全自動(dòng)血紅蛋白分析儀在地中海貧血篩查診斷中的應(yīng)用

馬升俊 肖永君 韋子斌 許成良

南寧市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西南寧 530031

地中海貧血簡(jiǎn)稱地貧，是一種常染色體顯性遺傳性疾病，是由于珠蛋白基因缺失或突變導(dǎo)致珠蛋白肽鏈合成障礙引起的溶血性貧血。本病以地中海沿岸國(guó)家和東南亞各國(guó)多見，在我國(guó)以廣東、廣西、海南等省區(qū)發(fā)病率較高，被世界衛(wèi)生組織列為危害人類健康的6種常見病之一[1]。目前，采用高效液相色譜法（HPLC）的全自動(dòng)血紅蛋白分析儀已越來越多地應(yīng)用于地貧篩查診斷[2]，為了解該儀器在地中海貧血篩查診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值，本研究對(duì)5738例受檢樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，并對(duì)篩查異常者進(jìn)行地貧基因檢測(cè)，其分析結(jié)果如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2012年6月在南寧市第二人民醫(yī)院生殖醫(yī)療中心就診，并接受地貧篩查診斷的育齡人群5738例，其中，男2498例，女3240例，年齡23～48歲。對(duì)篩查異常者進(jìn)行地貧基因檢測(cè)。所有受檢對(duì)象用EDTA-K2真空抗凝管采集靜脈血2 mL。

1.2 儀器與試劑

美國(guó)BIO-RAD 公司生產(chǎn)的VARIANTⅡ全自動(dòng)血紅蛋白分析儀及配套試劑；美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司提供的ABI9700 核酸擴(kuò)增儀；珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器公司的GSG-2000 核酸凝膠圖像分析系統(tǒng)；廣州達(dá)安基因公司提供的α、β地中海貧血基因診斷試劑盒；深圳亞能公司提供的α地中海貧血點(diǎn)突變?cè)噭┖小?/p>

1.3 方法

樣本采集后用VARIANTⅡ全自動(dòng)血紅蛋白分析儀進(jìn)行地貧篩查；將篩查結(jié)果異常的樣本，采用多重聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和反向斑點(diǎn)雜交法（RDB）進(jìn)行地貧基因檢測(cè)，檢測(cè) 6 種常見的 α 地貧 （--SEA、-α3.7、-α4.2缺失及 CS、QS、WS點(diǎn)突變）和 14種常見 β 地貧（-29M、-28M、17M、βEM、41-42M、43M、71-72M、654M、31M、IVSI-5M、IVSI-1M、27-28M、14-15M、IntM）。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

HbA2降低和（或）出現(xiàn)快速區(qū)帶初診為α地貧，HbA2和HbF 一項(xiàng)或兩項(xiàng)增高初診為β地貧；HbA2 和HbF 正常參考范圍為2.5%～3.5%和＜1.5%；以上任意一項(xiàng)或多項(xiàng)異常則判斷為地貧篩查異常。

2 結(jié)果

2.1 血紅蛋白分析篩查結(jié)果

5738例受檢者中，共篩查出830例異常，篩查檢出率為14.46%（830/5738）。按診斷標(biāo)準(zhǔn)，篩查擬診α地貧480例，占 57.83%（480/830），篩查檢出率為 8.37%（480/5738）。擬診β 地貧316例，占38.07%（316/830），篩查檢出率為5.51%（316/5738）。擬診 β 復(fù)合 α 地貧 11例，占 1.33%（11/830），篩查檢出率為0.19%（11/5738）。此外，檢出異常區(qū)帶HbH 13例，HbE 8例，HbQ 2例，分別占1.57%、0.96%和0.24%。830例地中海貧血篩查異常分布特點(diǎn)見表1。

2.2 地貧基因檢測(cè)結(jié)果

830例篩查異常者經(jīng)地貧基因分析，確診743例，確診率為89.52%（743/830）。基因診斷為 α 地貧的有413例，占55.59%（413/743），符合率為 86.04%（413/480）；診斷為 β 地貧313例，占 42.13%（313/743），符合率為 99.05%（313/316），有4例診斷為β復(fù)合α地貧；診斷為β復(fù)合α地貧17例，占2.29%（17/743），在初診的11例中有10例相符合，符合率為90.91%（10/11），1例基因診斷為β地貧；在13例出現(xiàn)HbH 區(qū)帶病例中基因診斷均為中間型α地貧；8例出現(xiàn)HbE 區(qū)帶經(jīng)基因診斷5例為βEM/N 地貧，3例為β復(fù)合α地貧；2例出現(xiàn)HbQ 區(qū)帶基因檢測(cè)均為-α4.2/αα。743例地貧基因型分布特點(diǎn)見表2。

3 討論

地中海貧血是屬于珠蛋白基因缺失或突變所造成的遺傳性疾病，按其受累基因分為α地貧和β地貧。地貧的篩查常用血紅蛋白電泳、紅細(xì)胞指數(shù)、紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)等方法，雖操作要求低，成本低廉，但又因其敏感性和特異性較低，人為影響因素較大，存在較多的漏診和誤診現(xiàn)象。臨床上對(duì)地貧的診斷和鑒別主要依靠血紅蛋白分析，但最后的確診和類型判斷常需要采用基因診斷[3]。本次研究用的全自動(dòng)血紅蛋白分析儀應(yīng)用HPLC 對(duì)人血紅蛋白HbA2 及HbF 進(jìn)行自動(dòng)化定量的測(cè)定，可將地貧初步分類為α地貧和 β 地貧，同時(shí)還可檢測(cè)出HbS、HbE、HbQ、HbJ 等異常血紅蛋白，是一個(gè)介于篩查與確診的試驗(yàn)；HPLC 法與堿性電泳法相比，具有快速高效、自動(dòng)化程序高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好等優(yōu)點(diǎn)[4]。

表2 743例地貧基因型分布特點(diǎn)

本次研究，以基因分析作為參考方法，采用HPLC 技術(shù)的全自動(dòng)血紅蛋白分析儀對(duì)5738例育齡人群進(jìn)行地貧篩查，共篩查出830例異常，篩查檢出率為14.46%，與盧秋維[5]報(bào)道的14.27%相近。其中，α地貧篩查檢出率為8.37%，經(jīng)地貧基因診斷符合率為86.04%，以輕型--SEA/αα地貧為主，其次為靜止型 -α3.7/αα地貧。對(duì)13例篩查出現(xiàn)HbH 區(qū)帶的樣本進(jìn)行基因檢測(cè)，結(jié)果均為中間型α地貧（-α3.7/--SEA 8例，-α4.2/--SEA2例，αCSα/--SEA2例，αWSα/--SEA1例）。研究結(jié)果表明，HPLC 法檢測(cè)血紅蛋白對(duì)中間型α地貧有較高的符合率，而對(duì)輕型和靜止型α地貧有較高漏診率；由于臨床上α地貧常表現(xiàn)為HbA2含量偏低或正常[6]，因此，通過HbA2結(jié)果降低對(duì)α地貧篩查起一定提示作用[7]。而HPLC法檢測(cè)血紅蛋白對(duì)β地貧是介于篩查與診斷之間的一個(gè)比較理想的方法，已被國(guó)際地貧協(xié)會(huì)推存為β地貧的常規(guī)篩查方法[8]。本次研究，β地貧篩查檢出率為5.51%，經(jīng)地貧基因診斷符合率為99.05%，篩查結(jié)果與基因診斷有良好的符合性。由于β地貧復(fù)合α地貧時(shí)，多表現(xiàn)為β地貧的特征[9]，本次研究，有4例基因診斷為β復(fù)合α地貧其篩查初診為β地貧；在8例篩查出HbE 區(qū)帶病例中，有3例診斷為 β 復(fù)合 α 地貧（βEM/N 復(fù)合-α3.7/αα 2例，βEM/N 復(fù)合--SEA/αα 1例），因此，對(duì)篩查出的β地貧在做基因診斷時(shí)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行α地貧基因檢測(cè)，以避免漏診。

本次研究結(jié)果表明，應(yīng)用HPLC 法的全自動(dòng)血紅蛋白分析儀對(duì)β地貧的診斷有良好的符合性，對(duì)α地貧有一定的提示作用，在沒有條件進(jìn)行地貧基因檢測(cè)的地區(qū)，該方法結(jié)合臨床資料、常規(guī)檢查，可用于地貧的篩查診斷。

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