谷紅注射液的過敏性研究

張博琛，張志，鄭湘臨*

(1.山東大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，山東 濟南 250100；2.通化谷紅制藥有限公司，吉林 梅河口 135000)

谷紅注射液的過敏性研究

張博琛1，張志2，鄭湘臨2*

(1.山東大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，山東 濟南 250100；2.通化谷紅制藥有限公司，吉林 梅河口 135000)

目的：評價谷紅注射液誘發(fā)過敏反應(yīng)的可能性。方法：通過腹腔注射0.5 mL/只受試制劑致敏豚鼠，14 d后靜脈注射2 mL/只受試制劑激發(fā)豚鼠，評價豚鼠全身主動過敏反應(yīng)的風(fēng)險；另外通過腹腔注射受試制劑致敏大鼠，14 d后收集大鼠血清，皮下注射該血清用以致敏正常大鼠，24 h后靜脈注射受試制劑激發(fā)大鼠，評價大鼠皮膚被動過敏反應(yīng)的風(fēng)險。結(jié)果：均未見過敏反應(yīng)發(fā)生。結(jié)論：受試制劑谷紅注射液誘發(fā)動物產(chǎn)生過敏反應(yīng)的風(fēng)險較小。

谷紅注射液；全身主動過敏；皮膚被動過敏

谷紅注射液為乙酰谷酰胺和紅花提取物制成的滅菌水溶液，具有抗氧自由基、抗血小板聚集、舒張血管的作用，改善微循環(huán)，改善神經(jīng)細胞代謝，維持神經(jīng)應(yīng)激能力，改善腦功能，還可改善血流變及降低血脂。臨床廣泛用于腦血管疾病、腦外傷、神經(jīng)外科手術(shù)后、冠心病等[1]。但中藥注射劑成分較復(fù)雜，原料及提取工藝不穩(wěn)定，很多小分子物質(zhì)沒有相應(yīng)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，臨床對中藥注射劑變態(tài)反應(yīng)需引起足夠重視[2]。谷紅注射液在臨床使用過程中亦發(fā)現(xiàn)過敏性休克等不良反應(yīng)[3-7]。本研究根據(jù)I型變態(tài)反應(yīng)原理，分析谷紅注射液誘導(dǎo)試驗動物引起過敏反應(yīng)的可能性及原因。

1 材料

1.1 試藥

谷紅注射液(規(guī)格：5 mL，批號：20120814，通化谷紅制藥有限公司)、卵白蛋白(Sigma，批號：A5253)、吸附百白破聯(lián)合疫苗(武漢生物制品研究所，批號：201100603-1)、硫化鈉(上海統(tǒng)亞化工科技發(fā)展有限公司，批號：080108)、伊文斯藍(北京化學(xué)試劑公司，批號：000525)。

1.2 動物

10周齡雄性Hartley豚鼠，體重300～400 g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(遼)2010-0001；10周齡Wistar大鼠，雌雄兼用，體重250～300 g，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(遼)2008-0005。

2 方法

2.1 豚鼠全身主動過敏試驗[8-11]

2.1.1 豚鼠致敏 受試動物隨機分為陽性對照組、陰性對照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組，每組6只。陽性對照組腹腔注射1%卵白蛋白0.5 mL/只；陰性對照組腹腔注射0.9%氯化鈉溶液0.5 mL/只；谷紅注射液低劑量組腹腔注射谷紅注射液0.9%氯化鈉溶液2倍稀釋液0.5 mL/只；谷紅注射液高劑量組腹腔注射谷紅注射液0.5 mL/只(即低劑量組的2倍劑量)。上述給藥，隔日1次，共3次。

2.1.2 豚鼠激發(fā) 致敏末次給藥后第14天一次性靜脈注射2 mL/只相應(yīng)藥物進行激發(fā)。

2.1.3 結(jié)果評價 激發(fā)后觀察癥狀3 h，參照表1，反映級數(shù)達2級(含2級)以上，認為該受試物出現(xiàn)過敏反應(yīng)。

表1 過敏癥狀評價表

2.2 大鼠皮膚被動過敏試驗[8，11-12]

2.2.1 抗血清的制備 受試動物隨機分為陽性對照組、陰性對照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組，每組6只，雌雄各半。陽性對照組腹腔注射5 mg·mL-1卵白蛋白溶液3.57 mL·kg-1，及白百破疫苗0.5 mL/只(含百日咳疫苗效價≥4.0 IU，僅第一次使用)；陰性對照組腹腔注射0.9%氯化鈉溶液3.57 mL·kg-1；谷紅注射液低劑量組腹腔注射谷紅注射液0.9%氯化鈉溶液2倍稀釋液3.57 mL·kg-1(由成人臨床最大用量換算得)；谷紅注射液高劑量組腹腔注射谷紅注射液3.57 mL·kg-1(即低劑量組的2倍劑量)。上述給藥，隔日1次，共3次。14 d后采血，2 000 r·min-1離心10 min，分離血清。

2.2.2 大鼠被動致敏 上述各組抗血清以0.9%氯化鈉溶液稀釋成1∶2，1∶8，1∶32 3種不同濃度。取正常大鼠24只，隨機分為陽性對照組、陰性對照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組，每組6只，雌雄各半，在其背中線兩側(cè)預(yù)先脫毛(3×4)cm2共3處，皮內(nèi)注射相應(yīng)組別的3種不同濃度抗血清各0.1 mL。

2.2.3 大鼠激發(fā) 大鼠被動致敏24 h后，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的伊文思蘭染料(1%)共1 mL。

2.2.4 結(jié)果評價 30 min后斷頭處死各組動物，剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)層的斑點大小。皮膚內(nèi)層斑點直徑大于5 mm者判定為被動過敏陽性。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS 16.0軟件包，大鼠被動過敏陽性率差異采用x2檢驗，定義P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 受試藥物對受試動物體重變化的影響

全身主動過敏試驗過程中，各組豚鼠體重變化趨勢無統(tǒng)計學(xué)意義，見圖1；制備抗血清的各組大鼠在試驗過程中體重變化趨勢無統(tǒng)計學(xué)意義，見圖2。

3.2 豚鼠全身主動過敏反應(yīng)

給藥激發(fā)后，陽性對照組6只豚鼠均出現(xiàn)痙攣、抽搐、休克死亡；陰性對照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組均未見明顯反應(yīng)。評分結(jié)果見表2。

圖1 谷紅注射液對豚鼠體重變化的影響

圖2 谷紅注射液對大鼠體重變化的影響

表2 谷紅注射液主動過敏試驗

3.3 大鼠皮膚被動過敏反應(yīng)

試驗中陰性對照組和谷紅注射液低、高劑量組受試動物各滴度皮膚內(nèi)層斑點直徑均小于5 mm，陽性率均為0；陽性對照組受試動物各滴度皮膚內(nèi)層斑點直徑均大于5 mm，陽性率均為100%，見圖3；谷紅注射液低、高劑量組各滴度抗血清致皮膚被動過敏的陽性率顯著低于陽性對照組(P=0.002)；而谷紅注射液低、高劑量組與陰性對照組比較，陽性率均為0，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表3。

圖3 谷紅注射液大鼠皮膚被動過敏試驗反應(yīng)

表3 大鼠皮膚被動過敏試驗結(jié)果/mm

注：(1)括號內(nèi)數(shù)字為陽性率；(2)*表示與陽性對照組比較，P=0.002；△表示與陰性對照組比較，陽性率均為0，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

4 討論

臨床上藥物過敏反應(yīng)常見遲發(fā)型過敏反應(yīng)(Ⅳ型)，但癥狀常常較輕，易于控制，而過敏性休克(屬Ⅰ型過敏反應(yīng))一旦發(fā)生，若處置不當(dāng)，常常危及生命。因此本研究著重考察谷紅注射液導(dǎo)致Ⅰ型過敏反應(yīng)發(fā)生的可能性。

研究以原國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》為依據(jù)，結(jié)合受試制劑具體情況，設(shè)計實驗方案。全身主動過敏試驗是根據(jù)藥物初次進入體內(nèi)，可刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，當(dāng)藥物再次進入體內(nèi)時與其抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，導(dǎo)致肥大細胞釋放組胺等過敏介質(zhì)，從而引起過敏反應(yīng)。皮膚被動過敏試驗(PCA)則是將致敏動物的血清皮內(nèi)注射于正常動物，血清中IgE抗體與肥大細胞受體結(jié)合，使動物被動致敏，當(dāng)應(yīng)用致敏抗原激發(fā)時，引起局部肥大細胞釋放過敏介質(zhì)，從而使局部血管的通透性增加，激發(fā)時一同注入的染料可于皮內(nèi)注射部位滲出，形成藍斑。二者均可評價受試藥品誘發(fā)動物產(chǎn)生Ⅰ型過敏反應(yīng)的可能性。

通過豚鼠全身主動過敏試驗及大鼠皮膚被動過敏試驗研究受試制劑谷紅注射液誘發(fā)動物產(chǎn)生Ⅰ型過敏反應(yīng)的可能性，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)谷紅注射液誘發(fā)試驗動物出現(xiàn)過敏反應(yīng)現(xiàn)象，與陽性對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而與0.9%氯化鈉溶液陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明該制劑誘發(fā)Ⅰ型過敏反應(yīng)的風(fēng)險較小。雖然谷紅注射液引起變態(tài)反應(yīng)的病例少見，但谷紅注射液中的紅花提取液本身成分復(fù)雜，含有鞣質(zhì)、酶、皂苷、角質(zhì)蛋白等多種大分子物質(zhì)，靜脈滴注后，上述物質(zhì)作為抗原，具有高度致敏活性，易導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。因此，臨床使用本品前應(yīng)詳細詢問患者有無紅花制劑過敏史；另外，對有過敏體質(zhì)患者應(yīng)慎用本品；并且在用藥過程中，應(yīng)密切觀察，加強用藥監(jiān)護，防止過敏反應(yīng)的發(fā)生，以保證用藥安全。

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AnaphylacticResponseofSafflowerExtractandAceglutamideInjection

ZHANG Bo-chen1，ZHANG Zhi2，ZHENG Xiang-lin2*

(1.ChemistryandChemicalEngineeringCollegeofShandongUniversity，Jinan250100，China；2.TonghuaguhongPharmaceuticalCompanyLimited，Meihekou135000，China)

Objective:To evaluate the probability of anaphylactic response induced by Safflower Extract and Aceglutamide Injection.Methods：In this study，every cavia cobaya was given the product 0.5 mL by intraperitoneal injection for sensitization，and excitation was performed 14 days later by intravenous injecting 0.2 mL the same product，to evaluate the risk of active systemic anaphylaxis(ASA)； Every rat was given the product by intraperitoneal injection for sensitization，and its serum was collected 14 days later to give normal rats by intraperitoneal injection.The excitation of normal rats was done after 24 hours for evaluate the risk of passive cutaneous anaphylaxis(PCA).Results：No anaphylactic response induced by the product was found in this study.Conclusion：Safflower Extract and Aceglutamide Injection has little probability of anaphylactic response.

Safflower Extract and Aceglutamide Injection；ASA；PCA

2012-12-05)

*

鄭湘臨，E-mail：df-zhangxianglin@163.com