實驗性小鼠蓖麻毒素中毒的血液學(xué)試驗

李成梅，吳雪霞，謝曉東，劉容珍，宋光泉

（1．仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州510225；2．仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，廣東 廣州510225）

蓖麻毒素（Ricin）是大戟科植物蓖麻 （Ricinus Commnunis）種子中的成分，對人、動物和昆蟲都有很大的毒性。1888年，Stillmark從蓖麻籽中分離得到一種對紅細胞有強烈凝集活性的蛋白質(zhì)，并命名為蓖麻毒素 （Ricin）。與細胞凝集素RCA（Ricinus communis agglutinin）不同，蓖麻毒素是一種核糖體失活蛋白RIPs（ribosom－interactiating protein），血凝作用很弱。人吞下蓖麻種子后產(chǎn)生的毒性主要是由蓖麻毒素引起［1］。蓖麻毒素中毒已有相關(guān)報道，蓖麻毒素中毒后血液生化指標(biāo)研究在國內(nèi)外較少。本試驗探討小鼠蓖麻毒素中毒的血液學(xué)變化，為探討人與動物蓖麻毒素的中毒機理提供參考。

1 材料與方法

1．1 實驗動物及其處理 選用1日齡商品代健康小鼠36只（購自廣東省實驗動物中心，平均體重15g），隨機分成3組，每組12只，雌雄各半。

1．2 試驗方法 各組攻毒方法為：肌肉注射蓖麻毒素0．1mL／kg體重。3組小鼠分別在攻毒后2h、4 h、6h處死采血，抗凝處理或分離血清，按常規(guī)血液測定方法進行紅細胞、白細胞計數(shù)和血紅蛋白含量檢測，同時做生化檢測。采血作新鮮血涂片（每只4張），姬姆薩－瑞氏染色，光鏡下觀察紅細胞形態(tài)變化。

2 結(jié)果與分析

2．1 紅細胞形態(tài)變化 見圖1～4。

2．2 血液學(xué)指標(biāo)的結(jié)果 見表1。

2．3 生化指標(biāo)檢測結(jié)果 見表2。

3 討論

圖4 攻毒6h后血圖片（40×10顯微鏡下觀察）

由表1可知，紅細胞、血紅蛋白都隨中毒時間的增加而逐漸減少，但并沒有顯著差異；白細胞數(shù)在中毒4h后差異顯著，在中毒6h后差異極顯著；紅細胞比積在中毒4h、6h后差異顯著；血小板數(shù)值在中毒2、4、6h后均為差異極顯著。與紅細胞相比，白細胞的顯著變化進一步驗證了前人關(guān)于蓖麻毒素的研究。Nadkami和Deshphude認(rèn)為蓖麻毒紊中毒后的許多現(xiàn)象，例如：發(fā)熱，肝出血性壞死，腹水，胸水的滲出，腸道的出血壞死性炎癥等早期的急性反應(yīng)都與腫瘤壞死因子（TNF－α）、白細胞介素IL－1、IL－6的分泌有關(guān)［2］。由結(jié)果2．2可知，小鼠蓖麻中毒后，紅細胞先出現(xiàn)增多（見圖2），然后出現(xiàn)變形、融合和減少（見圖3、圖4）現(xiàn)象，其中變形現(xiàn)象為出現(xiàn)星形紅細胞。

表1 血液學(xué)試驗

表2 生化檢驗

天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性在中毒6h后顯著增加，原因可能是：RT對肝臟的損傷首先是使枯弗氏細胞受損，繼而影響肝細胞，出現(xiàn)肝細胞空泡樣變性及壞死。因為RT上有暴露的甘露糖殘基和半乳糖結(jié)合位點，枯弗氏細胞上既有甘露糖受體又有半乳糖殘基，R T可通過這兩種方式與枯弗氏細胞結(jié)合，而與肝細胞僅以后一種方式結(jié)合。因此中毒初期，主要是大量枯弗氏細胞受損，較少肝實質(zhì)細胞受損，而AST、ALP、ALT主要存在于肝實質(zhì)細胞胞漿中，所以這時血清AST、ALP、ALT活性升高不明顯，但隨著中毒時間延長，枯弗氏細胞和竇壁細胞壞死，竇壁細胞的內(nèi)容物喪失，肝細胞直接接觸血液，纖維蛋白凝集，微血栓形成及血液循環(huán)障礙，繼而肝細胞壞死，大量AST、ALP、ALT釋放于血液中［3］，使得上述3種酶活性在攻毒6h后顯著增加，而不是攻毒初期。血糖濃度降低進一步驗證蓖麻毒素通過蛋白質(zhì)合成障礙導(dǎo)致細胞死亡，但是機理有待研究。

［1］ 曾佑煒，宋光泉，彭永宏，等．蓖麻蛋白研究及應(yīng)用進展（綜述）［J］．亞熱帶植物科學(xué)，2004，33（1）：60－63．

［2］ Licastro F，Morini M C，Bolognesi A，etal．Ricin indued the production of humor necrosis factor－alpha and interleukin－1beta by human periphblood mononuclear cell［J］．Biochem，1993，294（p12）：517－521．

［3］ Derenziui M，Bonetti E，Marionozziv ，etal．Toxic effects of ricin：studies on the pathogenesis of liver lesions［J］．Virchows Archiv．B：Cell Pathology，1976，20（1）：15－18．