破莖松蘿對金黃色葡萄球菌感染小鼠血清自由基含量的影響

賈新梅

甘肅省武威市中醫(yī)醫(yī)院，甘肅武威 733000

松蘿是子囊地衣綱茶漬目松蘿科松蘿屬植物，又名樹掛，松落，有長松蘿和破莖松蘿之分，是一種藻類和菌類共生植物，在我國分布廣泛，有著悠久的藥用歷史。具有祛痰止咳、清熱解毒、除濕通絡、止血調經、驅蟲等作用，用于治療頭痛目赤，咳嗽痰多，瘧疾，瘰疬，帶下，崩漏，外傷出血，癰腫，毒蛇咬傷等[6]。研究發(fā)現松蘿富含巴爾巴地衣酸、松蘿酸、地弗地衣酸、拉馬酸和地衣多糖等活性物質，具有顯著的生物學功效，有抗菌、抗毒素的作用[1]。松蘿有多種經濟用途,在藥用抗菌、香料、食品、染料、日用化工、飼料、環(huán)境監(jiān)測等方面都有利用[7]，由于其含有抗菌活性物質松蘿酸和抗癌活性物質地衣多糖而引起人們的廣泛關注。本實驗以小鼠血清丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力作為觀察指標，研究破莖松蘿對金黃色葡萄球菌感染小鼠血清自由基含量的影響，為探討其對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用提供依據。

1 實驗材料

1.1 藥品

破莖松蘿（河西三洲醫(yī)藥公司）。

1.2 試劑

SOD測試試劑（南京建成生物工程研究所）。

MDA測試試劑（南京建成生物工程研究所）。

1.3 菌株

金黃色葡萄球菌1.5×109/mL（武威市中醫(yī)院實驗室提供）。

1.4 儀器

VIS-7220型分光光度計（北京第二光學儀器廠）。

1.5 動物

昆明種普通級小鼠140只，體重18～22 g，雌雄各半，購自蘭州醫(yī)學院實驗動物中心

2 實驗方法

2.1 預實驗[2-3]

將金黃色葡萄球菌菌液（濃度為1.5×109/mL）用無菌生理鹽水稀釋為1.5×109/mL（不稀釋）、1.5×108/mL、1.5×107/mL、1.5×106/mL、1.5×105/mL五個濃度。經過預實驗，計算得引起小鼠65%死亡菌液濃度為8.25×107/mL。

2.2 分組與造模

選用小鼠140只，雌雄各半，隨機分為5組：空白對照組、模型組、破莖松蘿高劑量組、破莖松蘿低劑量組、魚腥草對照組，每組28只?？瞻讓φ战M、模型組分別灌胃生理鹽水14 d，0.4 mL/只/d；破莖松蘿高劑量組灌胃6.5%煎劑、破莖松蘿低劑量組灌胃3.9%煎劑各14 d，0.4 mL/只/d；魚腥草對照組灌胃13%魚腥草煎劑14 d，0.4 mL/只/d。除空白對照組外，其余4組均于第6天小鼠腹腔注射用無菌生理鹽水稀釋為8.25×107/mL的金黃色葡萄球菌菌液0.5 mL/只。

2.3 MDA和SOD的測定

每組取小鼠8只，測其MDA含量及SOD活力。第15天小鼠眼眶取血，將各小鼠的血清取0.1 mL加入MDA測定試劑，按操作要求在分光光度計532 nm處測定吸光度，計算MDA含量；取各小鼠的血清取0.01 mL加入SOD測定試劑，按操作要求在分光光度計550 nm處測定吸光度，計算SOD活力。

表1 各組血清SOD活力和MDA含量變化（n=8）

3 結果

各組血清SOD活力及MDA含量的變化：模型組SOD活力降低和MDA含量升高，較空白對照組顯著（均P＜0.05）;高劑量組SOD活力升高和MDA含量降低，較模型組顯著（均P＜0.01）；低劑量組SOD活力升高和MDA含量降低，較模型組顯著（均P＜0.05）；魚腥草組SOD活力升高和MDA含量降低，較模型組顯著（均P＜0.05）（具體數據見表下表）。實驗結果顯示，破莖松蘿對金黃色葡萄球菌感染小鼠有明顯的保護作用。

4 討論

①正常體內產生一定量的自由基，自由基氧化生物膜的不飽和脂肪酸產生脂質過氧化物，使細胞的質膜（細胞膜、線粒體膜、內質網及溶酶體膜）破壞和功能障礙[4]。在生理狀態(tài)下，自由基可被體內的自由基清除系統如SOD、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)和過氧化氫酶等迅速清除。在感染等病理情況下，可啟動自由基連鎖反應，自由基產生增多，清除酶的活力能力降低，產生于清除自由基的動態(tài)平衡嚴重破壞。

②本實驗結果表明，金黃色葡萄球菌感染小鼠血清中SOD活力的降低和MDA含量的增高較空白對照組顯著，說明金黃色葡萄球菌感染過程中清除自由基的防御功能減弱，脂質過氧化物損傷加重。破莖松蘿能顯著提高金黃色葡萄球菌感染小鼠血清SOD活力和降低MDA含量，調節(jié)自由基產生與自由基清除酶之間的平衡。可見，破莖松蘿能提高自由基清除酶的活力，降低脂質過氧化物引起的損傷，從而對機體起到保護作用。

③松蘿酸抗菌譜主要為革蘭氏陽性細菌及結核桿菌。在試管中松蘿酸對肺炎球菌、溶血性鏈球菌、白喉桿菌、結核桿菌都有很強的抑菌作用，抑菌濃度為1～5 μg/mL，至50 μg/mL可完全抑制細菌的生長。對金黃色葡萄球菌之抑制較上述細菌稍弱，但強于對革蘭氏陰性細菌之作用。但也有報告對革蘭氏陰性的百日咳桿菌、枯草桿菌、肺炎桿菌乃至大腸桿菌、變形桿菌有效者，對痢疾桿菌、傷寒桿菌則無效。在體外試驗中，松蘿酸對人型結核桿菌有顯著的抑制作用[5]。

[1] 林源.松蘿的研究現狀[J].中國藥業(yè)，2011，20（19）：27-29.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993:259-279.

[3] 徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：1340-1350.

[4] 李建生，孔桂蓮.毒素清對大腸桿菌肺炎老齡小鼠組織自由基和前列腺素代謝變化的影響[J].中國中西醫(yī)結合急救雜志，2001,8（3）：146-149.

[5] 李眀.松蘿藥理研究[J].中草藥，2012,5（2）：236-238.

[6] 莫結麗，陳浩桉，陸惠文，等.HPLC測定自然口服液中甘草酸的含量[J].中藥材，2001,24（1）：53.

[7] 李榮欽，蘇印泉.松蘿研究利用現狀及前景[J].西藏科技，2007，8（173）：21-26.