安腎丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚洪泉，馬玉梅，李巖

(1.四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000；2.深圳市泰康制藥有限公司，廣東 深圳 518110；3.吉林省腦科醫(yī)院，吉林 四平 136000)

安腎丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚洪泉1*，馬玉梅2，李巖3

(1.四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000；2.深圳市泰康制藥有限公司，廣東 深圳 518110；3.吉林省腦科醫(yī)院，吉林 四平 136000)

目的：為了更好地控制安腎丸質(zhì)量，建立了新的安腎丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用HPLC測(cè)定安腎丸中苦杏仁苷的含量。采用TLC對(duì)制劑中的肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂、白術(shù)分別進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：苦杏仁苷在10.25～512.5 μg線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率98.91%，RSD=0.48%。TLC可以鑒別出肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂、白術(shù)的特征斑點(diǎn)。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可有效地控制安腎丸的質(zhì)量。

安腎丸；HPLC；TLC；苦杏仁苷

安腎丸收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第二冊(cè)，由巴戟天、肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂、白術(shù)、山藥、桃仁等12味中藥組成，具有補(bǔ)腎散寒功效。用于腎不納氣，濕寒侵襲引起的夢(mèng)遺滑精，腎囊濕冷，遺淋白濁，臍腹作痛，精神倦怠，健忘失眠，腰腿酸痛，頭暈耳鳴，二便不利[1]。為控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，參照文獻(xiàn)[2-4]，采用TLC對(duì)本制劑中的肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂、白術(shù)分別進(jìn)行了鑒別。處方中的桃仁主要有活血祛瘀，潤腸通便，止咳平喘的功效[5]。桃仁中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法有高效液相色譜法[6-8]。本研究通過索氏提取器提取出有效成分苦杏仁苷后采用高效液相色譜法測(cè)定，本方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、快速，使產(chǎn)品的質(zhì)量得到有效的控制，保證了臨床療效。

1 材料

1.1 儀器

Agilengt 1100高效液相色譜儀(配Agilengt 1311A泵、Agilengt 1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1314A VWD檢測(cè)器、G1316A柱溫箱)；ChemStation色譜工作站；BK-360A超聲波清洗機(jī)(360 W，濟(jì)南巴克超聲波科技有限公司)；梅特勒AG135型電子天平；薄層層析用硅膠G薄層板(青島海洋生物制品廠)，薄層層析用硅膠GF254薄層板(青島海洋化工廠)。

1.2 試藥

安腎丸(北京同仁堂制藥有限公司，批號(hào)：20120201，20120301，20120601)?？嘈尤受諏?duì)照品(批號(hào)：110820-201004，含量：93.6%)，松果菊苷對(duì)照品(批號(hào)：111670-200503)，毛蕊花糖苷對(duì)照品(批號(hào)：111530-200706)，補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(批號(hào)：110739-200511)，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(批號(hào)：110738-200309)，白術(shù)對(duì)照藥材(批號(hào)： 120925-201109)，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 肉蓯蓉 取安腎丸粉末5 g，加甲醇30 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液濃縮至近干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取松果菊苷對(duì)照品、毛蕊花糖苷對(duì)照品，加甲醇分別制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。將安腎丸方中去掉肉蓯蓉，同法制備和處理作為陰性對(duì)照液。照《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇-醋酸-水(2∶1∶7)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照中無此熒光斑點(diǎn)，見圖1。

1.松果菊苷、毛蕊花糖苷對(duì)照品；2～4.安腎丸供試品；5.陰性對(duì)照品圖1 肉蓯蓉薄層鑒別圖

2.1.2 補(bǔ)骨脂 取安腎丸研細(xì)，稱取粉末5 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。將安腎丸方中去掉補(bǔ)骨脂，同法制備和處理作為陰性對(duì)照液。照《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的兩個(gè)藍(lán)白色熒光斑點(diǎn)，而陰性樣品溶液在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無熒光斑點(diǎn)，見圖2。

1.補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品；2～4.安腎丸供試品;5.陰性對(duì)照品圖2 補(bǔ)骨脂薄層鑒別圖

2.1.3 白術(shù) 取安腎丸，研細(xì)，稱取粉末5 g，加正己烷2 mL，超聲處理15 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。將安腎丸方中去掉白術(shù)，同法制備和處理作為陰性對(duì)照液。照《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB試驗(yàn)，吸取上述新制備的3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)乙酸乙酯(50∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)(蒼術(shù)酮)，而陰性樣品溶液在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)，見圖3。

1.白術(shù)對(duì)照藥材；2～4.安腎丸供試品；5.陰性對(duì)照品圖3 白術(shù)薄層鑒別圖

2.2 苦杏仁苷的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)。溫度：30℃。流動(dòng)相：甲醇-水(20∶80)。檢測(cè)波長:210 nm。進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對(duì)照品10.25 mg，置100 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含苦杏仁苷100 μg的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取安腎丸研細(xì)，精密稱取3.023 6 g，置索氏提取器中，加石油醚(60～90 ℃)50 mL，加熱回流3 h，放冷，濾過，棄去石油醚液，藥渣及濾紙揮干溶劑，加入70%甲醇50 mL，加熱回流3 h，提取液濃縮至5 mL，用50%甲醇定容至100 mL容量瓶中，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.2.4 空白試驗(yàn) 按處方比例制成缺桃仁的陰性樣品，照2.2.3項(xiàng)下方法制備缺桃仁的陰性對(duì)照品溶液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件對(duì)陰性對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果在苦杏仁苷保留時(shí)間位置上陰性對(duì)照品溶液均未見色譜峰，表明其他藥物不干擾指標(biāo)成分的含量測(cè)定，見圖4。

A.苦杏仁苷對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照品圖4 安腎丸及對(duì)照品HPLC圖譜

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取2.2.2項(xiàng)下的苦杏仁苷對(duì)照品溶液1，2，5，10，15，50 μL，注入液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件，記錄峰面積，并以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=14 449X+5.143 8(r=0.999 9)，表明苦杏仁苷在10.25～512.5μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20120201)的安腎丸，平行操作取6份，精密稱定，按2.2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果苦杏仁苷的平均含量為1.83 mg·g-1，RSD=0.58%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取2.2.3項(xiàng)下的樣品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件，每隔2 h測(cè)量1次，記錄峰面積值，得出苦杏仁苷的RSD=0.59%，表明溶液在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.2.8 精密度試驗(yàn) 取2.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣6次，每次10 μL，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得峰面積值，得出苦杏仁苷的RSD=0.98%，表明實(shí)驗(yàn)所用儀器精密度良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20120201)的安腎丸細(xì)粉約3.3 g(苦杏仁苷的含量為1.83 mg·g-1)平行操作取6份，精密稱定，分別精密加入苦杏仁苷對(duì)照品6.04 mg，按2.2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 苦杏仁苷加樣回收率試驗(yàn)

2.2.10 樣品含量測(cè)定 按上述方法測(cè)定3批樣品(20120201，20120301，20120601)，按上述方法測(cè)定苦杏仁苷的含量，結(jié)果分別為1.83，1.80，1.85 mg·g-1。

3 討論

選擇有特征斑點(diǎn)和對(duì)照品的中藥進(jìn)行定性鑒別，保證了檢驗(yàn)結(jié)果具有代表性。比較了多種含量測(cè)定用供試品的處理方法，參考《中國藥典》2010年版一部進(jìn)行了提取，但由于還有其他中藥，樣品分析時(shí)分離度沒有達(dá)到要求，說明沒有有效地除去雜質(zhì)，分離不完全。為了目標(biāo)成分提取完全，我們采用了索氏提取，先用石油醚(60～90 ℃)溶液除去一些雜質(zhì)，再用70%甲醇提取目標(biāo)成分，以除去極性強(qiáng)的雜質(zhì)。建立的高效液相色譜對(duì)處理好的樣品進(jìn)行分析，整個(gè)樣品分析過程雜質(zhì)峰較少，分離度好，精密度高，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性都很好。

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第二冊(cè).1990：105.

[2] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:75.

[3] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：174.

[4] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：95.

[5] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：261.

[6] 王友蘭，李紅兵，華玉琴.HPLC法測(cè)定桃仁中苦杏仁苷的含量[J].中國藥師，2002，5(9)：550-551.

[7] 韋志英，楊志麗，陸海琳，等.HPLC法測(cè)定桃仁配方顆粒中苦杏仁苷的含量[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，13(4)：49-50.

[8] 葉晶晶.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地桃仁中苦杏仁苷的含量[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29(1)：206-208.

StudyonQualityStandardforAnshenWan

TAN Hong-quan1，MA Yu-mei2，LI Yan3

(1.SipingInstituteforFoodandDrugControl，Siping136000，China； 2.ShenzhenTaiKangPharmacyCo.，Ltd，Shenzhen518110，China；3.JilinBrainHospital，Siping136000，China)

Objective：To better control the quality of Anshen Wan，establish a new quality standard.Methods：The contents of amygdalin in Anshen Wan were deterrmined by HPLC.Cistanches Herba, Psoraleae Fructus and Atractylodis Macrocephalae Rhizoma were identified by TLC.Results：The resolutons of the determined peaks of Amygdalin were fine at the lineatity range of 10.25～512.5 μg.The average recoveries were 98.91% with RSD 0.48%，for Amygdalin respectively.The characteristic spots of Cistanches Herba, Psoraleae Fructus and Atractylodis Macrocephalae Rhizoma could be detected by TLC.Conclusion：The method is simple，accurate and good in stability，specificity and repeatability，can be used to control quality of Anshen Wan.

Anshen Wan；HPLC；TLC；Amygdalin

2012-10-09)

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譚洪泉，E-mail：16048034@qq.com