chǎn)現(xiàn)狀與質(zhì)量分析

王 楠，程君生，丁家波，蔣玉文，毛開(kāi)榮

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

布氏菌病(簡(jiǎn)稱布病)是由布氏菌(Brucella)引起的一種人畜共患傳染病。近年來(lái)，我國(guó)布病疫情形勢(shì)嚴(yán)峻，對(duì)人體健康和畜牧業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重的危害［1－3］。目前，我國(guó)主要采取以預(yù)防為主的防疫措施，所以，布病疫苗產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣直接關(guān)系到全國(guó)布病疫情的有效控制。農(nóng)業(yè)部高度重視布病類疫苗產(chǎn)品質(zhì)量，每年安排并組織抽檢計(jì)劃，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所負(fù)責(zé)對(duì)該類產(chǎn)品實(shí)施監(jiān)督檢驗(yàn)。本文對(duì)布氏菌病活疫苗連續(xù)三年的生產(chǎn)現(xiàn)狀和監(jiān)督檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，以了解目前我國(guó)廣泛使用的布氏菌病活疫苗的質(zhì)量狀況。

1 布氏菌病活疫苗生產(chǎn)現(xiàn)狀

目前，國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)生產(chǎn)的布氏菌病活疫苗品種主要包括S2株、M5株和A19株。截至2012年7月，取得批準(zhǔn)文號(hào)的企業(yè)共有14家，其中取得S2株疫苗批準(zhǔn)文號(hào)的企業(yè)有13家，目前生產(chǎn)的企業(yè)有4家;取得M5株疫苗批準(zhǔn)文號(hào)的企業(yè)有4家，目前生產(chǎn)的企業(yè)有2家;取得A19株疫苗批準(zhǔn)文號(hào)的企業(yè)有6家，目前生產(chǎn)的企業(yè)有2家。

近三年，布病活疫苗總產(chǎn)量逐年增加，累計(jì)達(dá)到6．7億頭份。其中S2株疫苗的產(chǎn)量占總產(chǎn)量的94%，其產(chǎn)量增長(zhǎng)也最快，2011年比2009年產(chǎn)量增加230%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 2009-2011年布氏菌病活疫苗產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)

2 布氏菌病活疫苗質(zhì)量狀況

布氏菌病活疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國(guó)獸藥典》三部，其檢驗(yàn)項(xiàng)目包括:性狀、純粹檢驗(yàn)、變異檢驗(yàn)、活菌計(jì)數(shù)、安全檢驗(yàn)、剩余水分測(cè)定和真空度測(cè)定。活菌計(jì)數(shù)的結(jié)果是評(píng)價(jià)疫苗有效性的指標(biāo)之一，所以布氏菌病活疫苗的以會(huì)檢形式開(kāi)展的監(jiān)督檢驗(yàn)通常選取該項(xiàng)檢驗(yàn)作為主要的檢驗(yàn)項(xiàng)。從2010年到2012年，監(jiān)督會(huì)檢的S2株疫苗活菌計(jì)數(shù)結(jié)果表明該項(xiàng)檢驗(yàn)的合格率逐年上升，2012年已經(jīng)達(dá)到了100%(表2)。

表2 2010-2012年布氏菌病活疫苗(S2株)活菌計(jì)數(shù)結(jié)果

為了能更全面的評(píng)價(jià)布氏菌病活疫苗質(zhì)量，2012年的監(jiān)督檢驗(yàn)除了進(jìn)行全項(xiàng)監(jiān)督檢驗(yàn)以外，還對(duì)疫苗菌株的純凈性、遺傳穩(wěn)定性和種屬特異性進(jìn)行了檢定。各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果表明，抽檢的9批S2株疫苗和3批A19株疫苗的各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果都符合規(guī)定，兩種疫苗菌株的純凈性、遺傳穩(wěn)定性和種屬特異性也都符合菌種的特性。但是，抽檢的1批M5株疫苗的活菌計(jì)數(shù)結(jié)果不符合規(guī)定，而且該菌株的毒力檢定結(jié)果也顯示，該批次M5株毒力高達(dá)每克脾臟含菌量70萬(wàn)個(gè)，明顯高于對(duì)生產(chǎn)用菌株每克脾臟含菌量應(yīng)不超過(guò)20萬(wàn)個(gè)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定［4］(圖1)。

圖1 2012年布氏菌病活疫苗各批次生產(chǎn)用菌株毒力測(cè)定結(jié)果

3 布氏菌病活疫苗生產(chǎn)檢驗(yàn)存在的問(wèn)題及建議

3．1 生產(chǎn)工藝需進(jìn)一步改進(jìn) 疫苗的關(guān)鍵是質(zhì)量可控，我國(guó)獸藥行業(yè)全面實(shí)行GMP管理以來(lái)，各生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量不斷提高，抽檢合格率逐年提高［5－6］。但是，對(duì)于布病活疫苗仍然存在生產(chǎn)工藝落后影響疫苗質(zhì)量的問(wèn)題。一方面是培養(yǎng)基的成本較高且質(zhì)量不穩(wěn)定。布病疫苗傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝中使用的肝湯培養(yǎng)基在很大程度上取決于動(dòng)物來(lái)源的品質(zhì)和消化處理的方式，而市售的干粉培養(yǎng)基不同企業(yè)和不同批次之間差異較大，成為布病疫苗生產(chǎn)過(guò)程中影響質(zhì)量的最主要問(wèn)題之一。另一方面是凍干保護(hù)劑保護(hù)效果不理想，疫苗的熱穩(wěn)定性存在問(wèn)題。實(shí)踐表明，現(xiàn)有工藝條件下，活菌數(shù)降低和有效期時(shí)間的延長(zhǎng)呈正相關(guān)性。建議企業(yè)積極研發(fā)提高凍干保護(hù)劑的保護(hù)效果;同時(shí)，疫苗裝量應(yīng)給予合理附加量、優(yōu)化儲(chǔ)藏溫度并保證疫苗運(yùn)輸過(guò)程中冷鏈存儲(chǔ)，最終確保活疫苗使用前的免疫效果不受影響。

3．2 生產(chǎn)企業(yè)檢驗(yàn)?zāi)芰π柽M(jìn)一步提高 活菌計(jì)數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)是控制疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵項(xiàng)。但是，會(huì)檢中發(fā)現(xiàn)各企業(yè)檢驗(yàn)人員流動(dòng)性大，新上崗檢驗(yàn)?zāi)芰Σ蛔?，同一批次不同人員計(jì)數(shù)結(jié)果符合性差異很大。由于活菌計(jì)數(shù)時(shí)樣品的稀釋液的選擇、稀釋方法、操作熟練程度、滴板技巧等技術(shù)細(xì)節(jié)對(duì)計(jì)數(shù)的結(jié)果都會(huì)產(chǎn)生較大的影響。因此各企業(yè)有必要對(duì)活菌計(jì)數(shù)方法進(jìn)一步細(xì)化，并加強(qiáng)對(duì)檢驗(yàn)人員的技術(shù)培訓(xùn)，避免由于檢驗(yàn)技術(shù)不過(guò)關(guān)導(dǎo)致的疫苗質(zhì)量不穩(wěn)定。

3．3 開(kāi)展布氏菌病活疫苗(M5株)的再評(píng)價(jià)工作

本次監(jiān)督檢驗(yàn)結(jié)果顯示布氏菌病活疫苗(M5株)的菌株毒力超過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的3倍。有研究結(jié)果顯示:M5株免疫后第16周仍能在小鼠脾臟內(nèi)分離細(xì)菌，而S2株免疫后第6周在小鼠體內(nèi)就已經(jīng)分離不到活菌，M5株的毒力超過(guò)其他2個(gè)疫苗株［7］。由于2011年M5株疫苗僅生產(chǎn)8批，同時(shí)，監(jiān)督檢驗(yàn)受到抽檢批次的限制，雖然抽檢的1批疫苗不能充分說(shuō)明疫苗毒株的穩(wěn)定性有問(wèn)題，但也給監(jiān)管單位下一步的工作提供了一個(gè)方向，對(duì)M5株的安全性和質(zhì)量可控性進(jìn)行深入研究，掌握更多的關(guān)于M5株毒力的有關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。開(kāi)展對(duì)布氏菌病活疫苗(M5株)的再評(píng)價(jià)工作將對(duì)布氏菌病活疫苗的安全使用和布病的防控工作提供有利的技術(shù)支持。

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［4］ 中華人民共和國(guó)獸用生物制品規(guī)程［M］．二〇〇〇年版．北京:化學(xué)工業(yè)出版社．154－160．

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［7］ 程君生，吳梅花，趙麗霞，等．三種布魯氏菌病疫苗株的毒力比較［J］．中國(guó)獸藥雜志，2012，47(9):13 －15．