玉郎傘總黃酮對(duì)洛伐他汀降血脂的增效作用研究

陳 麗， 黃仁彬， 張緒東， 郭又嘉， 付書婕， 張士軍*

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，廣西 南寧530021;2.柳州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)教研室，廣西 柳州545005)

目前，調(diào)脂降脂最有效并廣泛應(yīng)用的西藥是他汀類，但費(fèi)用高，在早期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究中發(fā)現(xiàn)他汀類藥物有一定肝臟毒性［1-2］。玉郎傘 (又名龍眼參)為蝶形花科植物疏葉崖豆Millettia pulchra(Dunn)Kurz var．laxior(Dunn)Z．Wei的塊根，是廣西壯族習(xí)用藥材［3］。課題組研究了玉郎傘總黃酮、粗多糖及水提物對(duì)食餌性高脂血癥大鼠血脂及血流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的影響，結(jié)果表明玉郎傘提取物能有效改善高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝紊亂現(xiàn)象，并有保肝護(hù)肝作用，其中以玉郎傘總黃酮的效果最明顯［4-5］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯(lián)合用藥是否能更有效調(diào)節(jié)血脂及減輕肝臟損傷進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料、對(duì)象與方法

1.1 藥品、試劑與儀器 洛伐他汀片 (揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)06122401);丙基硫氧嘧啶片(上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司，批號(hào):20070202);玉郎傘總黃酮，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室采用醇提水沉法自行提取制備;膽豬鹽、膽固醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)分別為F20061110、F20070517);天冬氧酸轉(zhuǎn)移酶 (AST)試劑盒、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶 (ALT)試劑盒 (均由南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)分別為20071128、20071120)。

AU600全自動(dòng)生化分析儀 (日本Olympus公司);TS-12F生物組織自動(dòng)脫水機(jī) (孝感市電子儀器廠);NP-B型生物組織包埋機(jī) (孝感市諾普電子科技有限公司);RM2235組織切片機(jī) (德國(guó)徠卡);NP-P型生物組織攤片烤片機(jī) (孝感市諾普電子科技有限公司);BX51顯微鏡 (日本Olympus公司)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 健康SD大鼠90只，體質(zhì)量180～200 g，雌雄各半，清潔級(jí)，購(gòu)至廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 (試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK桂2003-0003，試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證:SYXK桂2003-0005)。

1.3 高脂飼料的配制 將比例量的膽固醇(1%)、豬膽鹽 (0.2%)、丙基硫氧嘧啶(0.2%)、蛋黃粉 (3%)研碎混合后加入溫?zé)岬呢i油 (12%)中，再與基礎(chǔ)飼料 (83.6%)拌勻即可［6-8］。

1.4 模型建立與分組給藥 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，眼內(nèi)眥取血測(cè)定血清血脂水平，然后按血清總膽固醇 (TC)水平從低到高排列，查隨機(jī)數(shù)字表，抽取10只作為空白組，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)全程給予基礎(chǔ)飼料。剩余80只大鼠為高脂造模型組，喂飼高脂飼料6周進(jìn)行造模，6周后再次眼內(nèi)眥取血1 mL左右檢測(cè)大鼠血脂水平并與空白組進(jìn)行比較，結(jié)果高脂造模型組血脂水平顯著性升高，說明造模成功。

造模成功后將高脂造模型組大鼠按TC水平從低到高排列，查隨機(jī)數(shù)字表分成8組:高脂模型組、洛伐他汀組、玉郎傘總黃酮高劑量組、玉郎傘總黃酮中劑量組、玉郎傘總黃酮低劑量組、玉郎傘總黃酮高劑量+洛伐他汀組、玉郎傘總黃酮中劑量+洛伐他汀組、玉郎傘總黃酮低劑量+洛伐他汀組，每組10只，雌雄各半?？瞻捉M和高脂模型組均灌服空白溶劑15 mL/(kg·d);洛伐他汀組灌服洛伐他汀3 mg/(kg·d);玉郎傘總黃酮高、中、低劑量組分別灌服玉郎傘總黃酮100、50、25 mg/(kg·d);玉郎傘總黃酮高、中、低劑量+洛伐他汀組分別在灌服玉郎傘總黃酮高、中、低劑量的同時(shí)加服洛伐他汀3 mg/(kg·d);均連續(xù)用藥14 d。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 13.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (± s)表示。組間分析采用One-Way ANOVA兩兩比較得到相應(yīng)的P值，P＜0.05或P＜0.01差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 給藥2周后各組大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的變化 (n=10， ± s)Tab.1 Changes of serum TC，TG，HDL-C，LDL-C levels after 2-week treatment in each group(n=10， ± s)

表1 給藥2周后各組大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的變化 (n=10， ± s)Tab.1 Changes of serum TC，TG，HDL-C，LDL-C levels after 2-week treatment in each group(n=10， ± s)

注:與空白組比較，＊＊P ＜0.01;與高脂模型組比較，##P ＜0.01;與洛伐他汀組比較，△P＜0.05，△△P ＜0.01。

組 別 每日劑量TC/(mmol·L － 1)TG/(mmol·L －1)HDL-C/(mmol·L － 1)LDL-C/(mmol·L －1)空白組 15 mL/kg 1.62±0.35## 0.50±0.02## 1.47±0.22## 2.84±0.36##高脂模型組 15 mL/kg 3.32±0.51＊＊ 0.89±0.23＊＊△△ 0.55±0.25＊＊ 5.57±0.41＊＊△△洛伐他汀組 3 mg/kg 1.81 ±0.23＊＊## 0.55 ±0.02＊＊## 1.11 ±0.35＊＊## 3.46 ±0.16＊＊##玉郎傘總黃酮高劑量組 100 mg/kg 1.94 ±0.22＊＊##△△ 0.57 ±0.02＊＊## 1.04 ±0.21＊＊##△△ 3.22 ±0.07＊＊##△△玉郎傘總黃酮中劑量組 50 mg/kg 1.98 ±0.32＊＊##△△ 0.56 ±0.11＊＊## 1.00 ±0.14＊＊##△△ 3.41 ±0.23＊＊##玉郎傘總黃酮低劑量組 25 mg/kg 2.03 ±0.26＊＊##△△ 0.62 ±0.03＊＊##△△ 0.98 ±0.26＊＊##△△ 3.69 ±0.18＊＊##△△玉郎傘總黃酮高劑量 +洛伐他汀組 (100+3)mg/kg 1.74 ±0.14＊＊##△△ 0.52 ±0.07＊＊##△△ 1.24 ±0.12＊＊##△△ 3.20 ±0.34＊＊##△△玉郎傘總黃酮中劑量+洛伐他汀組 (50+3)mg/kg 1.80±0.51＊＊## 0.61±0.05＊＊##△△ 1.07±0.20＊＊##△ 3.35±0.22＊＊##△玉郎傘總黃酮低劑量+洛伐他汀組 (25+3)mg/kg 1.90±0.24＊＊##△△ 0.65±0.08＊＊##△△ 0.96±0.09＊＊##△△ 3.58±0.46＊＊##△△

表2 給藥2周后各組大鼠AST、ALT、AST/ALT、肝質(zhì)量、肝臟系數(shù)的變化 (n=10)Tab.2 Changes of AST，ALT，AST/ALT，liver weight and liver coefficient after 2-week treatment in each group(n=10)

2.1 高脂血癥大鼠血清TC、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白 (HDL-C)和低密度脂蛋白 (LDL-C)的變化 給藥14 d后處死大鼠，處死前1 d晚8時(shí)起禁食不禁水，次日晨8時(shí)稱體質(zhì)量，用20%烏拉坦溶液腹腔麻醉腹主動(dòng)脈取血，裝入不加抗凝劑的離心管中，4℃靜置10min后分離血清，用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血脂水平。與高脂模型組比較，各用藥組TC、TG、LDL-C均顯著降低、HDL-C顯著升高 (P＜0.01);玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯(lián)合用藥的效果更好，其中玉郎傘總黃酮高劑量+洛伐他汀組的TC、TG、LDL-C下降和HDL-C升高比洛伐他汀組更明顯。結(jié)果見表1。

2.2 高脂血癥大鼠AST、ALT、AST/ALT、肝質(zhì)量和肝臟系數(shù)的變化 將腹主動(dòng)脈抽血后的大鼠迅速剝離肝臟，用4℃生理鹽水將肝臟漂洗干凈，吸干表面水分后稱質(zhì)量，計(jì)算肝臟系數(shù)，肝臟系數(shù)=AST、ALT的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。與高脂模型組比較，各用藥組AST、ALT、AST/ALT、肝質(zhì)量和肝臟系數(shù)顯著降低 (P＜0.01);玉郎傘總黃酮高、中劑量+洛伐他汀組的降低幅度超過洛伐他汀組 (P＜0.01)，結(jié)果見表2。

2.3 肝組織病理學(xué)變化 剝離的肝臟比較色澤、外觀，稱質(zhì)量后用HE染色法觀察肝組織病理學(xué)變化。肉眼觀察:空白組大鼠肝臟外觀呈鮮紅色，表面光滑，無異常變化;高脂模型組大鼠肝臟外觀呈黃褐色，體積明顯增大，表面不平，包膜緊張，質(zhì)量增加，切面油膩，表現(xiàn)為典型肝臟脂肪變性;各用藥組大鼠肝臟外觀與高脂模型組比較有不同程度的改善，其中玉郎傘總黃酮高劑量+洛伐他汀組大鼠的肝臟色澤基本正常，呈暗紅色，形態(tài)接近空白組。光鏡觀察:空白組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索排列整齊，未見脂肪變性和壞死;高脂模型組肝臟病理學(xué)損傷明顯，表現(xiàn)為肝索排列紊亂，肝細(xì)胞體積增大，肝細(xì)胞腫脹，肝細(xì)胞脂肪變性，以小空泡脂肪變?yōu)橹?，肝竇受壓變窄甚至消失;各用藥組與高脂模型組比較脂變有不同程度的減輕，其中洛伐他汀組肝細(xì)胞脂肪變性程度雖有減輕，但肝小葉中央靜脈周圍仍有濁腫變性的肝細(xì)胞，肝細(xì)胞內(nèi)可見細(xì)小脂肪滴;用藥組中以玉郎傘總黃酮高、中劑量+洛伐他汀組肝損害程度最輕，這兩組大鼠肝小葉的組織結(jié)構(gòu)基本接近空白組，肝細(xì)胞索排列整齊，肝細(xì)胞內(nèi)無明顯空泡及疏松，肝細(xì)胞內(nèi)未見脂肪滴。

3 討論

他汀類 (statins)藥物是目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的降脂藥物，并具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能、抑制血栓形成等重要的非調(diào)脂作用。其常見不良反應(yīng)如皮疹、頭痛、胃腸不適等，相對(duì)輕微，多為一過性［9］;最嚴(yán)重的不良反應(yīng)為肝損害和肌毒性，常見于開始用藥或增大劑量的2周內(nèi)，絕大部分為孤立性無癥狀性ALT增高［10］。課題組前期研究了玉郎傘總黃酮、粗多糖及水提物對(duì)食餌性高脂血癥大鼠血脂及血流變學(xué)等各項(xiàng)指標(biāo)的影響，結(jié)果表明玉郎傘提取物中的總黃酮改善高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝紊亂現(xiàn)象最有效，并且還有保肝護(hù)肝的作用。本實(shí)驗(yàn)對(duì)玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯(lián)合用藥是否能更有效的調(diào)節(jié)血脂及減輕肝臟損傷進(jìn)行了探討，結(jié)果表明聯(lián)合用藥的效果比兩藥單獨(dú)使用的效果更好，不僅血脂紊亂現(xiàn)象得到明顯改善，而且對(duì)肝臟的損害程度也顯著下降。

ALT主要存于肝細(xì)胞漿中，肝病早期或急性病變時(shí)，肝臟輕度受損，肝細(xì)胞損傷主要是細(xì)胞膜通透性改變，而肝細(xì)胞線粒體保持相對(duì)完整，故胞漿酶釋放較多，使血液中ALT活力明顯升高，導(dǎo)致肝功能下降;當(dāng)肝臟嚴(yán)重受損時(shí)，肝細(xì)胞線粒體進(jìn)一步遭到破壞，肝中AST大量釋放進(jìn)入血液，使血液AST活力明顯升高［11］。所以肝臟細(xì)胞受損時(shí)，血清AST和ALT升高，通過檢測(cè)血清ALT和AST活性可反映肝細(xì)胞損害的程度及肝細(xì)胞的修復(fù)情況［12］，在本實(shí)驗(yàn)中，高脂血癥大鼠血清 AST和ALT顯著升高說明肝功能受到損傷。洛伐他汀組用藥14 d后，血清AST和ALT不僅沒有下降反而升高比高脂模型組顯著 (P＜0.01)，肝組織病理學(xué)顯示肝細(xì)胞仍有脂肪變性情況，肝細(xì)胞內(nèi)有細(xì)小脂肪滴，這說明洛伐他汀在發(fā)揮降血脂作用的同時(shí)對(duì)肝臟具有一定的損傷作用。而玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯(lián)合使用不僅能有效改善脂質(zhì)紊亂現(xiàn)象，而且能降低AST、ALT及AST/ALT比值，減輕肝細(xì)胞損傷，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，效果比單用洛伐他汀好。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明玉郎傘總黃酮與洛伐他汀合用對(duì)高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝紊亂有顯著的減毒增效作用。

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