表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子的乳酸球菌對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腸道形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的影響

槐玉英，紀(jì)少麗，李 明，趙海全，劉為民，梁梓森

［1．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州510642；2．佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣東 佛山528231；3．比利美英偉營(yíng)養(yǎng)飼料（深圳）有限公司，廣東 深圳518103］

為提高母豬的繁殖力和利用率，仔豬早期斷奶技術(shù)現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用。斷奶仔豬受到營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境、心理、豬群結(jié)構(gòu)等方面的應(yīng)激，影響仔豬的正常生長(zhǎng)，給養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益帶來(lái)重大影響。因此，如何減少早期斷奶仔豬心理應(yīng)激，避免胃腸黏膜損傷，促進(jìn)腸道發(fā)育成熟，就成為早期斷奶仔豬護(hù)理上的一個(gè)重大問(wèn)題。

表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）最早是由雄鼠頜下腺分離獲得，是中、外胚層細(xì)胞一種強(qiáng)有力的有絲分裂原，在促進(jìn)腸道黏膜上皮細(xì)胞的增殖和分化，減輕多種因素對(duì)胃腸道結(jié)構(gòu)的損害，維持胃腸道結(jié)構(gòu)和功能的完整等方面，均表現(xiàn)出良好的效果［1－3］。Shen［4］等研究表明，幼豬口服 EGF之后，在腸道仍保留其生物學(xué)活性，在胃和近段小腸內(nèi)容物中與EGF受體結(jié)合能力仍保持較高水平，只是在遠(yuǎn)端小腸腔內(nèi)明顯下降。對(duì)EGF受體在腸上皮細(xì)胞中分布的研究也表明，EGFR不僅分布于小腸上皮細(xì)胞的腸腔一側(cè)，也分布于該類細(xì)胞的基底面一側(cè)［5］，這對(duì)于使用EGF作為一種飼料添加劑提供了極大的可能性。乳酸球菌是一種非病原，無(wú)侵襲性，不定植的革蘭陽(yáng)性乳酸菌，已被廣泛用作細(xì)菌載體，并被用于許多食品添加劑中，對(duì)人和動(dòng)物健康有利［6］。本試驗(yàn)采用高效表達(dá)豬源性EGF的乳酸球菌飼喂斷奶仔豬，觀察其對(duì)仔豬生產(chǎn)性能和小腸黏膜形態(tài)的影響，以期為EGF廣泛應(yīng)用于飼料行業(yè)提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇19～21日齡健康無(wú)病的斷奶仔豬108頭，公／母豬各半，按體重相近、性別比例相同的原則隨機(jī)分4個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9頭。4個(gè)處理分別為：HE、HM、LE、LM，飼料成分見(jiàn)表1。14d后每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2頭，共24頭，進(jìn)行屠宰，采樣。EGF－LL由加拿大圭爾夫大學(xué)提供，其制備方法如先前所述［7］。

1．2 試驗(yàn)日糧與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)主要的基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

建立統(tǒng)一的飼喂日程，且在將培養(yǎng)液投放給豬時(shí)豬處于饑餓狀態(tài)。第1周每日飼喂60mL，第2周每日飼喂80mL。HE組和LE組所喂培養(yǎng)液含游離的EGF均約為4μg／mL，也含轉(zhuǎn)染了豬EGF表達(dá)質(zhì)粒的活乳酸球菌（EGF－LL），而 HM 組和LM組則僅喂等體積的M17培養(yǎng)液［7］。

1．3 樣本采集 所有仔豬在試驗(yàn)第0、7、14天和第15天均進(jìn)行稱重。于第15天時(shí)每一重復(fù)隨機(jī)選取2頭仔豬，處死并剖檢，取出含內(nèi)容物的小腸稱重，并測(cè)量小腸長(zhǎng)度。于小腸最前端、距最末端1m和最末端處各剪取一段作為十二指腸、空腸和回腸樣本，每段樣本長(zhǎng)度約為6cm，去除內(nèi)容物，投入4%中性甲醛（pH值7．4）固定液固定至少3d，其間于翌日換液1次。

1．4 組織切片制作 小腸各段樣品至少固定3d，自來(lái)水流水沖洗，然后梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制作5μm厚切片，蘇木素－伊紅（H．E．）染色，中性樹(shù)膠封片。

1．5 觀察及測(cè)量 每頭仔豬每個(gè)腸段取4張切片，在光鏡下每張切片選取10個(gè)視野。每個(gè)視野取1最長(zhǎng)走向平直伸展良好的絨毛，用Tiger圖像分析軟件測(cè)量絨毛高度，腺窩深度。

1．6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行One－Way ANOVA分析比較各組的差異顯著性差異，顯著者用LSD法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果

2．1 各處理仔豬的生產(chǎn)性能 各組仔豬初重均無(wú)顯著差異（P＞0．05），第2周中HE組的平均日增重（average day gain，ADG）顯著高于 LM 組（P＜0．05）；第2周時(shí)飼料轉(zhuǎn)換率LE組的略高于LM組。各組間的器官指數(shù)和腹瀉率均無(wú)差異（具體數(shù)據(jù)文中未列出），如表2。

表2 口服EGF及EGF－LL對(duì)斷奶仔豬體重的影響 （mean±SD）

2．2 各處理仔豬小腸各段的組織形態(tài)測(cè)量 HE組，HM組和LE組十二指腸和空腸絨毛高度極顯著高于LM組（P＜0．01），LE組十二指腸和空腸的絨毛／腺窩（V／C）的值極顯著高于 LM 組（P＜0．01），空腸的HE組中腺窩深度和比值顯著大于HM 組（P＜0．05），均見(jiàn)表3。

表3 口服EGF及EGF－LL對(duì)斷奶仔豬小腸各段組織形態(tài)的影響 （μm）

3 討論

斷奶應(yīng)激會(huì)使仔豬腸絨毛萎縮，腺窩增生，從而導(dǎo)致了消化道消化吸收功能下降，使斷奶仔豬的生長(zhǎng)受到影響。通過(guò)口服給予EGF可以調(diào)節(jié)腸道發(fā)育，對(duì)于減輕腸道的損傷具有十分明顯的效果［8］。O′laughlin等指出，給乳鼠口服或腹腔內(nèi)注射EGF，發(fā)現(xiàn)胃、胰腺和小腸的重量均明顯增加，并促進(jìn)胰腺和小腸的分泌功能。在早期斷奶仔豬中，腸道乳酸菌的濃度減少，導(dǎo)致仔豬更易受病原傳染病的影響［9］。試驗(yàn)表明，給斷奶仔豬飼喂添加乳酸菌的日糧，可產(chǎn)生積極的生長(zhǎng)效應(yīng)［10］。在給早期斷奶小鼠飼喂EGF表達(dá)的乳酸菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)體重明顯增加，且小腸絨毛高度和腺窩深度也都有明顯增加［7］。本試驗(yàn)在整個(gè)試驗(yàn)期中處理組的體重相比對(duì)照組都有增加但并不顯著，第1周內(nèi)所有處理組的ADG與對(duì)照組差異不大，第2周內(nèi)HE組的ADG就明顯高于對(duì)照組，且另兩組的也有高于對(duì)照組的趨勢(shì)，可能由于試驗(yàn)期比較短使體重增加不顯著。其中添加血漿蛋白粉組（高質(zhì)量飼料的兩組）的ADG和飼料轉(zhuǎn)換率均高于未加的（低質(zhì)量飼料的兩組），表明血漿蛋白粉在緩解應(yīng)激，促進(jìn)仔豬的生長(zhǎng)，提高飼料的利用率方面也具有一定的作用。

斷奶應(yīng)激對(duì)仔豬腸黏膜的發(fā)育具有很大的影響，絨毛變短，成熟的腸絨毛上皮細(xì)胞數(shù)量減少，對(duì)養(yǎng)分的吸收能力低。而腺窩深度反映了細(xì)胞生成率，腺窩變深，表明細(xì)胞的成熟率下降，分泌功能減弱。絨毛高度／腸腺高度的比值則綜合反映小腸的功能狀態(tài)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，口飼EGF組十二指腸和空腸的絨毛高度和絨毛／腺窩的比值都明顯優(yōu)于對(duì)照組，提示了EGF能夠有效的減輕因斷奶應(yīng)激對(duì)斷奶仔豬腸道結(jié)構(gòu)和功能的不利影響，促進(jìn)腸道修復(fù)，使仔豬更快從斷奶應(yīng)激造成的生長(zhǎng)抑制中恢復(fù)過(guò)來(lái)。

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