紫椴花抗炎鎮(zhèn)痛作用有效部位的研究

馬微微，王振月，劉奐，穆立薔

(1.東北林業(yè)大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

紫椴(Tilia amurensis Rupr.)為椴樹科(Tiliaceae)椴樹屬落葉闊葉喬木［1］，紫椴的花及花蕾具有清熱解表之功，對感冒、發(fā)熱，腎盂腎炎，口腔炎和喉炎等具有很好的治療作用［2］，在民間被廣泛使用。本研究前期對紫椴花的抗炎鎮(zhèn)痛活性做了初步研究，確定其70%乙醇提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用［3］。為進一步明確其藥理作用的有效成分，本實驗對紫椴花抗炎鎮(zhèn)痛作用的有效部位進行了研究，明確紫椴花藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為深入開發(fā)紫椴資源的藥用價值奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 紫椴花 采自東北林業(yè)大學(xué)校園，經(jīng)東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院穆立薔教授鑒定為椴樹科(Tiliaceae)椴樹屬植物紫椴(Tilia amurensis Rupr.)的花及花蕾。

1.2 樣品的制備 將采下的紫椴花及花蕾陰干，加10倍量70%乙醇浸泡12h，回流提取2次，每次2h，合并提取液，濃縮、干燥、粉碎成粉。將粗粉用蒸餾水溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收有機試劑，分別得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和水溶物4個部分的干燥粉末。

1.3 藥品及試劑 阿司匹林腸溶片(亞寶藥業(yè)太原制藥有限公司，批號070508);冰乙酸(天津市耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司，批號20080227);二甲苯(天津市津東天正精細化學(xué)試劑廠，批號20080411);乙醚(天津富宇化學(xué)試劑廠，批號20080516);杜冷丁(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院);石油醚、乙酸乙酯、正丁醇均為分析純。

1.4 動物 昆明種小白鼠，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)提供，動物許可證號為P00102005。

2 方法

2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響［4－5］

取昆明小鼠72只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，隨機分為6組，模型組(蒸餾水20mL/kg)、阿司匹林(0.20g/kg)、石油醚部位(0.48g/kg)、乙酸乙酯部位(0.24g/kg)、正丁醇部位(1.78g/kg)和水部位(2.26g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天，最后一次給藥后1h，在小鼠右耳背腹兩側(cè)均勻涂抹二甲苯(20μL/只)致炎，1h后脫頸處死，將小鼠左右耳分別沿耳廓基線剪下，重疊對齊，用直徑為7mm的打孔器打孔，得到兩耳圓形組織塊，分別稱重。計算右耳與左耳重量差及腫脹抑制率。

腫脹度=右耳重－左耳重

腫脹抑制率(%)=(空白組腫脹度－給藥組腫脹度)/空白組腫脹度×100%

2.2 對紙片引起小鼠肉芽增生的影響［4－5］

取昆明小鼠72只，雌雄各半，體質(zhì)量(24±2)g，隨機分為6組，將小鼠用乙醚麻醉，在其背部皮下左右各埋植一片濾紙片，縫合傷口，24h后給藥?？瞻捉M(蒸餾水20mL/kg)、陽性對照組(阿司匹林0.20g/kg)、石油醚部位(0.48g/kg)、乙酸乙酯部位(0.24g/kg)、正丁醇部位(1.78g/kg)和水部位(2.26g/kg)。連續(xù)灌胃給藥10天后，將紙片取出，稱重，減去原有紙片重量，即為肉芽凈重。

2.3 對醋酸所致小鼠疼痛的影響［4－5］

取昆明小鼠72只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，隨機分為6組，模型組(蒸餾水20mL/kg)、阿司匹林(0.20g/kg)、石油醚部位(0.48g/kg)、乙酸乙酯部位(0.24g/kg)、正丁醇部位(1.78g/kg)和水部位(2.26g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天，最后一次給藥后30min，腹腔注射 0.7%冰醋酸 0.1mL/10g。觀察15min之內(nèi)小鼠扭體次數(shù)及疼痛潛伏期，計算疼痛抑制率。

疼痛抑制率(%)=(空白組扭體次數(shù)－給藥扭體次數(shù))/空白組扭體次數(shù)×100%

3 結(jié)果

3.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

正丁醇部位(1.78g/kg)和水部位(2.26g/kg)對二甲苯致小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用，能明顯減輕小鼠耳腫脹度，與模型組比較差異極顯著(P＜0.01)，腫脹抑制率均大于50%;而乙酸乙酯部位(0.24g/kg)對其亦有抑制作用，與模型比較，差異顯著(P＜0.05)，但腫脹抑制率小于50%，結(jié)果見表1。

表1 各萃取物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(±s，n=12)

表1 各萃取物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(±s，n=12)

注:與模型組比較，＊＊P＜0.01，*P＜0.05。

組別劑量(g/kg ) 耳片重量(mg) 腫脹度(mg)腫脹抑制率(%)左耳重 右耳重模型組 － 12.7 ±0.8 22.5 ±4.9 11.8 ±3.2 －阿司匹林 0.2 12.4 ±0.8 15.2 ±1.9 2.8 ±1.8＊＊ 76.44石油醚 0.48 12.6 ±1.1 21.8 ±6.4 9.2 ±5.6 22.23乙酸乙酯 0.24 13.0 ±0.7 21.0 ±4.2 8.0 ±4.7* 32.40正丁醇 1.78 9.9 ±0.9 15.4 ±3.8 5.6 ±3.2＊＊ 53.08水2.26 9.8 ±0.6 14.7 ±2.7 4.9 ±2.8＊＊58.61

3.2 對紙片引起小鼠肉芽增生的影響

正丁醇(1.78g/kg)部位具有一定的抗增生炎癥作用，與模型組差異顯著(P＜0.05)，結(jié)果見表2。

表2 各萃取物對紙片肉芽腫的影響(±s，n=12)

表2 各萃取物對紙片肉芽腫的影響(±s，n=12)

注:與模型組比較，＊＊P＜0.01，*P＜0.05。

組別 劑量(g/kg)肉芽重(mg)濕重 干重模型組48.5 ±14.3 12.0 ±2.8阿司匹林 0.20 37.5±6.9＊＊ 9.9±1.4＊＊石油醚 0.48 44.3 ±10.8 10.8 ±2.0乙酸乙酯 0.24 41.2 ±10.2 10.0 ±1.7正丁醇 1.78 37.9 ±9.2* 9.8 ±1.9*水－2.26 53.0 ±12.5 13.1 ±3.1

3.3 對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

正丁醇(1.78g/kg)部位、水(2.26g/kg)部位具有抑制醋酸所致小鼠疼痛的作用，其小鼠扭體次數(shù)明顯小于模型組(P＜0.01)。正丁醇(1.78g/kg)部位對小鼠疼痛潛伏期較長，與對照組相比，具有顯著性差異(P＜0.01)，結(jié)果見表3。

表3 各萃取物對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(±s，n=12)

表3 各萃取物對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(±s，n=12)

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 劑量(g/kg)15min扭體次數(shù)疼痛抑制率%疼痛潛伏期(s)模型組 － 22±15 － 296.9 ±147.1阿司匹林 0.20 4±2＊＊ 78.70 617.1±203.6＊＊石油醚 0.96 15 ±8 20.21 290.4 ±154.7乙酸乙酯 0.48 13 ±10 26.56 318.3 ±155.4正丁醇 3.55 6±4＊＊ 67.52 437.1±182.3＊＊水4.51 8 ±5*56.86 390.4 ±142.4

4 討論

二甲苯致小鼠耳腫脹法、肉芽腫法、醋酸扭體法是篩選抗炎鎮(zhèn)痛藥物簡便、有效、重復(fù)率強的方法［4］。本實驗結(jié)果表明，紫椴花正丁醇(1.78g/kg)萃取物對二甲苯引起的小鼠耳腫脹、紙片引起的小鼠肉芽腫及醋酸引起的小鼠疼痛均具有顯著的抑制作用，其有效部位為正丁醇萃取物，證明了紫椴花正丁醇部位對早期炎癥、抗增生性炎癥及炎癥性疼痛均具有一定作用。紫椴花及花蕾中含有大量的黃酮化合物［6］，此類化合物具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛活性，這將為紫椴花化學(xué)成分的分析提供了良好的理論依據(jù)。

在國外椴樹屬各植物作為良好的天然藥物被廣泛使用，而在國內(nèi)，研究較少，紫椴作為東北地區(qū)的優(yōu)勢種，分布廣泛、栽培成活率較高，基于本屬植物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同程度的作用，紫椴作為中樞性神經(jīng)藥物的開發(fā)將是其進一步的研究方向。

［1］周以良.黑龍江樹木志［M］.哈爾濱:黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1986:430.

［2］國家中醫(yī)管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:4312－4313.

［3］馬微微，王振月，李足意，等.紫椴花乙醇提取物抗炎鎮(zhèn)痛的實驗研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2012，23(1):135 －136.

［4］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000.

［5］徐淑云.藥理實驗方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1982:884－911.

［6］劉立平.紫椴地上器官化學(xué)成分的初步研究［D］.哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué)，2008:6.