黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖對(duì)感染腸炎沙門氏菌Caco-2細(xì)胞促炎癥和抗炎癥細(xì)胞因子基因mRNA表達(dá)水平的影響

李曉敏 劉紅賓 咼于明 王 忠

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193)

腸道上皮細(xì)胞(intestinal epithelial cells，IECs)是腸道黏膜屏障的重要組成部分，除參與水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收外，也參與宿主腸道黏膜固有免疫［1］。腸道上皮細(xì)胞受到食源性腸道致病菌，如沙門氏菌、致病性大腸桿菌侵襲后，可表現(xiàn)免疫炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生不同類型細(xì)胞因子，進(jìn)而影響宿主腸道黏膜屏障結(jié)構(gòu)完整性和通透性［2-3］。

沙門氏菌病是主要人畜共患病，也是主要的食源性疾病之一。沙門氏菌血清型較多，目前發(fā)現(xiàn)2 000多種，傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium，ST)和腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis，SE)是2種侵襲性強(qiáng)且具有廣泛感染宿主的血清型。畜禽是它們重要的感染宿主和貯存宿主，腸道是沙門氏菌入侵的主要靶器官［4］。沙門氏菌可通過編碼在沙門氏菌毒力島Ⅰ上的Ⅲ型分泌系統(tǒng)介導(dǎo)進(jìn)入腸上皮細(xì)胞，該系統(tǒng)分泌的SPI(Salmonella pathogenic island)蛋白能夠與腸上皮細(xì)胞相互作用，從而觸發(fā)一系列反應(yīng)，包括產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子，導(dǎo)致局部多形核細(xì)胞匯集和大量液體滲出［5-6］。沙門氏菌嚴(yán)重感染時(shí)，黏附在腸道黏膜上的沙門氏菌可破壞腸道上皮細(xì)胞屏障結(jié)構(gòu)，通過腸道上皮細(xì)胞，進(jìn)入淋巴和血液循環(huán)，最終進(jìn)入肝臟和脾臟，從而造成人或動(dòng)物表現(xiàn)多種臨床癥狀，如發(fā)燒、胃腸炎、腹瀉、敗血癥和死亡，間接污染畜產(chǎn)品。耐過的動(dòng)物可表現(xiàn)持續(xù)性感染和終身帶菌，成為主要傳染源。因此控制沙門氏菌感染，確保畜禽產(chǎn)品微生物安全，已成為動(dòng)物生產(chǎn)的重要任務(wù)之一［4，7］。

抗生素在預(yù)防和治療沙門氏菌病中發(fā)揮了巨大作用，然而抗生素的使用也帶來了藥物殘留、抗藥性菌株出現(xiàn)等問題，因此尋找和開發(fā)預(yù)防和治療沙門氏菌病的抗生素替代物已成為當(dāng)前控制沙門氏菌病、確保公共衛(wèi)生安全的主要任務(wù)。近幾年，國(guó)內(nèi)外很多研究表明通過營(yíng)養(yǎng)性添加劑和具有免疫調(diào)節(jié)作用的非營(yíng)養(yǎng)性添加劑，如益生菌、益生元、生物活性多糖等手段，來調(diào)控宿主非特異性和特異性免疫功能，調(diào)節(jié)宿主體內(nèi)促炎癥細(xì)胞或信號(hào)分子和抗炎癥細(xì)胞或信號(hào)分子的平衡等途徑來緩解免疫應(yīng)激或部分清除病原微生物，如沙門氏菌、致病性大腸桿菌感染，保護(hù)腸道黏膜屏障結(jié)構(gòu)完整和功能正常，已成為促進(jìn)動(dòng)物健康、減少抗生素使用和確保動(dòng)物性食品安全生產(chǎn)的主要途徑之一［8-9］。β -1，3/1，6- 葡聚糖是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的葡萄糖多聚復(fù)合物，普遍存在于細(xì)菌、酵母、蘑菇、谷類和海藻等的細(xì)胞壁中。體內(nèi)和體外試驗(yàn)已經(jīng)表明，不同來源的β-1，3/1，6-葡聚糖可增強(qiáng)宿主先天性免疫和獲得性免疫功能，增強(qiáng)抗病原細(xì)菌、病毒和寄生蟲感染的能力，是極具生物活性的免疫增強(qiáng)劑［10］。Sophy 公司的β -1，3/1，6-葡聚糖又可稱為“黑酵母菌培養(yǎng)液”，它是將短梗霉菌屬的APF-202菌置于培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)后，經(jīng)過濾和熱處理(殺死活菌、停止發(fā)酵)所得的“一體化”培養(yǎng)液，是具有很高生理活性的水溶性胞外葡聚糖，并且現(xiàn)在已經(jīng)能夠作為健康食品添加劑應(yīng)用于市場(chǎng)。這種β-葡聚糖的結(jié)構(gòu)與香菇多糖或裂褶多糖的結(jié)構(gòu)極為相似，張亞茹等［11］研究發(fā)現(xiàn)，該β-1，3/1，6-葡聚糖可能通過促進(jìn)細(xì)胞免疫和體液免疫的功能明顯抑制S180腹水移植瘤的生長(zhǎng)。Ikewaki等［12］采用黑酵母 β-葡聚糖外培養(yǎng)外周血單核細(xì)胞(PMBC)，發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)白細(xì)胞介素 -8(IL-8)的產(chǎn)生增加。Yatawara等［13］發(fā)現(xiàn)黑酵母β-葡聚糖作為免疫調(diào)節(jié)劑，通過提高巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)的活性，對(duì)黑熱病病原體亞馬遜利什曼原蟲(L.amazonensis)發(fā)揮噬菌作用。

然而，關(guān)于腸道致病菌感染情況下，黑酵母β-葡聚糖與腸道上皮細(xì)胞之間的相互作用機(jī)制尚未見報(bào)道。為此，本試驗(yàn)以腸上皮細(xì)胞Caco-2細(xì)胞為模型，旨在探討當(dāng)腸上皮細(xì)胞受到腸炎沙門氏菌感染后，黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖對(duì)腸上皮細(xì)胞炎癥和抗炎癥細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用，以期進(jìn)一步揭示其抗感染機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖來自日本索菲公司(Sophy Inc)，相對(duì)分子質(zhì)量在10萬～50萬，易溶于水。產(chǎn)品菌株和細(xì)胞系:腸炎沙門氏菌菌株(Salmonella enteritidis sterotype，ATCC13076)購自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;人結(jié)腸癌細(xì)胞系Caco-2細(xì)胞購自北京銀紫晶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司。

主要試劑:最低基本培養(yǎng)液(minimum essential medium，MEM)、青鏈霉素、胰蛋白酶、乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)消化液和磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)購自中科邁晨(北京)科技有限公司。胎牛血清(FBS)購自Gbico公司。12孔細(xì)胞培養(yǎng)板購自美國(guó) Corning公司。溶菌肉湯(Luria-Bertani，LB)培養(yǎng)液購自北京益德益華科技發(fā)展有限公司。RNeasy Mini Kit購于QIAGEN公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用MBI Fermentas公司的Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit，實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒為TaKaRa公司生產(chǎn)的SYBR Premix EX TaqTMⅡ(Perfect Real Time)。

1.2 Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)

Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液為含有10%FBS、200 U/mL青霉素、200μg/mL鏈霉素和50μg/mL兩性霉素的MEM，容器為75 cm2卡氏培養(yǎng)瓶，將其置于37℃培養(yǎng)箱中，通入5%CO2(相對(duì)濕度90%)。2 d換1次培養(yǎng)液，每5 d按1∶3的比例傳代，試驗(yàn)所用細(xì)胞在10代以內(nèi)。

1.3 細(xì)菌培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

腸炎沙門氏菌在LB培養(yǎng)液中37℃搖床培養(yǎng)24 h，在650 nm下測(cè)定菌懸液的OD值(當(dāng)OD值為0.90時(shí)，菌液濃度為 5×108CFU/mL)，4 000 r/min離心15 min，用PBS洗2次，用不含血清和抗生素的MEM懸浮細(xì)菌，根據(jù)上述OD值調(diào)整菌液濃度為1×1010CFU/mL，同時(shí)用LB瓊脂進(jìn)行平板計(jì)數(shù)以確定菌液濃度。

1.4 β-1，3/1，6-葡聚糖和腸炎沙門氏菌共培養(yǎng)

將貼壁生長(zhǎng)良好的Caco-2細(xì)胞(細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上)用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化處理，細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后以5×104個(gè)/孔接種到12孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，細(xì)胞培養(yǎng)液為2 mL/孔含10%FBS但不含抗生素的MEM，待細(xì)胞達(dá)到90%融合時(shí)(此時(shí)細(xì)胞濃度約為1×106個(gè)/mL)開始進(jìn)行分組試驗(yàn)。

試驗(yàn)分成4個(gè)組，分別為對(duì)照組、腸炎沙門氏菌感染組、β -1，3/1，6-葡聚糖組、β -1，3/1，6-葡聚糖+腸炎沙門氏菌共培養(yǎng)組。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每孔為1個(gè)重復(fù)。Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)3～5 d(中間每隔1 d換1次不含抗生素只含10%FBS的 MEM)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，β -1，3/1，6-葡聚糖組和β-1，3/1，6-葡聚糖組+腸炎沙門氏菌共培養(yǎng)組各孔，棄去舊培養(yǎng)液，加入用不含抗生素只含10%FBS的MEM稀釋的終濃度為40μg/mL的黑酵母 β-1，3/1，6-葡聚糖溶液(原濃度為50μg/mL)。而培養(yǎng)基對(duì)照組和腸炎沙門氏菌感染組各孔仍換成新鮮的不含抗生素只含10%FBS的MEM。β-1，3/1，6-葡聚糖組預(yù)處理細(xì)胞24 h，腸炎沙門氏菌感染組和 β-1，3/1，6-葡聚糖+腸炎沙門氏菌共培養(yǎng)組分別加入20μL預(yù)先備好的腸炎沙門氏菌菌液，使最終濃度在1×108CFU/mL(細(xì)菌與細(xì)胞比例為100∶1)，其余2組加入同體積MEM，處理3 h，收集細(xì)胞提取總RNA。

1.5 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄

采用 RNeasy Mini Kit(Qiagen，USA)提取細(xì)胞總RNA，采用核酸蛋白測(cè)定儀于260和280 nm處檢測(cè)RNA的濃度和純度。cDNA合成按照Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit操作說明進(jìn)行，反應(yīng)結(jié)束后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增

以β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)為內(nèi)參，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物見表1(所有引物由上海生物工程公司設(shè)計(jì)和合成)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR采用 SYBR GreenⅠ染料法，按照SYBR Premix EX TaqTMⅡ(TaKaRa公司)操作說明書在ABI 7500 real-time PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。20μL反應(yīng)總體系:cDNA 2μL，上、下游引物各0.8μL(工作濃度為10μmol/L)，焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate，DEPC)水 6 μL，SYBR Premix EX TaqTM10 μL，ROX Reference 0.6 μL。反應(yīng)條件為:95℃ 30 s;95℃ 5 s，60℃ 34 s，共40個(gè)循環(huán)。相對(duì)定量法計(jì)算各個(gè)目的基因含量，基因表達(dá)定量結(jié)果分析采用比較閾值法:2-ΔΔCt=PCR 擴(kuò)增完成后用熔解曲線分析法確定產(chǎn)物特異性。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物Table 1 Real-time fluorescence quantitative PCR primers

1.7 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件的one-way ANOVA進(jìn)行方差分析，P＜0.05時(shí)為差異顯著，P＜0.01時(shí)為差異極顯著。

2 結(jié)果

由表2可見，在正常生理情況下，對(duì)照組Caco-2細(xì)胞炎癥和抗炎癥細(xì)胞因子均無明顯表達(dá);Caco-2細(xì)胞分別用腸炎沙門氏菌感染和β-1，3/1，6-葡聚糖處理后，與 Caco-2細(xì)胞對(duì)照組相比，均極顯著地上調(diào)了促炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素 -1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子 -α(TNF-α)基因、趨化因子IL-8基因mRNA表達(dá)水平(P＜0.01)，同時(shí)也極顯著地上調(diào)了抗炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)基因mRNA表達(dá)水平(P＜0.01)，然而對(duì)抗炎癥細(xì)胞因子TGF-β基因mRNA表達(dá)水平無顯著影響(P＞0.05)。β-1，3/1，6-葡聚糖和腸炎沙門氏菌與Caco-2細(xì)胞共培養(yǎng)之后，與單純腸炎沙門氏菌感染組相比，β-1，3/1，6-葡聚糖顯著地下調(diào)了細(xì)胞因子IL-1β、IL-8和 TNF-α基因 mRNA表達(dá)水平(P＜0.05)，顯著上調(diào)了 IL-10、TGF-β基因mRNA表達(dá)水平(P＜0.05)。為驗(yàn)證產(chǎn)物特異性，繪制目的基因與內(nèi)參基因熔解曲線如圖1。

表2 β-1，3/1，6-葡聚糖、腸炎沙門氏菌和Caco-2細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子基因mRNA表達(dá)水平的影響Table 2 Effects of Caco-2 cells in co-culture with β-1，3/1，6-glucan and Salmonella enteritis on cytokine gene mRNA expression levels

3 討論

本試驗(yàn)以Caco-2細(xì)胞為模型，通過分析β-1，3/1，6-葡聚糖對(duì)腸炎沙門氏菌感染Caco-2細(xì)胞后主要炎癥和抗炎癥細(xì)胞因子基因mRNA表達(dá)水平，揭示其抗腸道病原菌感染的免疫機(jī)理。

細(xì)胞因子是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)免疫細(xì)胞(如單核/巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等)和非免疫細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腸道上皮細(xì)胞等)產(chǎn)生的一類能在細(xì)胞間傳遞信息的低分子質(zhì)量可溶性蛋白質(zhì)或多肽，具有調(diào)節(jié)白細(xì)胞生理功能，參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，參與免疫應(yīng)答和抗感染、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)以及損傷組織修復(fù)等多種功能。促炎性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素 -6(IL-6)、TNF-α、干擾素 - γ(IFN-γ)、IL-12，抗炎性細(xì)胞因子如 IL-10、TGF-β、白細(xì)胞介素-4(IL-4)和白細(xì)胞介素-13(IL-13)，趨化因子如CXC類趨化因子IL-8等，在參與和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，維持機(jī)體正常免疫生理狀態(tài)、抵抗感染中發(fā)揮主要作用。

圖1 各基因熔解曲線Fig.1 The melt curves of the genes

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腸炎沙門氏菌感染Caco-2細(xì)胞后，除極顯著上調(diào)炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α和IL-8基因mRNA表達(dá)水平外，也顯著上調(diào)了抗炎癥細(xì)胞因子IL-10基因mRNA表達(dá)水平，但對(duì)TGF-β基因mRNA表達(dá)水平無顯著影響。炎癥細(xì)胞因子的變化趨勢(shì)與以前報(bào)道一致。黃穎等［11］報(bào)道腸炎沙門氏菌可誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞顯著表達(dá)和分泌IL-8。Eckmann等［12］報(bào)道沙門氏菌感染腸道上皮細(xì)胞(T84、Caco-2細(xì)胞)可顯著上調(diào)趨化因子IL-8和促炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-α基因mRNA表達(dá)水平和分泌量。同樣，體內(nèi)和體外大量試驗(yàn)也表明沙門氏菌感染可刺激哺乳動(dòng)物或家禽免疫系統(tǒng)或免疫細(xì)胞類型，如單核/巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等表達(dá)和分泌許多細(xì)胞因子，如促炎癥細(xì)胞因子(如 IL-1、TNF-α和IL-6)、趨化因子［如巨噬細(xì)胞炎性蛋白 -1α (macrophage inflammatory protein，MIP-1α)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白 -1β(MIP-1β)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白 -2α(MIP-2α)和膠質(zhì)細(xì)胞趨化因子(keratinocyte chemoattractant，KC)］以及其他一些細(xì)胞因子［白細(xì)胞介素-12p70(IL-12p70)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)等］［2，12-14］。本試驗(yàn)中腸炎沙門氏菌感染 Caco-2細(xì)胞后抗炎癥細(xì)胞因子TGF-β基因mRNA表達(dá)水平的變化趨勢(shì)與Bahrami等［2］報(bào)道一致，然而抗炎癥細(xì)胞因子IL-10基因mRNA表達(dá)水平變化趨勢(shì)與以往報(bào)道［2，12，15］不一致，這些研究者認(rèn)為沙門氏菌感染可下調(diào)或不改變動(dòng)物腸道上皮細(xì)胞IL-10基因mRNA表達(dá)水平，但是 Bahrami等［2］報(bào)道空腸彎曲桿菌可誘導(dǎo)腸道上皮細(xì)胞系HT-29細(xì)胞顯著表達(dá)IL-10基因，關(guān)于腸道致病菌誘發(fā)腸道上皮細(xì)胞表達(dá)抗炎癥細(xì)胞因子的具體原因尚需進(jìn)一步探討?？傮w來看，上述試驗(yàn)結(jié)果表明，盡管感染的宿主細(xì)胞類型不同，但沙門氏菌感染均可誘發(fā)宿主表現(xiàn)炎癥反應(yīng)。這些炎癥細(xì)胞因子在吸引白細(xì)胞、T細(xì)胞等到炎癥部位，激活機(jī)體先天性免疫和獲得性免疫系統(tǒng)，抵抗沙門氏菌感染中發(fā)揮了主要作用［12，16］。此外，也有研究表明，一些腸道致病菌，如沙門氏菌、致病性大腸桿菌的外膜蛋白抗原物質(zhì)［如脂多糖(LPS)等］可通過免疫細(xì)胞表面模式識(shí)別受體(pattern recognization receptor，PRR)，如 Toll樣受體家族(Toll-like receptors，TLRs)、dectin-1和清道夫(scavenger)受體，激活細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號(hào)通路，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞表達(dá)和分泌免疫調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子從而調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)［16-18］。腸道上皮細(xì)胞表面也存在一些模式識(shí)別受體，如 TLRs［19］。沙門氏菌的 LPS是否也通過識(shí)別Caco-2細(xì)胞表面TLRs而誘導(dǎo)其表達(dá)免疫調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子，值得進(jìn)一步探討。

同時(shí)，本試驗(yàn)中單純應(yīng)用水溶性黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖刺激 Caco-2細(xì)胞后，促炎癥細(xì)胞因子 IL-1β和 TNF-α基因、趨化因子 IL-8基因及抗炎癥細(xì)胞因子IL-10和TGF-β基因mRNA表達(dá)水平的變化趨勢(shì)與腸炎沙門氏菌感染完全一致。具體原因可能與腸炎沙門氏菌感染腸道的外膜糖蛋白LPS與β-1，3/1，6-葡聚糖結(jié)構(gòu)相似，均屬微生物多糖，屬相同的病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular pattern，PAMP)，且識(shí)別細(xì)胞表面相同的模式識(shí)別受體 PRR，如TLRs、dectin-1 和 scavenger 受 體［20］。 然 而，β-1，3/1，6-葡聚糖是一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑，可刺激Caco-2細(xì)胞表達(dá)促炎癥因子和抗炎癥細(xì)胞因子，是一種增強(qiáng)腸道黏膜免疫抵抗力的表現(xiàn)，間接增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活性，而沙門氏菌的LPS誘發(fā)腸道上皮細(xì)胞表達(dá)炎癥細(xì)胞因子趨勢(shì)是一種免疫炎癥反應(yīng)，主要間接導(dǎo)致多形核細(xì)胞和白細(xì)胞聚集［4］。同樣，體內(nèi)和體外大量研究也表明，β-1，3/1，6-葡聚糖可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)或免疫細(xì)胞表達(dá)不同類型細(xì)胞因子［10］，從而增強(qiáng)宿主免疫機(jī)能。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，與單純腸炎沙門氏菌感染組相比，黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖和腸炎沙門氏菌共培養(yǎng)后，可顯著降低腸炎沙門氏菌誘發(fā)Caco-2細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞因子IL-1β和 TNF-α基因、趨化因子 IL-8基因 mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)，而抗炎癥細(xì)胞因子IL-10和TGF-β基因mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)。同樣，體內(nèi)試驗(yàn)也表明β-1，3/1，6-葡聚糖可通過下調(diào)炎癥細(xì)胞因子，如IL-1β和TNF-α基因及上調(diào)抗炎癥細(xì)胞因子IL-10基因、誘發(fā)免疫細(xì)胞呼吸爆發(fā)和吞噬細(xì)胞能力增強(qiáng)等來抵抗一些腸道致病菌，如沙門氏菌、致病性大腸桿菌感染［10，21］?？傊?，本試驗(yàn)結(jié)果說明，黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖對(duì)腸道致病菌感染誘發(fā)腸道黏膜免疫炎癥反應(yīng)有抑制作用。從Caco-2細(xì)胞受體介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑探討β-1，3/1，6-葡聚糖激活Caco-2細(xì)胞表達(dá)和分泌細(xì)胞因子而抵抗腸道致病菌感染的分子機(jī)制，是未來值得探討的內(nèi)容。

4 結(jié)論

黑酵母β-1，3/1，6-葡聚糖能通過下調(diào)促炎性細(xì)胞因子和上調(diào)抗炎性細(xì)胞因子的表達(dá)抑制腸炎沙門氏菌感染引起的腸道上皮細(xì)胞的免疫炎癥反應(yīng)。

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