“切脾”，“保脾”對(duì)門脈高壓癥大鼠胃底黏膜上皮細(xì)胞凋亡的影響

侯 杰 羅 蘭 劉偉新 曲義坤 (佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外二科，黑龍江 佳木斯 154002)

細(xì)胞凋亡是由體內(nèi)外因素觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)預(yù)存的死亡程序而導(dǎo)致的基因控制的細(xì)胞自殺過程〔1〕。Bcl-2基因編碼26 kD的Bcl-2蛋白，Bax基因編碼21 kD的Bax蛋白，當(dāng)受到細(xì)胞內(nèi)外的各種刺激后，二者之間的動(dòng)態(tài)平衡決定著細(xì)胞的存活，Bcl-2蛋白表達(dá)增高，Bcl-2/Bax比例增加，抑制細(xì)胞凋亡;Bax蛋白表達(dá)增高，Bcl-2/Bax比例下降，則促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔2〕。手術(shù)、應(yīng)激、非甾體抗炎藥(NSAIDs)、乙醇、幽門螺桿菌(HP)感染等侵襲因素均可使胃黏膜細(xì)胞凋亡增加，導(dǎo)致黏膜損傷〔3〕。因此，采用何種術(shù)式更能減輕對(duì)胃腸道黏膜的損傷顯得尤為重要。本文擬從分子生物學(xué)水平觀察脾臟切除和保留正常脾臟1/3的脾次全切除術(shù)對(duì)胃底黏膜上皮細(xì)胞凋亡的影響及Bax、Bcl-2表達(dá)的變化，選擇一種對(duì)胃底黏膜上皮細(xì)胞損傷相對(duì)較小的術(shù)式，以期盡量減輕或減少PHG壓性胃病的發(fā)生，降低嘔血的發(fā)生率。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇健康雄性Wistar大鼠110只，約5～6月齡，體重200～300 g，采用四氯化碳(CCl4)試劑誘導(dǎo)制造肝硬化門脈高壓癥(PHT)大鼠模型，將肝硬化PHT大鼠重新分籠、編號(hào)。

1.2 方法 隨機(jī)分組:①正常對(duì)照組;②假手術(shù)組;③保留約正常脾臟1/3大小的脾次全切除術(shù)組;④全脾切除術(shù)組。采用末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的X-dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，電鏡下觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)，免疫組化法檢測(cè)Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，組間比較用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較用方差分析。

2 結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)采用CCl4造成大鼠肝硬化PHT模型，動(dòng)態(tài)觀測(cè)大鼠“切脾”、“保脾”術(shù)后(1 w，2 w，3 w)肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)，Bcl-2、Bax等指標(biāo)的變化。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組術(shù)后4 w內(nèi)死亡3只，存活27只;全脾切除術(shù)組死亡15只，存活15只;脾次全切除術(shù)組死亡8只，存活22只。見表1～表3。

表1 各組胃底黏膜細(xì)胞凋亡細(xì)胞率的比較(±s)

表1 各組胃底黏膜細(xì)胞凋亡細(xì)胞率的比較(±s)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.05;與假手術(shù)組及脾次全切除術(shù)組比較:2)P＜0.01;下表同

組別 n 20 3.713±0.545 3.713±0.545 3.713±0.545假手術(shù)組 27 4.671±0.4491) 4.903±0.8041) 5.232±0.7331)脾次全切除術(shù)組22 4.989±0.7331) 5.674±1.0841) 6.074±0.7701)全脾切除組 15 5.648±0.9221)2)7.037±1.1771)2)7.767±1.0081)2)1 w 2 w 3 w正常對(duì)照組

表2 免疫組化法檢測(cè)Bax蛋白的表達(dá)(±s)

表2 免疫組化法檢測(cè)Bax蛋白的表達(dá)(±s)

組別 n 20 1.259±0.174 1.259±0.174 1.259±0.174假手術(shù)組 27 6.424±0.8772) 6.866±0.8222) 7.342±0.7391)脾次全切除術(shù)組22 6.692±0.7322) 7.156±0.8012) 7.502±0.7252)全脾切除術(shù)組 15 7.584±1.4612) 8.011±1.3251) 8.700±1.1052)1 w 2 w 3 w正常對(duì)照組

表3 免疫組化法檢測(cè)Bcl-2蛋白的表達(dá)(±s)

表3 免疫組化法檢測(cè)Bcl-2蛋白的表達(dá)(±s)

組別 n 20 2.980±3.580 2.980±3.580 2.980±3.580假手術(shù)組 27 7.918±0.5322)7.312±0.4942)6.995±0.5422)脾次全切除術(shù)組 22 7.839±0.4402)7.200±0.4872)6.865±0.5352)全脾切除術(shù)組 15 6.281±0.6292)5.845±0.5762)5.845±0.5762)1 w 2 w 3 w正常對(duì)照組

3 討論

本研究證實(shí)了不同術(shù)式可以影響細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)基因，從而進(jìn)一步引發(fā)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，“切脾”術(shù)后，胃底黏膜細(xì)胞凋亡指數(shù)、Bcl-2、Bax表達(dá)與“保脾”術(shù)后比較有顯著性差異(P＜0.05)。保留約正常脾臟1/3大小的脾次全切除術(shù)更能減低胃底黏膜細(xì)胞的凋亡，減輕對(duì)胃底黏膜細(xì)胞的損害。減輕或減少PHG的發(fā)生，降低嘔血的發(fā)生率，具有重大意義，可以推廣到臨床。本實(shí)驗(yàn)以肝硬化PHT大鼠為研究對(duì)象，以脾次全切除、脾切除為處理因素，與臨床研究相比有明顯優(yōu)點(diǎn):①避免了臨床研究中出現(xiàn)的肝硬化程度不一。②排除人體其他基礎(chǔ)疾病對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。③避免了人為的一些客觀因素，如治療措施、情緒、不同環(huán)境的干擾。④手術(shù)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，出血量少。既往的研究發(fā)現(xiàn)，脾次全切除術(shù)既能降低肝硬化后的門靜脈高壓，改善脾亢癥狀，又能保留脾臟的免疫功能，且保留的殘脾沒有加重肝纖維化。因此，臨床開展脾次全切除術(shù)治療肝硬化巨脾對(duì)病人是有益無害的。

1 Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR.Apoptosis:a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics〔J〕.Br J Cancer，1972;26(4):239-57.

2 Yang E，Zha J，Jockel J，et al.Bad，a heterrodimeric partner for Bcl-xl and Bcl-2，displaces Bax and promotes cell death〔J〕.Cell，1995;80(2):285-9.

3 Maity P，Biswas K，Roy S，et al.Smoking and the pathogenesis of gastroduodenal ulcer-recent mechanistic update〔J〕.Mol Cell Biochem，2003;253(1-2):329-38.