用鴿雞紅細(xì)胞進(jìn)行禽流感血凝抑制試驗的比較

胡祖余，王舉勇，栗 新

（安徽省六安市裕安區(qū)動物疫情測報站，安徽 六安237000）

禽流感是由A型流感病毒引起的畜禽傳染病，可導(dǎo)致養(yǎng)禽業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)損失，還可引發(fā)動物疫情傳播，甚至威脅人類健康。肉鴿養(yǎng)殖作為特種養(yǎng)禽業(yè)，接種禽流感疫苗是防控重大動物疫病的重要環(huán)節(jié)。在評價肉鴿免疫禽流感疫苗免疫效果時［1－2］，常采用國家技術(shù)監(jiān)督局出版的《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB／T18936－2003）［3］，該標(biāo)準(zhǔn)要求采用雞紅細(xì)胞作為指示細(xì)胞。禽流感病毒既可凝集雞、鴨、鵝紅細(xì)胞，也可凝集鴿紅細(xì)胞。部分地區(qū)肉鴿飼養(yǎng)量較大，鴿紅細(xì)胞的采集比較容易，那么如果用鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞進(jìn)行禽流感血凝抑制試驗是否可行，與雞紅細(xì)胞相比較結(jié)果是否一致，特進(jìn)行本次試驗。

1 材料與方法

1．1 材料 H5亞型（H5N1Re－5）禽流感滅活疫苗免疫的鵝、雞、鴿血清各20份；H5（Re－5）禽流感血凝抑制抗原（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司提供，批號：201101）；未經(jīng)禽流感疫苗免疫的1%鴿、雞紅細(xì)胞（自配）；微量振蕩器、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、移液器等。

1．2 方法 分別用雞和鴿紅細(xì)胞測定H5抗原的血凝價。采用水禽血清處理方法處理被檢血清：56℃恒溫水浴30min，再加等量1%雞或1%鴿紅細(xì)胞作用30min，3 000r／min離心3min取上清待檢。樣品HI抗體效價檢測方法參照文獻(xiàn)［1］。

1．3 試驗分組 A組：被檢血清不作處理，雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞；B組：被檢血清不作處理，鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞；C組：被檢血清用雞紅細(xì)胞處理，雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞；D組：被檢血清用雞紅細(xì)胞處理，鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞；E組：被檢血清用鴿紅細(xì)胞處理，雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞；F組：被檢血清用鴿紅細(xì)胞處理，鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞。

2 結(jié)果

2．1 用雞、鴿兩種紅細(xì)胞進(jìn)行血凝試驗（HA），測定H5抗原的血凝價都為211。

2．2 鵝血清經(jīng)分組檢測，H5HI抗體效價見表1。

表1 鵝血清H5效價分組檢測結(jié)果 （log2）

由表1可見，在檢測鵝血清禽流感抗體效價時，當(dāng)用雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞時，會出現(xiàn)非特異性凝集現(xiàn)象（A組：16／20），改用鴿紅細(xì)胞后，情況未得到改善（B組：15／20），而凝集孔數(shù)卻有所增加，且抗體效價相差較大。因此，鴿紅細(xì)胞不能解決鵝血清的非特異性凝集現(xiàn)象。在對鵝血清進(jìn)行處理后（C、D、E、F組），只有C組非特異性凝集現(xiàn)象明顯減少（2／20），且檢測結(jié)果與A組較接近；而其他3組要么凝集孔數(shù)增加（D、F組），要么檢測結(jié)果與A組差異較大（E組）。由此可見，在檢測鵝血清禽流感HI抗體時，鴿紅細(xì)胞與雞紅細(xì)胞相比，沒有任何優(yōu)越性，不適于作為指示細(xì)胞。

2．3 鴿血清經(jīng)分組檢測，H5抗體效價見表2。

表2 鴿血清H5抗體效價分組檢測結(jié)果 （log2）

由表2可見，在檢測鴿血清禽流感抗體效價時，用常規(guī)方法檢測（A組），會出現(xiàn)一定比例的非特異性凝集現(xiàn)象（8／20）；而采用鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞后，非特異性凝集現(xiàn)象全部消失（B組）；如果對鴿血清仿照水禽血清處理方法，分組處理后（C、D、E、F組），用鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞的D、F非特異性凝集現(xiàn)象全部消失，用雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞的C、E雖有非特異性凝集現(xiàn)象發(fā)生，但發(fā)生比例（4／40）和凝集孔數(shù)大大下降。從檢測值來看，用雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞的A、C、E三組偏低，比用鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞的B、D、F三組檢測值平均低一個抗體滴度，差異極顯著。所以在檢測鴿血清禽流感抗體效價時，用鴿紅細(xì)胞作指示細(xì)胞的檢測效果明顯優(yōu)于雞紅細(xì)胞。

2．4 雞血清經(jīng)分組檢測，H5抗體效價見表3。

表3 雞血清H5抗體效價分組檢測結(jié)果 （log2）

由表3可見，在檢測雞血清禽流感抗體效價時，用雞紅細(xì)胞作指示細(xì)胞的A、C、E三組結(jié)果基本一致；而用鴿紅細(xì)胞時，則不論是未對血清進(jìn)行處理的B組，還是進(jìn)行過處理的D、E組，都不可避免地出現(xiàn)了多孔的非特異性凝集現(xiàn)象，且檢測結(jié)果與A組相比，差異較大。因此，鴿紅細(xì)胞不適于用作雞血清的禽流感抗體檢測。

3 分析與討論

3．1 用雞、鴿紅細(xì)胞進(jìn)行血凝試驗時，測定抗原血凝價一致，說明禽流感抗原對兩種紅細(xì)胞的凝集能力基本相同。

3．2 通過本次試驗可以看出，鴿紅細(xì)胞除了可以作為鴿血清禽流感抗體檢測的指示細(xì)胞外，檢測其他家禽血清時，會出現(xiàn)較多的非特異性凝集現(xiàn)象，嚴(yán)重地影響了檢測結(jié)果，不適于進(jìn)行其他禽類血清的禽流感抗體檢測。

3．3 本試驗還可以看出，用鴿紅細(xì)胞檢測鴿禽流感免疫血清時，檢測效果明顯優(yōu)于雞紅細(xì)胞。這也驗證了同源紅細(xì)胞檢測同源禽免疫血清，可排除非特異性凝集現(xiàn)象，提高檢測準(zhǔn)確率［5－6］。

［1］ 胡玉軍，冉多良，左勇．不同禽流感疫苗接種肉鴿的免疫效果試驗［J］．新疆畜牧業(yè)，2010（3）：37－38．

［2］ 李興玉 ，王強(qiáng)，楊曉梅，等．禽流感（H5＋9）二價滅活疫苗對珍禽的免疫效果觀察［J］．中國人獸共患病學(xué)報，2011，27（7）：674－676．

［3］ 國家標(biāo)準(zhǔn)局．GB／T18936－2003，高致病性禽流感診斷技術(shù)［S］．

［4］ 朱燕秋，張濟(jì)培，謝海燕，等．水禽禽流感HI抗體檢測方法的探討［J］．中國獸醫(yī)雜志，2009，45（2）：42－43．

［5］ 胡祖余，徐宜芳，潘聲友，等．不同禽紅細(xì)胞對水禽禽流感血凝抑制試驗結(jié)果的影響［J］．中國家禽，2007（5）：38．