苦參中黃酮類成分薄層色譜鑒別研究△

馬鴻雁，朱雅玲，杜憬生，李娟，楊全*

(1.廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006；2.廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120)

苦參中黃酮類成分薄層色譜鑒別研究△

馬鴻雁1，朱雅玲1，杜憬生2，李娟2，楊全1*

(1.廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006；2.廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120)

目的：研究苦參的薄層色譜鑒別特征，建立苦參薄層色譜鑒別的專屬性方法。方法：采用乙酸乙酯為提取溶劑，超聲處理樣品，硅膠G板分離鑒別苦參中黃酮類成分。結(jié)果：薄層色譜檢出苦參酮、苦參醇Ⅰ、三葉豆紫檀苷、高麗槐素和槐屬二氫黃酮G，色譜斑點清晰，能有效提供苦參的鑒別特征。結(jié)論：方法可行，重復(fù)性好，專屬性強，為完善苦參薄層鑒別方法提供了實驗資料和科學依據(jù)。

苦參；黃酮；薄層色譜

中藥苦參為豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根，具清熱燥濕，殺蟲，利尿的功能。目前2010版《中國藥典》對于苦參質(zhì)量標準的記載，是以苦參堿、氧化苦參堿作為定性定量指標[1]。然而這兩種生物堿并非苦參獨有，同屬藥材山豆根也含有該成分。山豆根具清熱解毒、消腫利咽功效，與苦參明顯不同，但《中國藥典》標準中這兩種中藥均以兩種生物堿作為定性和定量指標，缺乏專屬性[2]?？鄥⒅泻械狞S酮成分主要是以苦參酮為代表的異戊烯基二氫黃酮，這類成分具有抗菌、抗腫瘤、抗磷酯酶活性、抗心律失常等多種生物活性，且具有很明顯的化學分類學特征[3-9]。作者旨在研究苦參中黃酮類成分的薄層色譜分析方法，為苦參建立專屬性強的定性鑒別方法，為其質(zhì)量的全面評價提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

AY-120型精密電子天平(日本島津)；KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器(250W，40kHz，昆山市超聲儀器有限公司)；UV-1800型紫外分析儀(日本島津)；薄層層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；手動鋪板器；雙槽展開缸；定量毛細管。

對照品均為自制，經(jīng)檢測純度在95%以上；其他試劑均為分析純。苦參購自廣州市各藥店(1.采芝林藥店，2.明月康橋藥店，3.寬正堂藥店，4.濟安堂藥店，5.濟方堂藥店)，經(jīng)廣東藥學院滕希峰博士鑒定為豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液和對照品溶液的制備

取藥材粉末2.0 g(過40目篩)，加乙酸乙酯60 mL，超聲提取30 min，濾過，殘渣加乙酸乙酯60 mL繼續(xù)超聲30 min，濾過，合并濾液，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取苦參酮、苦參醇Ⅰ、三葉豆紫檀苷、高麗槐素和槐屬二氫黃酮G對照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.2 薄層色譜鑒別

照薄層色譜法，吸取供試品溶液和對照品溶液各4 μL，分別點于同一自制硅膠薄層板(厚500 μm，新鮮制備，105 ℃活化1 h)上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲醇(5∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光(365 nm)下檢視。再噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下和紫外光(365 nm)下檢視，見圖1。

3 耐用性考察

3.1 不同薄層板的比較

選用自制硅膠G板和Merck硅膠G預(yù)制板，分別按擬定的試驗方法試驗。結(jié)果表明，兩種板都可以達到較好的分離效果，見圖2。

1～5.苦參 S.混合對照品(從上而下依次為高麗槐素、槐屬二氫黃酮G、苦參酮、苦參醇I及三葉豆紫檀苷)A.365 nm紫外光下 B.硫酸顯色后日光下 C.硫酸顯色后365nm紫外光下圖1 苦參黃酮類成分TLC圖

1-6為苦參樣品 S.對照品 A.預(yù)制板 B.自制板圖2 不同板比較TLC圖

3.2 不同濕度的比較

取點樣后自制板，分別在32%，58%，88%的濕度中展開，結(jié)果表明該方法對不同濕度的適應(yīng)性較好。

3.3 不同溫度的比較

取點樣后的自制板，分別在4 ℃和28 ℃的環(huán)境下進行展開，結(jié)果表明該方法對不同溫度的適應(yīng)性較好。

3.4 點樣量的考察

照2.2方法，分別吸取2，4，6，8 μL供試品溶液和對照品溶液點樣，展開。結(jié)果表明，樣品和對照品的點樣量在4 μL時分離效果好，斑點清晰。

4 討論

在供試品溶液的制備中，本研究考察了不同溶劑(乙酸乙酯、80%乙醇、甲醇)超聲提取方法和不同前處理方法(萃取法、硅膠柱層析法、大孔樹脂法)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯超聲提取法對苦參黃酮類成分提取效率最高，雜質(zhì)斑點少，分離度好，可直接進行點樣，避免了復(fù)雜的前處理步驟，因此綜合考慮選用該方法。在展開系統(tǒng)的選擇上，比較了3種展開系統(tǒng)：三氯甲烷-甲醇，石油醚-丙酮，石油醚-乙酸乙酯-甲醇?？鄥⑼涂鄥⒋饥?種化合物的分離較困難，結(jié)果表明石油醚-乙酸乙酯-甲醇(5∶5∶1)得到的斑點清晰，分離度佳，故采用此展開條件。

另外，還對多種不同的顯色方法進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苦參酮、苦參醇Ⅰ和槐屬二氫黃酮G這3種化合物在紫外燈(365 nm)下檢視和10%硫酸乙醇加熱顯色后均可見到清晰的斑點，而三葉豆紫檀苷和高麗槐素在10%硫酸乙醇加熱后置于365 nm下檢視斑點最清晰。

以苦參酮為代表的異戊烯基二氫黃酮是苦參中非常有價值的一類成分。作者采用薄層色譜的方法建立了苦參中該類成分的鑒別方法，并對其中主要斑點用對照品進行鑒定。本研究后續(xù)將此薄層方法用于苦參和近緣種山豆根的成分比較，發(fā)現(xiàn)兩種藥材的黃酮類成分差異很大，可用于兩者鑒別。本法操作簡便，重復(fù)性強，對于今后苦參和相關(guān)制劑的質(zhì)量標準提高具有一定的參考價值。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：188.

[2] 丁佩蘭.山豆根和苦參化學成分的比較研究[D].上海：復(fù)旦大學，2004.

[3] 顧關(guān)云，肖年生，蔣昱.苦參的化學成分、生理活性和藥理作用[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2009，24(5)：265-271.

[4] Han J，Sun M，Cui Y，el al.Kushen flavonoids induce apotosis in tumor cells by inhibition of NF-kappaB activation and multiple receptor tyrosine kinase activities[J].phytother Res，2007，21(3)：262-268.

[5] Berghe W V，De Naeyer A，Dijsselbloem N，et al.Attenuation of ERK/RSK2-driven NF-kappaB gene expression and cancer cell proliferation by kuarinone，a lavandulyl flanone isolated fromSophoraflavescensAit.Roots[J].Endocr Metab Immune Disorder Drug Targets，2011，11(3)：247-261.

[6] Oh I，Yang W Y，Chung S C，et al.In vitro sortase A inhibitory and antimicrobial activity of flavonoids isolated from the roots ofSophoraflavescen[J].Arch Pharm Res，2011，34(2)：217-222.

[7] Jin J H，Kim J S，Kang SS，et al.Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of total flavonoids of the roots ofSophoraflavescens[J].J Ethnopharmacol，2010，127(3)：589-595.

[8] Cha J D，Moon S E，Kim J Y，et al.Antibacterial activity of sophoraflavanone G isolated from the roots ofSophoraflavescensagainst methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J].Phytother Res，2009，23(9)：1326-1331.

[9] Cha J D，Jeong M R，Jeong S I，et al.Antibacterial activity of Sophoraflavanone G isolated from the Roots ofSophoraflavescens[J].J Microbiol Biotechnol，2007，17(5)：858-864.

IdentificationofFlavonoidsinSophoraflavescensbyThin-layerChromatography

MA Hong-yan1,ZHU Ya-ling1,DU Jing-sheng2,Li Juan2,YANG Quan1*

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China；2.DepartmentofPharmacy,TheSecondAffiliatedHospitalofGuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510120,China)

Objective： To develop an exclusive identifying method forSophoraflavescensby thin-layer chromatography(TLC).Methods： The experiments were performed on the plates of silica gel G by using general developing agents.Results: The constituents of flavonoids(trifolirhizin,maackiain,kushenol I,kurarinone,sophoraflavanone G )inSophoraflavescenswere separated and identified respectively.Conclusion: The method is practicable repeatable,and exclusive,could be adopted as a standard for the quality control ofSophoraflavescens.

Sophoraflavescens; Flavonoids; TLC

2013-02-26)

△

廣東省高校優(yōu)秀青年創(chuàng)新人才培養(yǎng)計劃項目(LYM11079)

*

楊全，副教授，E-mail：yangquan7208@vip.163.com