青蒿不同部位薄層鑒別比較研究

吳蜀瑤，李敏，王佳黎

(1.江西中醫(yī)學(xué)院 姚荷生研究室，江西 南昌 330004；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137；3.四川大學(xué)，四川 成都 610065)

青蒿不同部位薄層鑒別比較研究

吳蜀瑤1，李敏2*，王佳黎3

(1.江西中醫(yī)學(xué)院 姚荷生研究室，江西 南昌 330004；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137；3.四川大學(xué)，四川 成都 610065)

目的：通過收集青蒿植株不同部位的藥材，對其主要化學(xué)成分進(jìn)行定性研究，為黃花蒿藥材資源的開發(fā)與利用奠定基礎(chǔ)。方法：采用薄層鑒別法。結(jié)果：所建立的方法適用于青蒿不同部位的化學(xué)成分鑒別。結(jié)論：青蒿子、青蒿地上部分以及青蒿葉成分最為相似；花所含的揮發(fā)油種類最多，莖最少；莖可能不含或是含有極微量的青蒿素。其中，青蒿子、花、莖的薄層鑒別屬首次報(bào)道。

青蒿；薄層鑒別；揮發(fā)油；黃酮；香豆素；倍半萜內(nèi)酯

青蒿為傳統(tǒng)清熱解暑要藥，來源于菊科蒿屬(Artemisia)植物黃花蒿ArtemisiaannuaL.的干燥地上部分[1]，味苦、辛，性寒，具清虛熱，除骨蒸，解暑熱，截瘧，退黃功能，用于溫邪傷陰，夜熱早涼，陰虛發(fā)熱，骨蒸勞熱，暑邪發(fā)熱，瘧疾寒熱，濕熱黃疸[2]。青蒿作為一個(gè)截瘧的常用中藥，已在臨床中廣泛使用，除此之外，青蒿子的藥用價(jià)值也在古代本草中有所體現(xiàn)[3-4]?！侗静菥V目》青蒿條下提到“青蒿子甘、冷、無毒。功用和青蒿葉相同”[5]。《江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1989年版)亦收載了青蒿子?，F(xiàn)代研究表明，青蒿中主要含有揮發(fā)油、黃酮類、香豆素類以及倍半萜內(nèi)酯類等成分[6]。本文首次對青蒿葉、花、莖、子以及地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行了薄層定性鑒別的比較研究，既初步探索了黃花蒿主要有效成分在以上部位的分布情況，也為更好地利用和挖掘青蒿的藥用價(jià)值奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

BP121S電子天平(德國賽多利斯股份公司)；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；DFT-200手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市大德中藥機(jī)械有限公司)。

山柰素對照品、東莨菪內(nèi)酯對照品、青蒿素對照品(中國食品藥品檢定研究院)。

青蒿藥材采自四川省安岳縣青蒿基地，經(jīng)鑒定為菊科植物黃花蒿ArtemisisaannuaL.的干燥全株。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油類成分薄層鑒別

2.1.1 方法 取粉碎過三號篩的青蒿子、青蒿地上部分以及葉、花、莖樣品約100 g，稱定重量，置1 000 mL圓底燒瓶中，加水適量與沸石數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶內(nèi)為止。置電熱套中緩緩加熱煮沸，并保持微沸5 h，至測定器內(nèi)油量不再增加，停止加熱，放置1 h以上，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出后，再將油裝入小玻璃瓶中。在裝有揮發(fā)油的玻璃瓶中加入等量石油醚，配制成5個(gè)樣品溶液，作為供試品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液各5～10 μL，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-正己烷-乙酸乙酯(7∶1∶1)為展開劑展開，展距15 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置日光下檢視。

2.1.2 結(jié)果 供試品色譜中，青蒿子在與青蒿地上部分相對應(yīng)的色譜位置上，具有相同顏色的斑點(diǎn)。但青蒿子個(gè)別位置的斑點(diǎn)比地上部分的大，顏色也較深。另外，在比較青蒿子和花、葉、莖的色譜斑點(diǎn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，子與葉的斑點(diǎn)基本相同，花的色譜斑點(diǎn)明顯較多，顏色也較深，青蒿莖的斑點(diǎn)最少，提示莖所含的揮發(fā)油的種類可能較少，見圖1。

石油醚-正己烷-乙酸乙酯(7∶1∶1)1.花；2.葉；3.地上部分；4.子；5.莖圖1 青蒿中揮發(fā)油薄層色譜圖

2.2 黃酮類成分薄層鑒別

2.2.1 方法 分別取青蒿子、青蒿地上部分以及葉、花、莖粉末約1 g，加80%甲醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，用乙醚振搖提取2次，每次10 mL，棄乙醚液，水液加稀鹽酸10 mL，水浴加熱1 h，迅速冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，用水30 mL洗滌，棄水液，乙酸乙酯液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取山柰素對照品，加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(9∶1∶0.5)為展開劑，上行展開，展距14 cm，取出，晾干，噴以3% AlCl3溶液，于105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈下(365 nm)檢視。

2.2.2 結(jié)果 青蒿子提取液以及地上部分、花、葉、莖的提取液在與山柰素對照品相對應(yīng)的位置均顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，見圖2。

乙酸乙酯-甲酸-水(9∶1∶0.5)1.葉；2.花；3.地上部分；4.莖；5.子；6.山柰素圖2 青蒿中山柰素薄層色譜圖

2.3 香豆素類成分薄層鑒別

2.3.1 方法 分別稱取青蒿子、青蒿地上部分以及葉、花、莖粉末約0.5 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇20 mL，密塞，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取東莨菪內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(2∶3∶0.05)為展開劑，上行展開，展距13 cm，取出，晾干，置紫外光燈下(365 nm)檢視。

2.3.2 結(jié)果 青蒿子提取液以及地上部分、花、葉、莖的提取液在與東莨菪內(nèi)酯對照品相對應(yīng)的位置均顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，見圖3。

石油醚-乙酸乙酯-甲酸(2∶3∶0.05)1.葉；2.花；3.地上部分；4.莖；5.子；6.東莨菪內(nèi)酯圖3 青蒿中東莨菪內(nèi)酯薄層色譜圖

2.4 倍半萜內(nèi)酯類成分薄層鑒別

2.4.1 方法 分別取青蒿子、青蒿地上部分以及葉、花、莖粉末3 g，加石油醚(60～90 ℃)50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)诱和?0 mL，使溶解，用20%乙腈溶液振搖提取3次，每次10 mL，合并乙腈液，蒸干，殘?jiān)右掖?.5 mL溶解，作為供試品溶液。另取青蒿素對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照《中國藥典》2005年版一部青蒿鑒別項(xiàng)下的薄層鑒別方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別吸取供試品溶液和對照品溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚(3∶2)為展開劑，上行展開，展距10 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈下(365 nm)檢視。

2.4.2 結(jié)果 青蒿子提取液和地上部分、花、葉的提取液在與青蒿素對照品相對應(yīng)的色譜位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。而青蒿莖提取液在與青蒿素對照品相對應(yīng)的色譜位置上未顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖4。

石油醚-乙醚(3∶2)1.葉；2.花；3.地上部分；4.莖；5.子；6.青蒿素圖4 青蒿中青蒿素薄層色譜圖

3 小結(jié)與討論

本實(shí)驗(yàn)對青蒿子的揮發(fā)油類、黃酮類、香豆素類和倍半萜內(nèi)酯類成分進(jìn)行了薄層定性鑒別研究，分別選擇了以山柰素、東莨菪內(nèi)酯以及青蒿素為對照，建立了薄層鑒別方法。同時(shí)，不僅比較了青蒿子和青蒿傳統(tǒng)藥用部位——地上部分在以上成分中的異同，也比較了黃花蒿植株不同器官——葉、花、莖、子主要成分的差異。

由檢測結(jié)果可知，青蒿子和青蒿地上部分在揮發(fā)油類、黃酮類、香豆素類和倍半萜內(nèi)酯類成分上的差異不顯著，兩者均含山柰素、東莨菪內(nèi)酯和青蒿素。

在不同器官的比較中，青蒿子和青蒿葉的成分最為相似。在揮發(fā)油的薄層色譜鑒別中，青蒿花所含的揮發(fā)油種類明顯較多，莖所含的揮發(fā)油種類最少；在山柰素和東莨菪內(nèi)酯的薄層色譜鑒別中，四者沒有太大區(qū)別；而在青蒿素的薄層色譜圖中可以看出，青蒿的莖可能不含或是含有極微量的青蒿素，無法用TLC法鑒別出來。由此可以看出，無論是在主要成分的種類上還是在有效成分的含量上，莖都與葉、花、子有著明顯的差異。

本實(shí)驗(yàn)未單獨(dú)對青蒿子進(jìn)行鑒別研究，而是采用將其與青蒿地上部分以及他植株器官進(jìn)行比較的方法，在鑒別其主要成分的同時(shí)，分析了子與地上部分、葉、花、莖的相同點(diǎn)和不同點(diǎn)，為研究它們的不同藥效與化學(xué)成分的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。

[1] 肖培根.新編中藥志[M].第3卷.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001：154.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：184.

[3] 明·倪朱謨.本草匯言[M].點(diǎn)校本.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2004：199.

[4] 清·沈金鰲.要藥分劑[M].第10卷.上海：上海衛(wèi)生出版社，1958.

[5] 李時(shí)珍.本草綱目[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，1998：410.

[6] 康廷國.中藥鑒定學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003：438.

AComparativeStudyonTLCIdentificationinDifferentPartsofArtemisiaAnnua

WU Shu-yao1, LI Min2*, WANG Jia-li3

(1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China;2.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu611137,China;3.SichuanUniversity,Chengdu610065,China)

Objective：To research the main chemical composition ofArtemisiaannuathrough collecting different parts of its herbs, and provide scientific basis for further development and utilization ofArtemisiaannuaresources.Methods: TLC identification. The plant was identified by morphological and histological identification, microscopic identification methods.Results: The method established is suitable for the identification of chemical composition in different parts ofArtemisiaannua.Conclusion: The constituents of fruit, leaf and aerial parts ofArtemisiaannuaare most similar, flowers contains most types of volatile oil while stems contains least. The stem may not contain or contain a very small amount of artemisinin. The TLC identification ofArtemisiaannuafruit, flowers, and stems are reported for the first time.

Artemisiaannua; TLC; Volatile oil; Flavonoids; Coumarin; Sesquiterpene lactone

2012-09-27)

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李敏，E-mail：028limin@163.com