不同促滲劑對蛇床子軟膏透皮吸收特性的影響

周 開，岑銳標(biāo)，陳伯從

(廣東省佛山市中醫(yī)院藥劑科，廣東 佛山 528000)

蛇床子為傘形科植物蛇床Cnidium monnieri(L.)Cuss.的干燥成熟果實，具有解毒殺蟲、燥濕祛風(fēng)功效，主要用于外治外陰濕疹、婦人陰癢、濕疹疥癬等。蛇床子素是蛇床子提取物中主要的香豆素類有效成分，具有抗高血壓、抗凝血、抗菌、殺蟲、抗炎鎮(zhèn)痛等作用[1]。沈琦等[2]報道，高良姜油對5－氟尿嘧啶的促滲作用顯著大于氮酮，具有較好的開發(fā)價值。參考文獻(xiàn)[3－5]，擬以離體裸鼠腹部皮膚為屏障，采用改良擴(kuò)散池法研究氮酮、油酸和高良姜揮發(fā)油對蛇床子軟膏中蛇床子素經(jīng)皮吸收的影響，為蛇床子外用制劑的開發(fā)優(yōu)化提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 試驗材料

Waters高效液相色譜儀(515泵，2487紫外檢測器，美國waters公司);N3000色譜工作站(浙江大學(xué));AUW120型電子分析天平;TK－12A型透皮擴(kuò)散試驗儀(上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司);KQ5200DE型數(shù)控超聲清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。蛇床子藥材(廣州致信中藥飲片有限公司，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)李薇教授鑒定為正品);蛇床子素對照品(購自廣東省藥品檢驗所，批號為110822－200905);高良姜油、硬脂酸、蓖麻油、液體石蠟、三乙醇胺、乳化劑OP、甘油、氮酮(Azone)、油酸(AO)、乙醇均購于廣州市東征化玻公司，甲醇均為色譜級，水為去離子雙蒸水。裸鼠，6～7周齡，體重(80±15)g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物衛(wèi)生許可證號SCXK(粵)2008－0020，粵監(jiān)證字2008A002。

2 方法與結(jié)果

2.1 蛇床子膏制備

取蛇床子500 g，加10倍量75%乙醇，加熱回流提取2次，每次 1.5 h，合并醇提液減壓濃縮至相對密度 1.20～1.25(50℃)，得蛇床子提取物。將此提取物分成4份，分別加入三乙醇胺、乳化劑OP、甘油適量，保溫至80℃，為水相;另取硬脂酸、蓖麻油、液體石蠟適量加熱保溫至80℃，為油相;其中3份分別加入處方比例3%的氮酮、油酸和高良姜油，再將油水兩相混合，攪拌至冷凝，即得不同促滲劑的蛇床子軟膏。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 蛇床子素含量測定(高效液相色譜法)

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫 30 ℃，流動相為甲醇 －水(80∶20)，檢測波長 322 nm，流速 1 mL/min，進(jìn)樣量 10 μL。ODS C18保護(hù)柱連接于分析柱前。理論塔板數(shù)按蛇床子素計應(yīng)不小于3 000。在上述色譜條件下，蛇床子素與經(jīng)皮滲透樣品峰形良好，且陰性無干擾。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察:精密稱取蛇床子素對照品10 mg，用乙醇溶解并定容至100 mL，配制成0.1 g/L的貯備液。取貯備液，加乙醇，分別制成質(zhì)量濃度為 0.1，0.5，2.5，7.5，20.0 μg/mL 的系列對照品溶液，按擬訂色譜條件每個樣品重復(fù)進(jìn)樣3次，以質(zhì)量濃度(X)對吸收峰面積(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=7 020.68X+160.37，r=0.999 6。結(jié)果表明，蛇床子素質(zhì)量濃度在0.1～20.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(2.5 μg/mL)10 μL，分別于1 d內(nèi)重復(fù)測定6次，以峰面積計算，日內(nèi)精密度的RSD為1.01%;于6 d內(nèi)每天測定1次，以峰面積計算，日間精密度的RSD為1.58%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 2，4，6，8，10，12，18，24，36 h時依法測定。結(jié)果蛇床子素含量的RSD為1.83%(n=9)，表明供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

回收率試驗:取空白接收液9份，分別加入一定量的蛇床子素對照品，制成低、中、高質(zhì)量濃度(0.5，7.5，20.0 μg/mL)的系列溶液，每個質(zhì)量濃度制備3份，測定峰面積，計算回收率。結(jié)果低、中、高質(zhì)量濃度回收率的RSD分別為 2.35%，2.14%，1.96%。

2.3 體外透皮試驗

離體皮膚制備:將裸鼠脫頸椎處死，立即剝?nèi)「共科つw，將取下的皮膚平鋪在干凈的玻璃板上，角質(zhì)層朝下。用載玻片小心刮去皮下脂肪層和結(jié)締組織，用生理鹽水沖洗至無渾濁，置－20℃冰箱保存。試驗時目視檢視皮膚的完整性，不能有任何破損。

試驗操作:取離體裸鼠腹皮，常溫下解凍，以生理鹽水洗凈，用濾紙吸干表面水分，將處理好的皮膚固定于擴(kuò)散池的供體池和接收池之間，角質(zhì)層面向供體池，接收池內(nèi)放置磁力攪拌子。接收池中加入30%乙醇－70%生理鹽水作為接收介質(zhì)，并排出氣泡，在供體池中離體鼠皮表面均勻涂抹不同促滲劑的蛇床子軟膏。水浴保持(32±0.5)℃，恒速200 r/min。透皮試驗開始穩(wěn)定20 min后，于 1，2，4，6，8，10，12，24 h 時從接收池取樣 1 mL，同時補充等體積同溫的空白接收液。將所取樣品液用0.45 μm微孔濾膜過濾，續(xù)濾液采用2.2.1項下方法分別測定接收液中蛇床子素的含量。以其累積滲透量和增滲倍數(shù)(ER)為參考量，考察促滲劑對蛇床子素透皮吸收特性的影響。

數(shù)據(jù)處理:將得到的數(shù)據(jù)依照下列公式處理，求得累積滲透量、透皮速率和增滲倍數(shù)。

Q=(VCn+∑CiVi)/A(i=1，2，……n－1)，JS=dQ/dt×A(即是Q－t方程斜率)，ER=J/J0。式中Qn為t時間藥物的累積透過量(μg/cm)，A為滲透面積(cm2)，Cn為t時間濃度測量值(μg/mL)，Ci為t時間以前濃度測量值(μg/mL)，V為接收液總體積(mL)，Vi為每次取樣體積(mL);J為透皮速率常數(shù)[μg/(cm·h)]，J0為未加促滲劑的透皮速率常數(shù)[μg/(cm·h)]。

表1 不同促滲劑對蛇床子軟膏透皮特性的影響

圖2 不同促滲劑對蛇床子軟膏經(jīng)皮吸收的影響

結(jié)果:按上述試驗方法進(jìn)行操作、分析，結(jié)果見表1及圖2。可見，與不加滲透促進(jìn)劑組(FCO組)相較，3種促滲劑對蛇床子素均有較好的促進(jìn)滲透作用，尤以3%高良姜油效果最佳，J達(dá)到13.565 μg/(cm·h)，ER為 3.80。因此，蛇床子提取物和高良姜油合用，可以促進(jìn)蛇床子素的經(jīng)皮吸收，為二者的配伍提供了理論依據(jù)。

3 討論

軟膏劑中藥物的作用必須經(jīng)過釋放、穿透和吸收進(jìn)入血液循環(huán)3個階段，穿透階段通常成為藥物吸收的限速階段。蛇床子素為香豆素類衍生物，相對分子質(zhì)量為224，具有一定的透皮性能，但透皮速度受基質(zhì)因素和角質(zhì)層限制。為了更好地發(fā)揮其藥效，加入適量的透皮促進(jìn)劑是必要的。近年來選用氮酮較普遍，其對人體黏膜產(chǎn)生的刺激最低，有效濃度也低，使用濃度一般在1% ～3%，對親水性及親油性藥物均有促進(jìn)作用[6]。油酸可破壞角質(zhì)層類脂膜結(jié)構(gòu)及在角質(zhì)層細(xì)胞間形成腔隙，促進(jìn)藥物滲透[7]。故選用二者作透皮促進(jìn)劑參考，考察高良姜油對蛇床子素的透皮促進(jìn)作用。

中藥揮發(fā)油作為透皮吸收促進(jìn)劑，近年來已越來越受到重視，薄荷腦、冰片常用作中藥經(jīng)皮制劑的促滲劑。本研究結(jié)果表明，高良姜揮發(fā)油對蛇床子素的透皮吸收有較好的促進(jìn)作用，促滲作用較相同劑量的氮酮和油酸為優(yōu)，說明高良姜和蛇床子配伍外用是合理的。

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